有机溶剂在生物酶法制备D-对羟基苯甘氨酸中的应用

在生物酶法制备Ｄ－对羟基苯甘氨酸反应中加入一定量的二甲亚砚,可以克服ＤＬ－对羟基苯海因溶解度太低的限速因素,从而可以提高反应速度及增加产率。二甲亚砚最佳用量为１０％。与不加二甲亚砚相比,酶转化率增高近５倍。     

二氢嘧啶酶产生菌培养条件的研究

目的确定二氢嘧啶酶产生菌的最适培养条件。方法采用Plackett Burman法设计和球面对称设计联用。结果最适培养基组成为 (% ,W /V) ;酵母膏 2 .39,葡萄糖 1.81,尿嘧啶 0 .0 6 ,K2 HPO4 ·3H2 O 0 .2 ,MgCl2 ·6H2 O 0 .0 5 ,NaCl 0 .3,pH7.2～ 7.4。 32℃ ,2 2 0r/min振荡培养 10h ,每 1ml培养液酶活力为 3 .0 2U。 结论得到了二氢嘧啶酶产生菌最佳培养条件。     

RP-HPLC法测定人精液中维生素E的含量

目的 :建立测定人精液维生素E含量的反相高效液相色谱法。　方法 :用正己烷萃取人精液维生素E ,氮气吹干 ,以甲醇定容 ;以维生素E作外标 ,用紫外检测仪检测 ,波长为 2 0 5nm。　结果 :线性关系为y =0 .30 2 9+0 .0 0 730x,r=0 .9994,回收率在 85 %～ 115 %之间 ,检测限为 4.5 35× 10 -2 μmol/L ,测定 1份样品约需 12min。　 结论 :本法与比色法或荧光法比较 ,测定人精液中维生素E含量准确 ,特异性强 ,灵敏度高 ;结果提示不育病人精子密度越高精液维生素E含量越高。     

N端延伸的人肠生长激素类似物基因的合成、克隆及融合表达

目的:合成、克隆及融合表达N端延伸2个Pro,并由Gly取代N端第2个氨基酸Ala的人肠生长激素类似物PP-h[Gly2]GLP-2,初步测定其促肠生长的生物学活性。方法:合成长度分别为53,54及53个碱基的三段寡核苷酸,以中段寡核苷酸为模板,两端寡核苷酸为引物,经PCR合成PP-h[Gly2]GLP-2基因,克隆于pUC18载体。经测序正确后,将该基因与融合表达载体pED连接构建融合表达质粒pEDGLP-2,转化E.coliBL21(DE3),进行诱导表达,用SDS-PAGE分析。融合蛋白经分离纯化和酸切割后,分离获得PP-h[Gly2]GLP-2,用电喷雾质谱法测定其相对分子质量,并对雄性SD大鼠皮下给药14 d,初步测定其促肠生长活性。结果:诱导后融合蛋白表达量占菌体可溶性总蛋白的40%以上。电喷雾质谱法测得:经酸切割获得的PP-h[Gly2]GLP-2的相对分子质量为3 947.97 Da,与预测值3 947.38 Da基本一致。初步动物实验结果显示,0.5 mg/(kg.d)剂量组小肠增重百分比为41.65%,与PBS组相比具有显著差异。结论:制备获得的人肠生长激素类似物PP-h[Gly2]GLP-2,与设计的相对分子质量一致,有明显的促肠生长活性。     

假单胞菌海因酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的：构建海因酶基因工程菌,以便实现对羟在苯甘氨酸的工业化生产。方法：利用PCR技术从恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida)9801中扩增得到海因酶基因,将该基因插入pMD18-T质粒,转化大肠杆菌（Bscherichia coli)通过地高辛标记原位杂交和海因酶活力测定两种方法,筛选出具有海因酶活力的阳性转化子。结果：工程菌E.coliBL21/pMD-dht的海因酶活力达到1700U/L,比野生菌恶臭假单胞9801菌的酶活力提高8倍。SDS-PAGE显示海因酶的单体分子量纸醉金迷为53KDa,海因酶的表达量约占菌体总可溶性蛋白的20%。结论：构建的海因酶基因工程菌已初步具有工业化应用价值。     

依赖于钙媒介朊的蛋白磷酸酯酶活力被钙媒介朊和亚基B所调节

从牛脑中分离得到的依赖于钙媒介朊(CaM)的蛋白磷酸酯酶由一个催化亚基A(Mr=60,000)和一个调节亚基B(Mr=19,000)以相同的克分子比所组成。A和B可通过在6M脲中凝胶过滤解离,然后通过重组以观察钙介媒朊和B在调节A活力中的作用。A活力被钙媒介朊刺激2倍,被B刺激14倍,被钙媒介朊和B两者刺激34倍,说明钙媒介朊和B对A活力的     

猪肝中环鸟苷酸刺激的磷酸二酯酶的提纯和性质

猪肝中环岛苷酸(cCMP)刺激的磷酸二酯酶(下简称cGMP-PDE)已经被提纯。纯酶的比活力增加约10,000倍,cGMP刺激活力增加20倍以上,PAGE、SDS-PAGE、等电聚焦和PDE活力染色均显示为单一区带,亚基Mr～115KDa,Sephacryl S-300凝胶过滤测得Mr为270KDa,Stokes半径5.41nm,表明这种酶至少由二个相同的亚基所组成。该酶的PI为4.3。以cAMP为底物,Km值存在或不存在cGMP时分别为30μM和210μM。该酶比较稳定,-20℃贮存五个月,酶的刺激活力仍无明显变化。     

人参细胞培养物中超氧化物歧化酶的活力测定

测定了不同培养期的人参细胞培养物（ＣＭＧＣ）中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活力。实验表明：不同培养期ＣＭＧＣ中ＳＯＤ的活力不同。培养２１ｄ的样品中单位鲜重酶活力单位和蛋白质含量均为最高。     

聚乙二醇对溶菌酶和粒细胞集落刺激因子的初步化学修饰

目的考察聚乙二醇 (PEG)修饰对溶菌酶和粒细胞集落刺激因子 (G CSF)活性的影响。方法以不同方法活化的PEG修饰溶菌酶 ,通过正交试验和单因素考察确定合适的修饰条件 ;溶菌酶活力测定采用溶壁小球菌法 ,抗原性测定采用试管沉淀法 ;G CSF活性测定以小鼠血浆中中性粒细胞数目增殖情况反映。结果当偶联上一个PEG分子时 ,溶菌酶的活性保留 13% ,抗原性显著减弱 ;G CSF经PEG修饰后对小鼠中性粒细胞数目的增加有显著促进作用 ,且作用时间明显延长。结论PEG修饰对G CSF血循环半衰期的延长有显著作用     

二氢嘧啶酶产生菌的筛选及发酵条件的研究

通过筛选确定由恶臭假单胞(Pseudomonas putida)D菌产生的二氢嘧啶酶对5-对羟基苯海因的水解能力较强,该产酶菌发酵条件的研究表明酵母膏对产酶十分重要.甲硫乙基海因对二氢嘧啶酶具有强诱导作用.此产酶菌最适培养基组成为(%):甘油1.0,酵母膏1.0,NaCl0.3,K2HPO4·3H2O0.2,甲硫乙基海因0.1,MgCl2·6H2O0.05,28℃,发酵18h,每ml发酵液酶活力为2.26U.