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重组弓形虫GRA8的表达及其诱导的免疫应答 总被引:1,自引:0,他引:1
目的表达和纯化弓形虫RH株GRA8的截短型片段,分析其诱导的免疫应答。方法从重组克隆pMD18-GRA8中切取GRA8的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达;大量诱导表达GRA8,金属螯合层析予以纯化,将纯化蛋白免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答。结果GRA8基因的特异片段被亚克隆到原核表达质粒pET-23a(+),在大肠杆菌中未见GRA8的明显表达;表达的蛋白经金属螯合层析获得纯化;纯化蛋白能被弓形虫感染兔血清识别。结论成功构建了GRA8的原核重组表达质粒,纯化的蛋白具有良好的抗原性。 相似文献
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日本血吸虫新基因的克隆及分析 总被引:3,自引:1,他引:2
目的:克隆并分析日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)新基因,提供有效的疫苗候选分子。方法:用Sj雄虫可溶性抗原免疫家兔血清为探针筛选Sj成虫cDNA文库,将所获阳性克隆的插入片断进行PCR扩增并测序,通过互联网NCBI GenBank和蛋白质分析软件进行分析。结果:共筛选得11个阳性克隆,经分析有2个新基因,分别是Sj-P8(GenBank注册号AF517843)和Sj肌球蛋白cDNA序列(GenBank注册号AY770506),分别编码含75个氨基酸的跨膜蛋白和含212个氨基酸的蛋白片断。结论:Sj-P8和Sj肌球蛋白cDNA序列可能为日本血吸虫疫苗的研究提供有价值的材料。 相似文献
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胱抑素C与早期肾功能损害的关系 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 探讨内源性标志物血清胱抑素C(cystatin C,cys C)在评价早期肾功能损害中的价值。方法 收集住院的慢性肾病患者108例,按内生肌酐清除率(Ccr)值分早期肾功能不全组、中晚期肾功能不全组,40例正常对照组取自本院体检健康人群。乳胶颗粒增强免疫透射比浊分析法( PETIA) 测定血清cys C的浓度,肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐(Scr)浓度,酶偶联法测定尿素氮(BUN)。比较cys C、Scr、BUN与Ccr的相关性及其阳性检出率。采用似然比(LR)评价cys C的可靠性。结果 对照组、早期肾功能不全组、中晚期肾功能不全组的血清cys C分别为(0.63±0.41)、(2.59±1.32)、(7.13±1.68)mg/L。cys C、Scr 、BUN与Ccr均呈显著相关( P < 0.05),以cys C与Ccr的相关程度最密切。血清cys C的阳性检出率最高,LR以血清cys C为最佳。结论 血清cys C是一个敏感的反映肾小球滤过功能的指标,对早期诊断肾功能损害具有重要价值。 相似文献
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目的 研究在大肠杆菌中表达的日本血吸虫Calpain蛋白的免疫原性及其在日本血吸虫病诊断上的应用。方 法用重组Calpain蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法测定特异性IgG抗体的动态变化及其IgG亚型(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3)产生特征;同时用重组Calpain蛋白作为诊断抗原,粪检血吸虫病阳性患者血清作为一抗,肝吸虫阳性患者血清作为考核交叉反应血清。结果 重组Calpain抗原免疫小鼠后,产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体,免疫4周IgG类抗体达到高峰,与对照组鼠相比较免疫鼠血清中IgG1,IgG2a,IgG2b特异性抗体也显著上升;Calpain重组抗原血清检测日本血吸虫和粪检的符合率为100%,粪检阳性EPG低的个体抗Calpain抗体滴度高,EPG高的患者抗Calpain抗体滴度反而低,与肝吸虫的交叉反应率为37%。结论 日本血吸虫Calpain是一个具有免疫原性的蛋白,能够激发宿主产生高水平的免疫球蛋白,能够敏感地测定日本血吸虫的感染,提示Calpain可以发展成为日本血吸虫病的诊断抗原和日本血吸虫疫苗候选分子。 相似文献
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SARS病毒N蛋白真核表达质粒构建及诱导的体液免疫 总被引:2,自引:0,他引:2
目的构建SARS病毒核衣壳蛋白(N)的真核表达质粒,并研究其在小鼠体内诱导的体液免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS病毒N蛋白基因片段,定向克隆入真核表达栽体pVAC,构建pVAC-N重组质粒;大量制备该重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,间接ELISA法测定免疫鼠IgG抗体效价。结果成功构建了重组表达质粒pVAC-N,免疫小鼠后可诱导产生出特异性的IgG抗体。结论构建的真核表达质粒pVAC-N能诱导小鼠产生特异性抗体,为SARS疫苗的进一步研究打下基础。 相似文献
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日本血吸虫成虫67kD抗原模拟表位的筛选及其免疫原性 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:筛选日本血吸虫成虫67kD抗原的模拟表位,对其免疫学活性予以鉴定。方法:用粗提日本血吸虫成虫67kD抗原的抗体IgG作配体筛选噬菌体12肽库,随机挑取三轮筛选后的噬菌体克隆,Dot-ELISA检测其特异性:用混和阳性噬菌体克隆免疫小鼠3次,攻击感染后45d剖杀,计数虫荷。结果:经三轮筛选,特异噬菌体得到富集,挑取的11个噬菌体克隆经Dot-ELISA鉴定均与67kD抗原免疫血清呈阳性反应。混合噬菌体克隆的免疫血清可识别67kD抗原,并具有一定的抗血吸虫的免疫保护效果。结论:利用噬菌体随机肽库技术获得了日本血吸虫成虫67kD抗原的模拟表位,这些表位具有良好的免疫原性。 相似文献
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目的 鉴定日本血吸虫成虫肠道内容物中的金属蛋白酶。 方法 以明胶作底物 ,利用明胶 SDS PAGE分离日本血吸虫成虫肠道内容物 ,将电泳后的凝胶于不同 pH缓冲液和酶抑制剂中进行孵育 ,对其中的金属蛋白酶进行分析和鉴定。 结果 日本血吸虫成虫肠道内容物中存在降解明胶的金属蛋白酶 ,其最适 pH值为 7~ 9。金属蛋白酶抑制剂EDTA抑制其活性。电泳分离获得有活性的酶蛋白 ,该酶是血吸虫感染血清识别的弱抗原。 结论 日本血吸虫成虫肠道内容物存在金属蛋白酶 相似文献
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Cystatin-ELISA法诊断日本血吸虫病的研究 总被引:3,自引:2,他引:3
目的 建立一种敏感、高特异性的血吸虫病诊断方法。方法 应用Cystatin捕获血吸虫吐出物中的半胱氨酸蛋白酶,再进行ELISA试验检测日本血吸虫(Sj)病人血清中相应的特异抗体。结果 检测120例慢性血吸虫病人血清,84例非疫区正常人血清和36例华支睾吸虫病人血清,Cystatin-ELISA检测Sj病人阳性率为98.4%,与正常人及华支睾吸虫病人无交叉反应。其敏感性(98.4%)与SEA-ELISA法的敏感性(93.4%)比较无明显区别(P>0.05),但特异性显著高于后者(P<0.05)。Cystatin-ELISA敏感性和特异性亦均高于AWA-ELISA和ES-ELISA。结论 Cystatin-ELISA敏感性高,特异性强,是一种有效的诊断血吸虫病的方法。 相似文献
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SARS冠状病毒S蛋白部分序列1的克隆与表达 总被引:3,自引:1,他引:3
目的 构建SARS冠状病毒S蛋白部分序列 1(S1)的原核重组表达质粒 ,并分析其在大肠杆菌中的表达状况。方法 采用逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)技术从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码S1蛋白的基因片段 ,并克隆至pMD18-T载体上 ;菌落PCR鉴定阳性克隆并测序列分析 ;将阳性克隆的插入片段亚克隆至表达载体pGEX - 4T - 2 ,转化大肠杆菌JM10 9,PCR和双酶切鉴定转化菌落 ;将阳性菌株经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析截短型S蛋白的表达。结果 RTPCR扩增出S1蛋白的特异片段 ,其阳性克隆的序列存在 2处碱基突变第 36位G变为A ;第 333位由C变为T) ,其中第 36位为有义突变 ,第 333位为同义突变 ;阳性克隆中截短型S1蛋白的基因片段被亚克隆到表达载体pGEX - 4T - 2而构建成重组表达质粒 ,并在JM 10 9中表达了S1蛋白的融合蛋白 ,表达的蛋白能与GST免疫血清和SARS病人血清反应。结论 成功构建了SARS冠状病毒S1蛋白的重组表达质粒 ,该质粒在大肠杆菌中表达了截短型S蛋白的融合蛋白。 相似文献