自体外周血造血干细胞移植治疗1型糖尿病的临床观察

目的 探讨自体外周血造血干细胞移植治疗1型糖尿病的有效性及安全性.方法 2009年11月至2010年8月于解放军第三○九医院细胞治疗科诊治的16例1型糖尿病患者经环磷酰胺+粒细胞集落刺激因子动员造血干细胞至外周血,血细胞分离机采集外周血造血干细胞并予以冻存;患者采用环磷酰胺+猪抗人淋巴细胞球蛋白方案预处理后,经静脉回输造血干细胞.观察所有患者移植前后胰岛素注射剂量、糖化血红蛋白(HbA1c)水平、C肽水平、血糖水平,同时记录治疗过程中的不良反应.结果 自体外周血造血干细胞移植后12例患者脱离胰岛素,脱离胰岛素时间在移植后3～20 d,中位时间为9 d.中位随访28周(8～44周).12例中最长已脱离胰岛素10个月余,无患者再重新依赖胰岛素.4例患者未脱离胰岛素,此4例患者移植前均C肽水平低且病程较长,但胰岛素用量均较移植前下降,所有患者胰岛功能较前明显改善.所有患者未出现骨髓抑制等严重不良反应.结论 自体外周血造血干细胞移植治疗1 型糖尿病,初步结果显示出一定的临床有效性及安全性,远期疗效有待进一步验证.

Abstract：

Objective To explore the efficacy and safety of autologous peripherial blood hematopoietic stem cell transplantation (APBHST) in patients with type 1 diabetes mellitus. Methods Hematopoietic stem cells were mobilized with cyclophosphamide and granulocyte colony stimulating factor for 16 patients with type 1 diabetes mellitus who admitted to our department during November 2009 to August 2010. And then stem cells were collected from peripheral blood by leukapheresis and cryopreservation. The cells were infused intravenously after conditioning with cyclophosphamide and antithymocyte globulin. To compare the daily dose of exogenous insulin requirements, the serum levels of hemoglobin A1c (HbA1c), C-peptide, islet cell function during the mixed meal tolerance test were measured before and at different times after APBHST. Blood glucose was monitored 7 times a day before and after APBHST. And the adverse effects were recorded during and after APBHST. Results The median follow-up was 28 weeks (range: 8-44 weeks). Twelve of 16 patients stayed free from insulin at 3-20 days post APBHST. And islet cell function greatly improved after APBHST. Four of 16 patients required exogenous insulin but the dosage decreased. And all 4 patients had a poor level of C-peptide before APBHSCT. There were no such severe adverse effects as myelosuppression. Conclusion Very encouraging results have been obtained in the patients treated with APBHST. There is definite therapeutic effects and safety in a short term. But further follow-up is necessary to confirm the duration of insulin independence and the mechanisms of action.     

CD20分子在移植肾切除标本中的表达

背景：肾移植是治疗肾功能衰竭最有效的手段，如何提高移植物及受者的长期生存率和生存质量仍然是肾移植的重要课题。B细胞群的浸润与移植肾失功间的关系尚处于争论阶段。 目的：分析CD20+ B细胞浸润与移植肾存活时间的相关性，探讨浸润B细胞在移植肾排斥反应病变中的作用。 设计、时间及地点：回顾性病例分析，于1989-01/2006-12在解放军总医院第二附属医院器官移植研究室完成。 对象：纳入40例难治性排斥反应导致移植肾失功并行移植肾切除的患者。 方法：切除的移植肾组织经石蜡包埋、切片后行免疫组化染色，检测肾组织中CD20的表达情况，CD20+ B细胞群在肾间质呈弥漫性浸润者视为阳性。计算移植肾的存活时间。 主要观察指标：统计分析CD20表达对移植肾存活时间的影响及其与移植肾排斥反应导致失功的相关性。同时统计分析性别、年龄、冷缺血时间、热缺血时间、免疫抑制方案、术后高血压以及是否为二次移植对CD20表达的影响。 结果：①40例切除的移植肾组织免疫组化染色结果中，CD20+ 19例(48%)。②失功的移植肾中CD20的表达与其性别、年龄、冷缺血时间、热缺血时间、免疫抑制方案、术后高血压以及是否为二次移植不相关。③40例移植肾的存活时间最长为110个月，最短为2周，平均为35个月。CD20+组移植肾存活时间明显短于CD20-组[（34.9±5.4），（45.8±5.9）个月（P﹤0.05）]。 结论：CD20+的B细胞群浸润可使移植肾的存活时间减少，导致移植肾预后较差。     

基于免疫学展开多学科研究生培养模式的探索与实践

解放军总医院第八医学中心呼吸与危重症医学部研究所适临改革调整学科转型之际,依托北京市器官移植与免疫调节重点实验平台,构建以免疫学为核心的多学科研究生联合培养模式,从个体化研究生培养背景、教学模式、能力培养等方面进行分析,探索多个临床学科研究生共同培养的实践模式,以期培养具有系统和整体论的医学思维人才,更好地展开临床工作。     

人脐带间充质干细胞分离培养及表面标志检测

 目的　探讨体外分离培养人脐带源间充质干细胞（hUCMSC）的方法,并检测hUCMSC的表面标志。方法　分离脐带华通胶（Wharton's jelly）,将其剪碎后利用组织块贴壁法培养获得hUCMSC,生长至一定密度后进行传代,采用流式细胞术检测第3代hUCMSC表面标志。结果　由人脐带华通胶可方便、有效地获得hUCMSC,其体外生长形态类似成纤维细胞,并可稳定增殖和传代。hUCMSC表面标志CD29、CD44、CD105高表达,而表面标志CD45、CD34、HLA-DR、HLA-G、CD80、CD86不表达。结论　利用人脐带华通胶组织块培养可有效获得hUCMSC,为组织工程提供丰富的细胞来源。     

总胆汁酸及前白蛋白等指标诊断肝硬化及肝肿瘤的应用价值

 目的 调查血清总胆汁酸(TBA)等指标在肝硬化及肝肿瘤患者中的水平,讨论其临床应用价值.方法 163例分为三组:肝硬化代偿组56例,肝硬化失代偿组62例,肝肿瘤组45例;对照组51例,为心、肺、肝、肾功能均无异常的健康体检者.所有受试者均空腹抽血检测以下指标:血清总胆汁酸(TBA)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、胆红素、前白蛋白(PA)、白蛋白(ALB)、胆碱脂酶活性(CHE)、总蛋白(TP)、超敏C反应蛋白(HS-CRP)、补体C3.比较患者组与健康体检者化验指标的差异.结果 (1)疾病组血清总胆汁酸(TBA)均显著升高(P<0.01),失代偿组水平最高.(2)转氨酶均升高(P<0.01),代偿组以谷丙转氨酶(ALT)升高显著;而另两组以谷草转氨酶(AST)升高更为明显.(3)前白蛋白(PA)均下降(P<0.01),三组间无显著性差异(P>0.05).白蛋白(ALB)、胆碱脂酶活性(CHE)的水平按代偿组、失代偿组、肝肿瘤组依次降低(相邻两组间P<0.05).(4)肝硬化失代偿前后补体C3水平均显著下降(P<0.01),失代偿组下降更为明显.结论 在肝硬化、肝肿瘤患者中,血清总胆汁酸(TBA)的检测较其他指标更为敏感.前白蛋白(PA)更为敏感地反映肝脏合成功能的损害程度.补体C3的改变与肝硬化病情密切相关.HS-CRP与病情进展高度相关,尽早控制炎症有利于疾病的治疗.总胆汁酸(TBA)等指标的联合检测有利于对病情的分析和诊治.     

肾移植术后尿液DYZ-1检测的临床意义

背景:对移植受者尿液成分进行定期监测可以作为判断移植肾功能、状态的一种方法.目的:分析肾移植受者尿液中供者细胞出现与急性排斥反应的关系及临床意义.方法:选取60例供者为男性、受者为女性的肾移植受者,分为移植后早期检测组40例、急性排斥组10例、移植后功能稳定组10例.定期提取尿液中细胞DNA,利用PCR检测Y染色体上特异的基因片段DYZ-1.结果与结论:在手术第1日受者的尿液中可检测到供者细胞DNA,随着时间的延长,尿液中供者细胞DNA量逐渐减少,至术后1个月,有8例受者的尿液中供者细胞DNA消失,其中1例发生急性排斥反应;另外32例受者的尿液中仍有供者细胞DNA的出现,其中7例发生了急性排斥反应;存活3个月以上发生急性排斥反应10例患者,7例尿液标本中能检测到供者细胞DNA,对急性排斥者进行治疗后1个月,71.4%转为阴性;而在稳定期的10例肾功能良好受者,仅1例受者尿液中DYZ-1基因阳性.提示对肾移植受者尿中供者细胞DNA的进行定期检测,可以作为监测急性排斥反应发生及预后的一种手段.     

结核病人外周血T辅助细胞含量分析

目的分析结核病患者Th细胞含量变化与结核分枝杆菌感染的关系。方法抽取肺结核患者、肺外结核患者、肺癌患者和健康人2ml肝素钠抗凝静脉血,按说明书进行胞内和膜表面分子染色,染色的细胞经流式细胞仪分析分泌IL-17、IFN-γ、IL-4阳性的T细胞和CTLA-4、PD-1阳性的T细胞。结果肺结核、肺外结核和肺癌组Th17细胞含量高于健康组、Th2细胞含量低于健康组、Th1细胞含量呈下降趋势,但与健康组比较差异无统计学意义。因此,肺结核、肺外结核组Th1细胞含量与Th17细胞含量比值及Th2细胞含量与Th17细胞含量比值低于健康组。肺外结核组CTLA-4阳性的CD3+T细胞(CTLA-4+CD3+T含量)含量高于肺结核组、肺癌组和健康组,肺结核和肺癌组PD-1阳性的CD4+T细胞(PD-1+CD4+T细胞)含量高于健康组。肺结核组,CTLA-4+CD3+T含量与Th1细胞含量呈负相关(r=-0.48,P=0.014);肺外结核组,PD-1+CD4+T细胞含量与Th17细胞含量呈正相关(r=0.68,P=0.015)。结论活动性结核病患者Th17细胞含量升高。     

流式细胞技术检测肾脏移植受者pp65抗原血症的意义

背景：临床对pp65抗原的检测主要采用免疫荧光技术，但是该方法步骤繁琐，需要对标本进行人工计数，在检测过程中受人为的影响因素较多。 目的：探讨使用简便的流式细胞技术检测人巨细胞病毒pp65抗原血症的可行性及其特点。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2007-09/2008-03在解放军总医院附属二院器官移植中心完成。 材料：肾脏移植受者外周血标本145份。 方法：分离人外周血白细胞，分别采用免疫荧光技术与流式细胞技术对人巨细胞病毒pp65抗原检测。 主要观察指标：流式细胞仪在激发波长为488 nm处的吸收峰判断阳性检出。 结果：对肾脏移植受者进行免疫荧光技术检测，在15例受者的25份标本中检出阳性，检出的特异性为76.0%；对肾脏移植受者进行流式细胞技术检测，在5例受者的11份标本中检出阳性，检出的特异性为54.5%。使用Fisher确切概率法对两种不同检测方法检出的效果进行检验，结果两种检测方法的检出效果差异无显著性意义(P > 0.05)。 结论：免疫荧光技术和流式细胞技术两种pp65抗原检测方法的检出效果无差异，因此可以通过流式细胞技术对pp65抗原进行检测，并且结果更加客观。     

病原菌检验技术的现状与发展趋势

近20年来,病原菌 检测技术有了长足进步。一方面,全自动细菌培养仪、全自动细菌鉴定仪和药敏测试仪的使用实现了细菌培养、鉴定和药敏试验的规范化和标准化,速度快,质量可靠;同时,新的免疫学诊断技术、分子生物学诊断技术、菌型鉴定和耐药基因检测技术正在迅速应用于病原菌检验,并与传统镜检和培养方法相互补充。DNA芯片技术的发展和实用化将彻底改变病原菌检验的现状。     

结核分支杆菌对抗痨药物依赖性的初步观察

目的：调查临床结核菌分离株对抗痨药物依赖状况。方法：采用双向匡氏琼脂培养基分离痰结核菌和作结核菌依赖性测定。采用匡氏琼脂培养基检测结核菌耐药性。结果：依赖S11．4l％（2l／184）．依赖R14．13％（26／184），依赖H6．52％（12／184），依赖K2．17％（4／184），依赖E10．87％（20／184），依赖P4．89％（9／184），依赖O5．43％（10／184），依赖Z8．15％（15／184）；HR、HRS、HRE的依赖率分别为13．04％（24／184）、9．78％（18／184）、7．07％（13／184）。结论：结核杆菌对8种药物都存在不同程度的依赖现象，结核杆菌对3种药物组合均有不同程度的依赖性；对抗痨药物E、P、O、Z和抗痨药物组合HR、HRS、HRE的依赖现象国内未见报道。结核杆菌对不同药物的依赖率不同，对R依赖率最高，组合药物依赖中对HR的依赖率最高。