乙型肝炎病毒血清定量分析及临床应用

目的：探讨慢性乙型肝炎病人血清乙肝病毒（HBV）含量与血清标志组合和丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）的关系，并对干扰索的疗效进行评价。方法：将慢性乙型肝炎200例分为干扰素组（实验组）和不用干扰素组（对照组）各100例，两组均采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法进行血清HBV－DNA定量，分析HBV—DNA水平与乙型肝炎血清标志物和血清酶学（ALT、AST）的关系；实验组采用常规治疗加干扰素治疗，对照组单用常规治疗，6个月后评定两组疗效。结果：血清HBVDNA水平，大三阳病人较高，单纯HbeAb阳性病人较低；血清HBV-DNA随着拷贝数量的升高，其ALT和AST的异常率及平均值也随之增加；干扰素治疗低滴度HBVDNA的病人疗效较好。结论：采用FQ—PCR进行乙型肝炎病毒基因定量分析，对乙型肝炎的诊断、治疗和预后的判断有重要意义。     

肺炎支原体聚合酶链反应检测方法的实验研究和初步应用

人类原发性非典型性肺炎是一种全球性疾病,其病原体为肺炎支原体,除引起呼吸系统感染外,还可引起神经系统、心血管系统、消化系统等的病变。因而早期、快速、准确地检测肺炎支原体,具有重要的临床和流行病学意义。目前对肺炎支原体检测方法主要有分离培养法、     

医院内污水中噬菌体的分离及其生物学特性观察

目的：通过噬菌体特性观察，为了解噬菌体吸附特异性及溶苗机理的分子生物学机制奠定物质基础．方法：利用标准苗株从污水中分离特异性噬菌斑，纯化增殖后得到其相应噬苗体．经过高滴度噬菌体与其非特异性宿主菌的混合培养，筛选出宿主谱特异性发生突变的具有宽噬性的噬菌体．结果：从污水中分离出12种特异性噬菌体，发现了可裂解同一菌属的不同菌种的宽噬噬菌体，改变了噬菌体专-宿主谱这一特性．结论：针对同一菌属中不同菌种的宽噬噬菌体具有较高的稳定性及裂菌滴度，为探索噬菌体寄生的基因控制及特异吸附的分子生物学机制奠定了基础，将人工改造噬菌体，使之成为新型的杀菌生物制剂成为可能。     

一种准确快速微量尿素氮测定法

报告尿素经脲酶作用后Berthelot反应测定法。该法较纳氏试剂显色法具有灵敏度高,稳定性强,检品用量少等优点。通过测定了831例正常人BUN的结果,探讨年龄与BUN正常值的关系,并对肾功能障碍时其血中NPN及BUN平行测定作了观察。     

反义c-myc寡核苷酸抑制大鼠气道平滑肌增殖与细胞凋亡无关

目的 :研究反义c myc寡核苷酸抑制大鼠气道平滑肌增殖与细胞凋亡的关系 .方法 :大鼠气道平滑肌细胞原代培养 ,4～ 12代用于实验 .利用Lipofectin将正义、反义及错配c myc寡核苷酸导入大鼠气道平滑肌细胞 ,姬姆萨染色查找凋亡小体 ,流式细胞技术观察有无凋亡峰出现 ,琼脂糖电泳观察凋亡细胞特有的梯状图谱 ,免疫组织化学染色检测凋亡相关基因bax和bcl 2 .结果 :反义c myc寡核苷酸处理大鼠气道平滑肌细胞 2 4h后 ,细胞生长明显受到抑制 (0 .12± 0 .0 3vs 0 .19± 0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,但无凋亡小体发现 ,流式细胞技术没有检测到凋亡峰 ,细胞总DNA琼脂糖电泳没有观察到典型的梯状凋亡图谱 ,免疫组织化学染色显示凋亡相关基因产物Bax及Bcl 2在各组表达无明显差异 .结论 :反义c myc寡核苷酸抑制大鼠气道平滑肌增殖与细胞凋亡无关     

男性无精子症和严重少精子症患者SPGY1基因微缺失的检测

目的：研究Y染色体上无精子因子(AZoospermia Factor,AZF)的缺失与无精症和严重少精子症的关系．方法：应用PCR方法检测了40例正常男子、42例无精子症和31例严重少精子症男子基因组DNA中AZFc区的SPGYl(SPer-matogenesis Gene locus on the Y)基因．结果：无精子症患中6例SPGYl基因缺失(6／42)；严重少精子症患中5例SP—GYl基因缺失(5／31)；73例男性不育患AZFc区SPGYl基因缺失率为15％(11／73)．40例已生育的正常男性对照均未检测到SPGYl基因的缺失．结论：Y染色体SPGYl基因缺失可能是造成男性不育的原因之一，有必要对男性不育患进行Y染色体基因缺失的检测。     

荧光定量RT-PCR检测沙门氏菌方法的建立

目的建立沙门氏菌实时荧光定量PCR的快速检测方法 ,探讨该方法的可行性和应用价值。方法根据沙门氏菌fimY基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于沙门氏菌检测的定量标准品,建立实时荧光定量PCR检测沙门氏菌的方法。结果成功构建了沙门氏菌重组质粒标准品和沙门氏菌实时荧光定量PCR方法 ;通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性;对模拟标本与分离培养对比,二者符合率为100%。结论沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立,为食源性沙门氏菌污染的快速检测提供依据,可应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。     

PSMA-IRES-FCY1-TK真核表达载体的构建及在前列腺癌细胞中的表达

目的: 构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)启动子调控表达的FCY1/TK双自杀基因表达载体,并观察单、双自杀基因对前列腺癌细胞LNCaP的杀伤作用.方法: 通过PCR方法扩增出基因组DNA中PSMA启动子,利用基因重组的方法,替换真核表达载体pIRES中的CMV启动子.测序正确后,再将自杀基因FCY1和HSV-TK分别克隆于载体pIRES的两个多克隆位点,构建真核表达载体pPSMA-IRES-FCY1-TK.将该载体转染LNCaP细胞,用RT-PCR的方法检测其转录,用MTT法检测前体药物5-氟胞嘧啶、丙氧鸟苷单一或联合使用对转染后的LNCaP细胞的杀伤作用.结果: PCR扩增出长1400 bp的PSMA启动子片段,经克隆至pIRES后酶切鉴定证实,并测序表明序列与GenBank(Accession Number AF007544)报道的一致.pPSMA-IRES-FCY1-TK经脂质体转染LNCaP细胞后,RT-PCR检测到FCY1和TK基因在该细胞中均有转录.MTT法检测表明5-FC与GCV联合使用,其细胞生长抑制率明显高于单独使用5-FC,GCV(P<0.05). 结论: pPSMA-IRES-FCY1-TK的双自杀基因体系对前列腺癌细胞LNCaP细胞的杀伤作用,明显优于单自杀基因体系.     

多巴胺D2受体启动子区域基因多态性与抽动-秽语综合征的关联分析

目的:探讨抽动-秽语综合征(TS)与多巴胺D2受体启动子区域(DRD2P)多态性的关系.方法:应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术对24例患儿和30例正常对照进行DRD2P基因-141CDel/Ins多态性和TS的关联性分析.结果:共检出2种基因型:纯合子-141CIns/Ins(160bp,144bp)与杂合子-141CDel/Ins(304bp,160bp,144bp),未检出纯合子-141CDel/Del(304bp,304bp).病例组-141CDel/Ins多态性的基因型频率与对照组的差异无显著性(χ2=0.093,ν=2,P＞0.05);等位基因频率比较也无显著性差异(χ2=0.060,ν=1,P＞0.05).结论:抽动-秽语综合征与DRD2P基因-141CDel/Ins多态性尚缺乏关联.     

PCR-反相杂交法检测沙门氏菌invA、invE基因

目的：探讨从血液中早期检出伤寒沙门氏菌病原体的方法。方法：选择沙门氏菌属中的ｉｎｖＡ ｉｎｖＥ,采用ＰＣＲ扩增－反相杂交法及电泳法同时对血培养物中的伤寒沙门氏菌进行对比检测。结果：电泳法６ｈ检出８份,检出率８０％。８ｈ、１０ｈ可将１０份全部检出,检出率为１００％。反相杂交法４ｈ有３份阳性,阳性率为３０％,６ｈ有９份出现阳性反应,阳性率为９０％,８ｈ、１０ｈ可将１０份全部检出,阳性率为１００％。临床标本中电泳法１２／１６阳性,阳性率７５％,ＰＣＲ－反相杂交法阳性１４／１６,阳性率８７．５％。结论：反相杂交法具有敏感性高、特异性好等优点,对伤寒的早期快速诊断及治疗有重要意义。