人VEGF在NIH3T3细胞中的基因转移和表达

目的研究人血管内皮细胞生长因子(human VEGF)在体外培养的小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)中的基因转移及表达,为血管化组织工程、缺血性疾病的治疗奠定实验基础。方法应用脂质体介导的基因转移技术,将含有人VEGF165编码序列的真核表达载体pcDNA/V转染至体外培养的NIH3T3细胞系中。G418筛选出稳定表达重组质粒的细胞克隆,转接于细胞瓶中,培养72 h,同时以G418筛选的pcDNA3.1(+)阳性细胞克隆和未转染的NIH3T3细胞为阴性对照,取细胞培养上清及细胞裂解液样品进行Western blotting检测。用细胞免疫组织化学染色检测人VEGF165基因在NIH3T3细胞中的表达情况,不着色者为阴性,细胞胞质着色呈棕黄(褐)色者为阳性。结果Western blotting结果显示在转染pcDNA/V质粒的NIH3T3细胞培养上清中,可以检测到相对分子质量为22 000的反应条带,与预计的人VEGF165单体蛋白的相对分子质量相符。细胞免疫组织化学染色检测结果显示,转染pcDNA/V质粒的NIH3T3细胞呈阳性。结论人VEGF165能够在NIH3T3细胞中有效表达,并获得了稳定表达人VEGF165基因的NIH3T3细胞株。     

浅谈医学实验教学中的点滴体会

医学院校实验教学的目的是要求学生在老师的指导下,通过每一个具体的实验,验证所学的理论知识,掌握实验技能,并由此激发学生对科学研究的兴趣,科研能力的提高。     

阴性精神症状自身免疫性脑炎患者的临床分析

目的 研究阴性精神症状自身免疫性脑炎(AE)患者的临床特征,提高对疾病的认识,以优化其治疗。方法 收集2018年1月至2021年12月武汉大学人民医院神经内科收治的40例确诊为AE的患者,其中4例无精神行为异常。精神行为异常表现为胡言乱语、幻觉、容易激惹、攻击行为和性格改变等。将有精神行为异常的36例患者分为阴性精神症状组（N组,9例）和非阴性精神症状组（P组,27例）。比较2组患者的临床表现、实验室检查、影像学特征、治疗及预后等指标。结果 40例患者中抗NMDAR脑炎最多见,为32例(80%);抗LGI1脑炎4例(10%);抗GABABR脑炎2例(5%);抗CASPR2脑炎1例(2.5%);抗NMDAR脑炎合并抗MOG脑炎抗体阳性1例(2.5%)。40例AE患者的常见临床表现有精神行为异常36例(90%)、癫痫发作20例(50%)、运动功能障碍4例(10%)、认知障碍7例(17.5%)、言语障碍6例(15%)、意识障碍8例(20%)等。40例AE患者均接受了一线免疫治疗,单用激素冲击治疗23例(57.5%),激素冲击联合静脉注射免疫球蛋白(IVIg)治疗15例(37.5%),激素+IVIg+血浆置换联合治疗2例(5%)。N组较少出现前驱头痛(P<0.05)。N组与P组在白细胞及中性粒细胞计数方面差异存在统计学意义(P<0.05)。N组9例患者预后均为良好;P组22例患者(81.5%)预后良好,5例预后不佳。结论 自身免疫性脑炎可表现出复杂多样的精神症状,应在诊断的早期进行阴性精神症状筛查,并尽早制定个体化治疗方案,以期改善预后。 [国际神经病学神经外科学杂志, 2022, 49(6): 1-6]     

2010-2012年围术期抗菌药物预防性应用调查分析

目的 了解医院围术期抗菌药物预防应用,促进规范管理抗菌药物的预防应用.方法 2010-2012年每年4、10月对所有出院的手术病例(排除感染病例)进行围术期抗菌药物预防应用回顾性调查,对2010-2012年抗菌药物使用率、使用天数、联合用药进行分析.结果 2010-2012年抗菌药物术前30 min～2 h内使用率分别为96.04％、96.29％和95.15％;围术期未用抗菌药物比例呈上升趋势,分别占25.47％、35.19％、41.49％,其中I类切口分别占40.59％、52.99％、60.15％;用药在1d内比例有逐年升高趋势(P＜0.05),用药＞3d比例呈降低趋势(P＜0.05)；一联用药比例分别占65.13％、64.88％、70.69％,有增加趋势(P＜0.05),二联用药分别占33.98％、33.73％、28.10％,有降低趋势(P＜0.05).结论 医院抗菌药物预防应用越趋规范,但使用率和使用天数仍需进一步加大管理力度,需要多部门参与,共同提高抗菌药物的合理应用.     

人血管内皮生长因子基因的克隆、表达及生物活性分析

目的 克隆人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因,构建真核表达载体,观察其对脐静脉内皮细胞的增殖作用和血管新生的影响。方法 利用RT-PCR方法,从人扁桃体组织中扩增人VEGF165 cDNA完整编码区,并构建成pcDNA3．1( )／VEGF165(简称pcDNA／V)重组体;应用脂质体介导的基因转移技术将构建的真核表达载体pcDNA／V体外转染至人脐静脉内皮细胞(HUVEC),MTT法检测其对内皮细胞增殖的影响。建立家兔下肢缺血模型,注射重组质粒pcDNA／V,pcDNA3．1( )空质粒作对照,选取不同时间点,行血管造影。结果 构建的真核表达载体pcDNA／V的酶切电泳分析和测序表明结果正确。pcDNA／V转染HUVEC能明显促进内皮细胞的分裂增殖。血管造影显示,术后基因治疗组远端动脉充盈早于对照组,新生血管数目也明显多于同时期对照组。结论 成功克隆了人VEGF165基因,构建了其真核表达载体。体内外生物学活性研究证实,重组质粒的表达产物具有刺激HUVEC增殖和促进缺血肢体侧枝循环建立的功能。     

整合医学问题导向模式在分子生物学教学中的实践与思考

“疾病的分子生物学基础”是分子生物学课程中的难点章节,内容涉及临床疾病的分子及代谢特征、检测方法。对此,医学院校的低年级学生一般由于缺乏对疾病的认识,在理解上比较困难。鉴于此,通过将疾病分类整合,提出医学问题,结合PBL的教学模式,将疾病的生物化学代谢过程与分子及表型相联系,使学生加强理解,把教师的主讲模式转变为学生的主讲模式方式,激发了学生的学习兴趣,改善了死板的教学氛围,提升了教学效果。     

人VEGF基因昆虫杆状病毒表达载体的构建

为了在昆虫杆状病毒表达系统表达人血管内皮细胞生长因子 (VEGF)基因 ,用HindⅢ对 pcDNA3 .1 /VEGF进行酶切 ,回收 5 75bp的VEGF片段 ,与 pFastBacI载体连接 ,得到含VEGF基因的转座载体 pFast/VEGF ,NcoI酶切鉴定方向 ;将其转化到含有穿梭载体杆粒 (Bacmid)的DH1 0Bac感受态细胞 ,得到重组杆状病毒穿梭载体Bacmid/VEGF ,采用琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增对重组转座载体、穿梭载体进行鉴定。将Bacmid/VEGF转染sf 9细胞 ,进行病毒重组及噬斑筛选。结果 :琼脂糖电泳得到杆粒 (Bacmid)DNA条带 ,PCR扩增得到 5 75bp的VEGF片段 ,病毒液在 1 0 - 7稀释度时出现噬斑 ,约 5 0个 /孔。说明已成功构建了重组杆状病毒穿梭载体并重组出杆状病毒。     

医学研究生分子生物学实验教学体会

根据我校研究生教学情况，对分子生物学实验课的课程设置、教学方法、学生能力和素质培养及考核方式等方面的教学经验进行了一些思考和总结。     

研究生医学分子生物学实验教学改革的探索

针对医学研究生在分子生物学实验教学中出现的问题,根据其知识背景和研究特点,从教师素质的提高、实验教学内容的安排、教学方式的选择及考核方式的改革等几方面对研究生医学分子生物学实验教学改革进行了探讨。     

分子生物学技术用于流脑疑似病例的流行病学研究

目的：利用分子生物学技术确认流脑死亡病例与其密切接触者实验室鉴定结果的相关性。方法：对疑似病例的血液标本进行脑膜炎奈瑟菌PCR分群和多位点序列分析实验,对密切接触者分离菌进行氧化酶实验、血清学分群鉴定、糖源利用实验和脉冲场凝胶电泳（PFGE）鉴定实验。结果：疑似病例标本PCR结果为脑膜炎奈瑟氏菌A群阳性,6株密接分离菌的氧化酶试验均为阳性,血清学分群鉴定结果均为A群,糖源利用试验为葡萄糖和麦芽糖阳性、乳糖和蔗糖阴性。PFGE结果表明：这6株菌来源于同一克隆,多位点序列分析结果为ST7。结论：引起该病例及其密切接触者的病原菌类型为ST7的A群脑膜炎奈瑟氏菌。