利用双重PCR.技术研究长爪沙鼠的微卫星结构

目的 为了建立快速检测长爪沙鼠群体遗传多样性的方法及获得Z:ZCLA长爪沙鼠封闭群现用微卫星位点的结构.方法 利用17个微卫星位点(9个来自长爪沙鼠,8个来自大小鼠)进行了PCR反应体系及反应条件的优化,组合了6组双重PCR及两个复合式点样,用上述8个组合对普通级z:ZCLA长爪沙鼠封闭群43、44、45三个世代核心群各.100只种鼠进行遗传检测.结果 三个世代的300只种鼠的检测结果表明,9个长爪沙鼠位点均为微卫星,其中7个位点为完全型的微卫星,1个为复合型,1个为不完全型,多态性主要表现在核心序列的重复;来自大小鼠的8个微卫星位点,有7个在z:ZCLA长爪沙鼠核心群中得到有效扩增,只有3个位点在三个世代中均有出现,对测序结果分析后发现,其核心序列均为小卫星.结论 来自长爪沙鼠的位点,无论结构还是遗传方式均符合微卫星遗传标记的特点,可用作检测长爪沙鼠的群体遗传多样性.     

长爪沙鼠生物净化技术的研究

目的：为实现长爪沙鼠微生物质量升级和实验动物化目标,我们对长爪沙鼠实施生物净化。方法：在长爪沙鼠生物净化过程中,采取孕鼠选择和临产期判断、无菌剖腹产、仔鼠代乳以及独立通风笼盒（IVC）饲养管理和微生物检测等措施,比较了ICR小鼠、SD大鼠、长爪沙鼠代乳和饲料中添加营养成分对仔鼠代乳的影响。结果：本研究共实施长爪沙鼠无菌剖腹产达85胎次,通过ICR代乳鼠代乳并成功断乳167只。讨论：根据微生物检测结果,本研究顺利实现了长爪沙鼠生物净化,形成的关键技术有望为我国特色实验动物资源的生物净化提供参考。     

鼠痘病毒荧光定量Taqman-PCR检测方法的建立与应用

目的 建立鼠痘病毒的荧光定量Taqman-PCR检测方法, 以期能快速、准确、灵敏、特异的检出鼠痘病毒。方法 经过比对和筛选, 本研究选取鼠痘病毒的ERPV_027基因480-800位序列段, 作为引物设计位点设计引物和探针, 并对该引物对和探针的特异性、灵敏性、稳定性和重复性进行检测。结果 本研究建立的方法, 对鼠痘病毒的检测极限是68 copies/μL;该方法特异性强, 只对鼠痘病毒特定片段进行特异性扩增, 而对小鼠肝炎病毒、仙台病毒、沙门氏菌等其它病毒、细菌无扩增;该方法稳定性和重复性均较好。结论 本研究成功建立了检测鼠痘病毒的荧光定量Taqman-PCR方法, 该方法特异性强、灵敏度高, 且具有较好的稳定性和重复性, 具有广阔的应用价值。     

“801”生物活性饲料添加剂的致突变试验

用“801”生物活性饲料添加剂按不同剂量在普通级ICR小鼠上进行了骨髓嗜多染红细胞微核试验和精子畸变试验,用鼠伤寒沙门氏菌的4个菌株进行了Ames试验。结果表明,各剂量组的微核率(1.2‰～2.4‰)与阴性对照组(1.5‰)无显著差异,各剂量组的精子畸变率(4.6‰～5.2‰)也与阴性对照组(4.2‰)无显著差异,各剂量组诱发的回复突变菌落数增加不到阴性对照组的2倍且无剂量效应。     

大鼠原位肝移植模型建立方法的若干问题探讨

目的探讨建立大鼠原位肝移植模型的方法与技术。方法用改进的二袖套法行100例Lewis→BN大鼠原位肝移植,术中门静脉、肝下下腔静脉用袖套法吻合,肝上下腔静脉用缝合法吻合,胆管内支架法完成胆道重建。结果供体手术时间(30.9±5.0)min,供肝修整时间(10.0±3.0)min,受体手术时间(50.0±5.5)min,无肝期为(23.0±2.5)min。手术成功率为92%(术后存活2 d以上),1周存活率为87%,1个月存活率为84%。结论通过提高手术技巧,熟悉各种并发症的原因和预防处理措施,可以减少并发症的发生,提高手术成功率,延长大鼠术后存活时间。     

浙江省实验动物中心长爪沙鼠群体遗传状况分析

目的 探讨浙江实验动物中心长爪沙鼠群体的遗传状况。方法 应用生化基因位点遗传检测方法，测定初始和生物净化长爪沙鼠群体27个生化位点等位基因的分布。结果 2个长爪沙鼠群体均具有丰富的遗传多样性；生物净化群体与初始群体比较有17．86％的基因丢失率，但尚未出现明显的遗传分化现象（FST〈0．05）。结论 群体均偏离了哈迪-温伯格平衡（P〈0．05）。     

国内无菌动物无菌检查的现状与分析

无菌动物已应用到医学和生物学研究的各个领域。本文简要介绍了国内无菌动物无菌检查方法的现状,并结合现行国内实验动物微生物检测标准与一些国家药典的无菌检查方法,阐述现行方法的局限性及无菌动物无菌检查中的影响因素。提出目前我国无菌动物的无菌检查技术在取样、培养基的选择与灵敏度、环境与人员控制,以及结果判断等方面有待于进一步完善与改进。     

鼠肝星状细胞的分离培养和鉴定方法

1982年,Knook等[1]成功地分离出肝星状细胞(hepaticstellate cell,HSC)。目前认为,HSC在肝纤维化的进程中起重要的作用[2]。在慢性损伤因素(如病毒性慢性肝炎、酒精等)的持续作用下,肝内大量分泌细胞因子,其中最主要的有肿瘤生长因子(tumor growth factor-β,TGF-β)、血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)等,可使静止的HSC活化、增殖并产生大量的细胞外基质(extracellular ma-trix,ECM)沉积于肝组织。同时,细胞的表型也向成纤维样细胞转变,组织学上表现为细胞内维生素A脂滴减少,细胞多极化,细胞质内微管微丝增…     

长爪沙鼠生化位点检测方法的优化设计

长爪沙鼠生化位点检测方法可用于长爪沙鼠的遗传质量分析，同时也为该动物群体遗传结构的研究提供了一种有效的手段。孙贺娟等基于首都医科大学的普通级长爪沙鼠，对长爪沙鼠生化位点的检测方法进行了探索。目前，有关规范实验长爪沙鼠遗传质量的检测方法至今仍是空白，这与该动物目前实验动物化的进程不相适应。另外，有关实验动物遗传质量的国家标准只给出了近交系大小鼠的质量检测规范，对于封闭群动物则没有相应的规定。基于此，我们在参照GB14923-2001、GB／T14927．1-2001及孙贺娟检测方法的基础上进行了试验，并在试验中对每个条件进行摸索，排除可能的干扰因素，在尽量取得较佳结果的基础上，对本中心长爪沙鼠生化位点的检测提出了一些优化设计。     

肠腔内隔离消化液超早期手术治疗十二指肠瘘

十二指肠瘘为常见肠外瘘,是处理较为棘手的急危重症之一,病死率在20％左右。笔者应用气囊导管在肠腔内隔离消化液进行十二指肠瘘超早期手术,获得了较好的效果,报道如下。