淀粉样β蛋白42及其亚单位疫苗预防接种对APPSWE转基因小鼠学习记忆能力的保护作用

背景研究表明,淀粉样β蛋白42疫苗接种可以诱导阿尔茨海默病转基因小鼠产生特异性抗淀粉样β蛋白42抗体,清除其脑内的淀粉样β蛋白沉积,改善其学习记忆能力,在对阿尔茨海默病的防治中具有良好的应用前景.目的研究淀粉样β蛋白42及其亚单位肽疫苗预防接种对APPSWE转基因小鼠学习记忆能力的影响.设计以动物为研究对象,完全随机分组实验.单位一所大学医学院人体解剖学教研室脑研究室.材料实验于2003-04/2004-02在中山大学实验动物中心和人体解剖学教研室脑研究室进行.5月龄APPSWE转基因小鼠32只,购自美国Taconic company,在本室繁育成功.实验随机分成对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组,每组8只.干预淀粉样β蛋白42.及其亚单位疫苗配伍MF59佐剂,基础接种采用皮下注射,加强接种采用鼻黏膜免疫,共接种8个月.疫苗接种前用Y迷宫作行为学测试,接种后用Morris水迷宫作行为学测试.主要观察指标空间学习记忆能力,平均逃避潜伏期,穿过平台次数,第一象限游泳距离百分率,20%边缘区游泳距离百分率.结果疫苗接种前对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组APPSWE转基因小鼠Y迷宫作行为学测试10次中正确反应的次数分别为7.50±0.81,7.06±0.71,7.19±0.91,7.50±0.86,各组小鼠间的空间学习记忆能力差异无显著性意义(P＞0.05);疫苗接种8个月后,对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组小鼠定位航行试验8个单元训练的平均逃避潜伏期分别为(67.3±2.8)s,(23.6±1.6)s,(26.4±2.0)s和(36.5±2.2)s,淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组较对照组明显缩短,淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组之间差异无显著性意义(P＞0.05);对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组小鼠空间探索试验穿过平台次数分别为0.71±0.29,8.14±1.37,7.28±1.34和3.29±0.67,第一象限游泳距离百分率分别为(24.3±2.9)%,(50.6±11.6)%,(49.9±9.3)%和(35.4±7.0)%,20%边缘区游泳距离百分率分别为(46.4±7.3)%,(11.6±3.9)%,(14.4±2.6)%和(25.8±3.3)%,淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组较对照组穿过平台次数显著增多、第一象限游泳距离百分率升高和20%边缘区游泳距离百分率降低,其中淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组比较差异无显著性意义(P＜0.05).结论淀粉样β蛋白42及其亚单位疫苗预防接种可有效减轻APPSWE转基因小鼠学习记忆能力的损害.     

运动训练对小鼠脑局灶缺血后大脑皮质一氧化氮合酶的影响

目的：研究运动训练对小鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）后大脑皮质一氧化氮合酶（NOS）的影响。方法：30只雄性C57 BL/6J鼠用Bederson的方法，建立MCAO模型。将MCAO后小鼠随机分为运动组和对照组，每组均15只鼠。运动组：跑笼训练共90d；对照组：跑笼固定不转。分别在MCAO后15d、45d、90d，观察两组小鼠大脑皮质NOS数的改变。结果：MCAO后15d，两组皮质缺血侧、正常侧NOS阳性细胞数差异无显著性意义（t=2．1，0．2，P〉0．05）。45d，运动组比对照组在皮质正常侧NOS阳性细胞数显著增高（t=3．55，P〈0．05），缺血侧差异无显著性意义（t=0．26，P〉0．05）。90d，运动组与对照组比较，NOS阳性细胞计数在正常侧皮质均差异有显著性意义（P〈0．01），而缺血侧各组之间差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：运动训练可增加小鼠MCAO后大脑正常侧皮层NOS阳性细胞的数量，对脑的可塑性有一定促讲作用.     

大鼠性别及去势对基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元形态与数量及学习记忆功能的影响

目的:比较正常雌、雄大鼠以及去势大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的变化,为阐明学习记忆的神经内分泌学特点提供形态学资料。方法:实验于2001-03/2002-03在广州中山大学基础医学院人体解剖教研室脑研究室完成。将60只成年健康SD大鼠随机分为6组,正常雌性组、去卵巢2周组、去卵巢4周组、正常雄性组、去睾丸2周组、去睾丸4周组,每组10只。应用组织化学染色法观察各组大鼠基底前脑的内侧隔核、斜角带垂直支及斜角带水平支的一氧化氮合酶阳性神经元形态和数目。结果:60只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元形态变化:组织化学染色法显示一氧化氮合酶阳性神经元的胞体和突起均呈紫蓝色,胞体多为圆形、椭圆形、双极形或多极形,常由胞体发出1～3支初级树突,但轴突未被染色。各组大鼠一氧化氮合酶阳性神经元的胞体和树突均相似。②各组大鼠基底前脑的内侧隔核、斜角带垂直支及斜角带水平支的一氧化氮合酶阳性神经元数目:经组织化学染色法观察,正常雄性、雌性大鼠内侧隔核、斜角带垂直支及水平支的一氧化氮合酶阳性神经元数基本一致犤(38.5±4.0)个/切片,(33.0±3.1)个/切片;(45.5±6.0)个/切片,(42.8±4.9)个/切片;(63.8±8.1)个/切片,(58.9±7.8)个/切片,(P>0.05)犦。去睾丸2周组内侧隔核、斜角带垂直支的一氧化氮合酶阳性神经元数明显高于去卵巢2周组犤(45.8±5.8)个/切片,(18.9±3.8)个/切片;(58.4±7.2)个/切片,(28.3±5.0)个/切片,(P<0.01)犦;而去睾丸2周组斜角带水平支的一氧化氮合酶阳性神经元数高于去卵巢2周组犤(60.3±8.5)个/切片,(45.8±6.2)个/切片,(P<0.05)犦。去睾丸4周组内侧隔核、斜角带垂直支及水平支的一氧化氮合酶阳性神经元数依然高于去卵巢4周组犤(35.1±5.5)个/切片,(23.1±4.2)个/切片;(45.7±8.0)个/切片,(27.8±6.5)个/切片;(53.5±6.3)个/切片,(40.2±7.2)个/切片,(P<0.05)犦。结论:不论去势与否,一氧化氮合酶阳性神经元脑体和树突的形态变化不存在性别差异。正常雌雄大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元数不存在性别差异,但去势后一氧化氮合酶阳性神经元数则出现性别差异。这种差异不仅与卵巢雌激素和睾丸雄激素在雌雄个体中所发挥的不同作用密切相关,而且还有可能是促使雌雄个体表现出特征性的学习记忆功能性别差异的形态学基础。     

大鼠脑缺血区局部炎症反应的实验探查

目的:研究脑缺血区血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达和单核/巨噬细胞浸润与脑缺血的病理联系。方法:运用免疫组化染色方法和局部脑缺血/再灌流模型探查40只SD大鼠脑缺血区VCAM-1阳性血管和单核/巨噬细胞的数量变化及其变化发生的时程。结果:大鼠脑缺血区微血管内皮细胞VCAM-1表达发生在脑缺血1h,并在16h的再灌流期间,其表达逐渐增加,显示明显的时间依赖性变化。单核/巨噬细胞在脑缺血区的浸润发生在脑缺血1h/再灌流2h,并随再灌流时间的延长,其数量逐渐增加,在再灌流16h,其数量最多,其浸润也显示明显的时间依赖性变化。脑缺血区血管内皮细胞VCAM-1表达的时相与单核/巨噬细胞浸润的时相基本一致。结论:脑缺血诱导缺血性血管内皮细胞表达VCAM-1和诱导单核/巨噬细胞在脑缺血区浸润。此结果提示VCAM-1和单核/巨噬细胞可能参与缺血性脑损伤的病理过程。     

粘附分子表达和巨噬细胞浸润在缺血皮质和基底节区分布的比较

目的:比较大脑基底节区和皮质区对大脑局部缺血/再灌流损伤反应的敏感性。方法:运用免疫组化和酶组化方法对36只SD大鼠局部脑缺血区血管内皮细胞粘附分子VCAM-1的表达和单核/巨噬细胞的浸润概况进行了比较研究。结果:大脑皮质缺血区血管内皮细胞VCAM-1的表达发生于脑缺血1h,表达高峰发生于脑缺血1h/再灌流16h;而在缺血侧基底节区,其表达高峰则发生在脑缺血1h/再灌流4h。单核/巨噬细胞的浸润,在皮质缺血区发生在脑缺血1h/再灌流8h,再灌流16h达到高峰;在缺血侧基底节区,其浸润发生在脑缺血1h,浸润高峰则在脑缺血1h/再灌流8h。结论:大脑基底节区血管内皮细胞粘附分子的表达和单核/巨噬细胞的浸润均较皮质区显著。提示基底节区对脑缺血的反应比皮质区敏感。     

硫化银染重金属离子的组织学方法在脑组织的应

改良的 Timm 硫化银方法能使大脑组织的重金属染色呈特异性分布.海马结构和纹状体染色最深,垂体和杏仁核染色次之。海马结构内的染色呈典型的带状模式,并和某些特定的神经终末成份分布相一致。本文讨论了硫化银染色方法用于研究在损伤、病变或某些操作后海马结构内特定神经成份可塑性变化的可能性.     

臂丛节前损伤晚期脊髓前角的病理变化

目的：探讨臂丛节前损伤晚期，脊髓前角运动神经元及其周围结构的病理变化。方法：行右侧C7神经根撕脱术，分别于损伤后6、8、10周取大鼠脊髓C7节段切片，行nNOS、GFAP免疫组化；NADPH—d酶组化加中性红复染和Nissl染色。结果：损伤侧前角运动神经元nNOS表达持续下降直至消失（6、8、10周分别为：24．35％、20．44％、1．83％）；存活率下降以10周最显著（6、8、10周分别为：43．63％、25．14％、20．43％）；损伤侧胶质反应比正常侧强，损伤侧白质胶质反应比灰质强；损伤后10周前角运动神经元周围GFAP阳性反应面积明显大于正常侧前角（126．17vs67.88）。存活率与nNOS阳性率呈正相关关系γ=0．704，P=0．000。与GFAP反应强度不相关γ=-0．006，P=0．987。结论：臂丛节前损伤所致快速大量的运动神经元死亡开始于损伤后8周，此时nNOS减少甚至消失；并有大量胶质细胞的增生。提示临床治疗臂丛节前损伤须早于损伤后6周。     

成人海马内Nestin免疫阳性细胞的分布

为探讨成人海马内 Nestin免疫阳性细胞的分布 ,本实验采用 331B、10 C2、Rat40 1、NSE、GFAP、Vimentin抗体对成人海马了进行免疫组织化学研究。结果显示 ,海马内 Nestin免疫阳性细胞可分为三类 :一类细胞位于门区及齿状回颗粒下层 ,胞体为卵圆形 ,无突起 ,胞浆深染 ,此类细胞不与 NSE呈交叉反应 ;第二类细胞也位于门区及齿状回颗粒下层 ,胞体较小发出少量放射状突起 ,与 GFAP及 Vimentin抗体无交叉反应 ,在海马裂及海马伞中也存在少量的此类神经细胞 ;第三类为 Nestin免疫阳性细胞 ,体积较大 ,形态与星形胶质细胞相似 ,并分别位于齿状回分子层及颗粒层 ,其突起常常跨越齿状回颗粒细胞层。Nestin免疫阳性神经细胞不被 GF AP抗体标记。成人海马内未见 Vimentin免疫阳性细胞。结论 :人海马内存在神经前体细胞及放射状胶质样Nestin免疫阳性细胞     

突触素在大鼠嗅球的分布

用免疫组织化学方法观察突触素在大鼠嗅球各层的分布。结果显示：小球层染色最深，其次为分子层，再其次是颗粒层，僧帽细胞胞体周围未见有明显阳性颗粒，纤维层和髓层不着色。     

侧脑室注射秋水仙素诱导大鼠脑巢蛋白的表达

目的　探讨侧脑室注射秋水仙素后大鼠脑巢蛋白 (nestin)的表达情况。方法　 4 0只成年SD大鼠侧脑室注射秋水仙素 10 μg/ μl,分别于术后 1d、3d、5d、7d和 14d处死动物。用nestin和胶质细胞纤维酸性蛋白 (GFAP)标志物免疫组织化学方法观察nestin的表达。结果　秋水仙素注射后的 3d、5d和 7d在尾壳核、胼胝体、外侧隔和嗅结节岛出现nestin阳性细胞 ,且呈GFAP免疫阳性 ,以尾壳核的反应最为明显。在尾壳核nestin阳性细胞在秋水仙素注射后的第 3d开始出现 ,术后 5d反应区域面积和单位面积的nestin阳性细胞密度达到最大值 ,然后逐渐减少 ;非注射侧的nestin应区域面积和阳性细胞数均较注射侧少 ;术后 14d组nestin阳性细胞缺失。结论　秋水仙素可诱导脑的胶质细胞一过性表达nestin ,其表达的意义和机制有待进一步研究