同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞表达RANTES蛋白

为探讨同型半胱氨酸是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达RANTES蛋白 ,使人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸孵育 8h后 ,用免疫细胞化学和Westernblot方法检测RANTES蛋白的表达。免疫细胞化学检测结果发现 ,培养的人脐静脉内皮细胞能表达RANTES蛋白。培养的内皮细胞与 0 .1、0 .5及 1mmol L同型半胱氨酸共同孵育 8h后 ,其RANTES蛋白表达的平均吸光度值分别为 0 .0 4 34± 0 .0 0 6 3、0 .0 788± 0 .0 0 5 3和 0 .10 6 1± 0 .0 2 15 ,均显著高于对照组 (0 .0 2 0 0± 0 .0 0 32 ) ,方差分析发现 ,组间均存在显著性差异 (P <0 .0 1)。Westernblot检测结果发现 ,当内皮细胞与 0 .1、0 .5和 1mmol L同型半胱氨酸共同孵育 8h后 ,其免疫染色条带的积分吸光度值分别为 8873、10 2 0 0和 10 80 0 ,分别是对照组 (3881)的 2 .2 9倍、2 .6 3倍和 2 .78倍。此结果提示 ,培养的人脐静脉内皮细胞表达低水平的RANTES蛋白 ,同型半胱氨酸能提高其RANTES蛋白的表达     

平滑肌细胞源性纤维母细胞生长因子的纯化及生物学特性

将培养的兔主动脉平滑肌细胞（ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｈｌｅｃｅｌｌ，ＳＭＣ）超声粉碎，用肝素亲和层析法纯化细胞内的纤维母细胞生长因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＦＧＦ）。结果显示，ＳＭＣ超声粉碎提取物对兔血单核细胞有趋化活性。经肝素亲和层析，被１．４～１．６ｍｏｌ·Ｌ￣（－１）ＮａＣｌ洗脱下来的组分对ＮＩＨ３Ｔ３细胞有明显促有丝分裂活性。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳证明该组分的分子量约为１８．４ｋＤａ。免疫杂交分析证明该组分与抗碱性ＦＧＦ多克隆抗体结合，说明本实验纯化所得的蛋白质为碱性ＦＧＦ。提示，迁入内膜的ＳＭＣ在其受损伤时，可释放出碱性ＦＧＦ，通过引起细胞的迁移和增殖，在动脉粥样硬化的发生发展中起一定作用。     

平滑肌细胞源性纤维母细胞生长因子的纯化

平滑肌细胞源性纤维母细胞生长因子的纯化瞿智玲，邓仲端（武汉同济医科大学病理学教研室，４３００３０）动脉中膜平滑肌细胞（ＳＭＣ）迁入内膜和增生在动脉粥样硬化斑块的发生和发展中起着重要作用。ＳＭＣ在受到动脉壁内的细胞（如内皮细胞及巨噬细胞）所分泌的趋化因...     

小鼠骨髓间充质干细胞体外诱导向平滑肌样细胞分化过程中myocardin的表达

目地探讨血小板源性生长因子BB联合高浓度胎牛血清体外诱导骨髓间充质干细胞定向分化为平滑肌细胞的可行性及myocardin在此过程中的表达变化。方法采用全骨髓贴壁法分离骨髓间充质干细胞,血小板源性生长因子BB(50μg/L)联合高浓度胎牛血清诱导骨髓间充质干细胞,分别于诱导前,及诱导4d和8d后用免疫细胞化学法检测细胞平滑肌肌动蛋白、平滑肌肌球蛋白重链和myocardin的表达。结果免疫组织化学显示,诱导前及诱导4d和8d时,平滑肌肌动蛋白、平滑肌肌球蛋白重链和myocardin三种蛋白的表达逐渐增强,平均灰度值逐渐降低,不同时间点之间比较差异有显著性(P<0.05)。结论血小板源性生长因子BB联合高浓度胎牛血清可有效诱导骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化。Myocardin在此分化过程中可能起了重要作用。     

氧化修饰的低密度脂蛋白促进平滑肌细胞表达VCAM-1

目的 探讨氧化修饰的低密度脂蛋白(ox-LDL)是否诱导培养的平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1(VCAM-1)。方法 采用原位杂交和免疫组化的方法检测。ox-LDL刺激后,原代培养小鼠主动脉中膜平滑肌细胞表达VCAM-1 mRNA和蛋白的情况。结果 ox-LDL作用后,平滑肌细胞VCAM-1 mRNA经原位杂交显色,细胞平均吸光度(A)值为0.2005±0.0190,与对照组(0.1446±0.0055)相比差异有极显著性意义(F=137.12,P<0.01)。平滑肌细胞VCAM-1蛋白表达经免疫组化显色后,细胞平均吸光度值为0.1295±0.0240,较对照组(0.0687±0.0085)亦有所增加,方差分析显示差异有极显著性意义(F=94.58,P<0.01)。结论 ox-LDL能够诱导动脉中膜平滑肌细胞表达高水平的VCAM-1 mRNA和蛋白,从而在动脉粥样硬化斑块形成过程中起重要作用。     

RNA干扰MDM2下调人乳腺癌细胞中VEGF的合成并抑制肿瘤血管的生成

目的 探讨小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）抑制人乳腺癌细胞中鼠双微粒体2 （murine double minute 2, MDM2）的表达对癌细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）合成以及裸鼠移植瘤组织内血管生成的影响。方法 根据MDM2已知的cDNA序列设计并转录合成特异性siRNA,转染高表达MDM2的人乳腺癌MDA-MB-468细胞,低氧培养后应用蛋白质印迹法和ELISA法检测肿瘤细胞及其上清液中VEGF的水平。构建裸鼠乳腺癌移植瘤模型,观察MDM2沉默后肿瘤生长情况,蛋白质印迹法、免疫组织化学及ELISA方法检测荷瘤组织和裸鼠血清标本中的VEGF含量,并以CD34标记血管内皮细胞计数微血管密度（microvessel density, MVD）。结果 siRNA抑制MDM2表达后,MDA-MB-468细胞分泌的VEGF蛋白显著减少（P=0.006）。裸鼠移植瘤模型显示,封闭MDM2表达使荷瘤组织生长变慢（P=0.008）,且荷瘤小鼠血清VEGF水平明显减低（P=0.008）,荷瘤组织内MVD也明显降低（P=0.003）。结论 MDM2 siRNA能有效减低乳腺癌细胞中VEGF的合成,并抑制裸鼠移植瘤组织内新生血管的生成,为MDM2/VEGF途径抗肿瘤血管生成作用的研究及靶向药物开发提供了新的思路。     

氧化修饰的低密度和极低密度脂蛋白对巨噬细胞单核趋化蛋白表达的影响

探讨氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）是否能诱导巨噬细胞表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ和蛋白，以阐明二者在动脉粥样硬化发生中的作用。方法在巨噬细胞的培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）、ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ，３７℃下温育２４小时，收集巨噬细胞的条件培养基，同时用异硫氰酸胍法提取巨噬细胞总ＲＮＡ。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析的方法检测巨噬细胞ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达，用夹心ＥＬＩＳＡ检测其条件培养基中ＭＣＰ－１蛋白的含量。用微孔滤膜法进行单核细胞的趋化试验。结果当巨噬细胞分别暴露于ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ２４小时后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白的表达明显增加，同时单核细胞迁移距离的明显增加。而当巨噬细胞分别暴露于ＬＤＬ和ＶＬＤＬ２４小时，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白的表达只有轻微的增加，单核细胞迁移距离亦无明显的增加。结论巨噬细胞能表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白，ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ能诱导该细胞更强地表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ和蛋白     

氧化低密度和极低密度脂蛋白对单核细胞血小板源性生长因子B链表达的影响

在单核细胞的培养基中分别加入２５ｍｇ·Ｌ￣（－１）低密度脂蛋白（ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＤＬ）、氧化ＬＤＬ（ｏｘｉｄｉｚｅｄＬＤＬ，ＯＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ｖｅｒｙｌｏｗｄｅｎｓｉｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＶＬＤＬ）和氧化极低密度脂蛋白（ｏｘｉｄｉｚｅｄＶＬＤＬ，ＯＶＬＤＬ），培养２４ｈ后再用无血浆脂蛋白培养基收集条件培养基，并观察此条件培养基对￣３Ｈ－ＴｄＲ投入血管壁平滑肌细胞ＤＮＡ的影响。用抗血小板源性生长因子Ｂ链抗体（抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体）作疫组织化学染色。结果表明，单核细胞能表达ＰＤＧＦＢ，ＯＬＤＬ和ＯＶＬＤＬ能明显地促进单核细胞ＰＤＧＦ－Ｂ的表达，其条件培养基亦能促进￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入平滑肌细胞ＤＮＡ内。上述结果提示，ＯＬＤＬ和ＯＶＬＤＬ通过加强单核细胞分泌ＰＤＧＦ－Ｂ并促进平滑肌细胞增殖而在动脉粥样硬化的发病过程中起作用。     

联胺对培养的人脐静脉内皮细胞表达细胞间粘附分子-1的影响

人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)暴露于 1、 5和 10 μmol/L 联胺作用 8h,或 5 μmol/L 联胺作用 4和 2 4 h,观察其细胞间粘附分子 - 1(ICAM- 1)蛋白表达。免疫细胞化学法 :实验组平均吸光度值分别是对照组的 1.4 9、 1.80、 2 .2 4、1.5 3和 2 .4 4倍 (F=16 0 .2 7,P<0 .0 1)。流式细胞仪分析 :实验组荧光抗体阳性细胞百分率分别是 32 .9%、 4 3.0 %、5 0 .9%、 36 .0 %和 5 2 .4 % ,高于对照组 (2 1.4 % )。不同浓度组间进行 χ2检验 ,有统计学意义 (χ2 =2 0 98.2 3,P<0 .0 0 1;R=- 0 .2 2 8,P<0 .0 0 1) ,或不同时间组间 (χ2 =2 16 7.76 ,P<0 .0 0 1;R=- 0 .192 ,P<0 .0 0 1)。 Western Blot检测 ,实验组积分吸光度值分别是对照组的 1.2 3、 1.75、 1.92、 1.5 6和 1.82倍。结果提示 :联胺诱导 HUVEC表达 ICAM-1蛋白增加并呈时间和剂量依赖性     

低密度脂蛋白诱导动脉平滑肌细胞表达MIP-1αmRNA

目的探讨天然和氧化低密度脂蛋白(n-LDL,ox-LDL)能否诱导培养的兔主动脉平滑肌细胞表达巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α mRNA.方法将培养的兔主动脉平滑肌细胞暴露于n-LDL、ox-LDL后,分别用原位分子杂交法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其MIP-1α mRNA的表达.结果培养的兔主动脉平滑肌细胞能表达低水平的MIP-1α mRNA,天然及氧化低密度脂蛋白能增强平滑肌细胞表达MIP-1α mRNA,组间差异有极显著性意义(P＜0.01).结论n-LDL和ox-LDL通过诱导平滑肌细胞表达MIP-1α,从而在动脉粥样硬化早期病变的形成过程中起重要作用.