喹哌及羟基喹哌对抗氯喹恶性疟原虫的药效测定

应用体外培养恶性疟原虫对氯喹敏感株及抗氯喹株测试喹派及羟基喹哌的药效,并以氯喹为对照。原虫培养用Trager和Jensen氏法;药效用体外微量法测定,观察48小时后的减虫率,求得氯喹、喹哌、羟基喹哌对敏感株恶性疟原虫的ED_(50)为81、59及56nM,对抗性株的为563、61及60nM。实验未发现抗氯喹株恶性疟原虫对喹哌及羟基喹哌有明显的交叉抗性。抗氯喹株体外连续培养17天,不加氯喹刺激,抗药性从7倍降至3.4倍。     

恶性疟原虫FCC1／HN株特异基因片段的克隆及部分序列分析

本研究通过分离、培养恶性疟原虫ＦＣＣ１／ＨＮ分离株，提取、纯化其基因组ＤＮＡ，用ＢａｍＨ１部分酶切，并克隆ｐＵＣ１８载体，转化受体菌株大肠杆菌ＪＭ１０３，用基因组ＤＮＡ探针筛选转化子，对杂交信号最强的克隆片段ｐＨＦ１作部分序列分析，在国内首次明确恶性疟原虫ＦＣＣ１／ＨＮ特异ＤＮＡ部分序列。ｐＨＦ１克隆片段约１．２ｋｂ，两端分别测定了３２８和２７１个碱基。Ｇ＋Ｃ含量为２６．８％，并有较多的酶切位点，便于作亚克隆，该序列还可用作ＤＮＡ探针或ＰＣＲ扩增模板有较大实用价值。     

恶性疟原虫裂殖子表面主要蛋白对裂殖子入侵人红细胞的抑制作用

恶性疟原虫裂殖子表面主要蛋白－１（ＭＳＡ１），又称Ｐ１９５，与人红细胞具有结合作用，这种结合是裂殖子识别红细胞的基础。为了确定Ｐ１９５蛋白与识别有关的位点，本研究在大肠杆菌中分８段表达了ＭＡＤ２０株恶性疟原虫的Ｐ１９５蛋白。各段蛋白用镍亲和层析柱分离，然后复性。在体外培养疟原虫至成熟裂殖体期，将各段蛋白分别加入到培养基上清中，继续培养２４小时，检查红细胞感染率，通过感染率了解各段蛋白对裂殖子入侵红细胞的影响。结果发现Ｐ１９５蛋白中氨基酸序列为３８４－５９５的一段蛋白（Ｍ６），呈剂量依赖性抑制恶性疟原虫裂殖子入侵人红细胞，且Ｍ６对疟原虫生长无细胞毒性作用。这表明Ｍ６可能含红细胞结合位点，该位点与裂殖子竞争性结合红细胞，而使感染率下降     

P195蛋白及其抗体抑制恶性疟原虫裂殖子入侵人红细胞的研究

目的寻找恶性疟原虫裂殖子表面主要蛋白Ｐ１９５中的红细胞结合位点,为设计疫苗阻断裂殖子入侵红细胞提供实验依据。方法在大肠杆菌中分８段表达Ｐ１９５蛋白。各段蛋白用镍亲和层析柱分离,然后复性。将得到的各段蛋白免疫家兔,制备抗血清。在体外培养疟原虫至成熟裂殖体期,将各段蛋白及其相应的抗血清分别加入到培养基上清中,继续培养２４小时,检查红细胞感染率。通过感染率了解各段蛋白及其抗体对裂殖子入侵红细胞的影响。结果Ｐ１９５蛋白中氨基酸序列为３８３～５９５（Ｍ６）,５９５～８９７（Ｍ７）,１３９７～１６６３（Ｍ１１）的三段蛋白的抗血清具有抑制裂殖子入侵红细胞的作用,而其中Ｍ６蛋白片段也具有抑制裂殖子入侵红细胞的作用。结论Ｐ１９５蛋白中氨基酸序列为３８３～５９５的一段序列,Ｍ６可能含恶性疟原虫识别人红细胞的位点,该位点可以作为疟疾疫苗的候选抗原。     

一种快速简便的PCR检测恶性疟原虫方法的建立

作者建立了一种简便快速的PCR检测恶性疟原虫的方法。参照国外最新报道设计合成了一对引物扩增恶性疟原虫特异的重复序列,扩增片段206 bp,引物序列如下:A: CGCTACATATCTAGTTGCCAGACB: CGTGTACCATACATCCTACCAAC 方法:取冻存的西双版纳流行区疟疾患者外周     

Evaluation of a sulfonated DNA probe (sulfoprobe) for diagnosis of falciparum malaria

In this study,the DNA probe pPF14 was nonradioactively labelled by sulfo-modifica-tion,and used in a dot blot hybridization assay for detection of P.falciparum.The resultsshowed that the sulfoprobe successfully detected 25pg purified DNA and 0.001% parasitemia ofcultured P.falciparum,and did not react with human leukocyte DNA.In the study of 179clinical blood samples of malaria patients from Yunnan province,the DNA probe results corre-lated well with blood smear ones.Of 107 P.falciparum samples determined by microscope ex-amination,99 were positive by sulfoprobe (92.5%);Of 72 P.vivax samples,1 was crosslyreacted;no cross reactions were found with any of 48 normal blood samples.It is indicated thatsulfoprobe may be useful in specific diagnosis and epidemiological investigation of P.falciparuminfection.     

疟原虫裂殖子抗原分析

疟疾是严重危害人类健康的疾病,疟疾疫苗是很有效的防治手段。研制疟疾疫苗,首先要对疟原虫抗原进行分析、鉴定。疟原虫裂殖子直接暴露于机体免疫系统,对裂殖子保护性抗原的分析、鉴定是疟疾疫苗研制的关键部分。随着免疫学和分子生物学技术的发展,已对许多疟原虫裂殖子保护性抗原进行了分子水平的研究,取得了可喜的进展,特别是对gp195、83KDa、75KDa等主要裂殖子表面抗原进行了核苷酸序列分析和免疫保护作用的研究,为疟疾疫苗的研制提供了基础。     

恶性疟原虫FCC_(102)/JS株的建立

1984年9月于江苏省盱眙县境分离一恶性疟原虫虫株,暂定名为FCC-102/JS株连续培养观察52天生长良好。其96小时培养原虫平均增殖倍数为3.83±1.13倍,较海南岛株低(FCC-1/HN株为10.03±0.88,FCC-4/HN株为9.85±0.38)。该株配子体多见,平均占11.65±3.11％。用兔血清代替人血清不易生长。体外微量药效测定氯喹对FCC-102/JS株的半数有效浓度为42.03(28.51-61.95)nM,提示该株为氯喹敏感株,可作为抗原分析、研制疫苗及微量药效测定用的原虫模型。     

PCR扩增环子孢子蛋白基因3' 端片段用于检测恶性疟原虫的初步研究

目的 :建立 PCR检测恶性疟原虫的新方法。方法 :作者采用自行设计并合成的一对恶性疟原虫特异引物 ,经 PCR扩增环子孢子蛋白 ( CSP)基因 3 端保守区序列 2 4 5bp片段 ,观察了它的特异性、敏感性和稳定性。结果 :1从 4株培养的恶性疟原虫和 2例恶性疟患者血样中均扩增出约 2 4 5bp的 DNA目的片段 ,用业已鉴定的 CSP基因序列作模板再行扩增证实其为恶性疟原虫CSP基因片段 ;2对间日疟原虫、利什曼原虫、弓形虫和健康人血样进行 PCR反应 ,均未见扩增条带 ;3本检测系统可检出恶性疟原虫感染血样中 0 .18个原虫所含的 DNA模板 ;4采用不同方法制备模板及不同反应方式均能获得满意结果 ;结论 :PCR扩增恶性疟原虫 CSP基因 3 端片段用于恶性疟原虫检测具有灵敏、高度特异且稳定性好等优点。     

抗疟药体外微量测定中起始原虫感染率的选择

体外微量测定技术的应用,为抗疟药的研究提供了一条新途径。在微量测定时选择适宜的培养物容量,红细胞压积及采样时间等已有报道;也有实验表明,起始原虫率对实验结果有影响。然而,在微量测定时不同的起始原虫率对药效测定结果的影