益髓灵对小鼠脾细胞IL—2诱生和NK细胞活性的影响

为探讨临床疗效机理，我们研究了益髓灵对小鼠脾细胞ＩＬ－２和ＮＫ细胞活性的影响，结果提示，该药能使小鼠脾细胞ＩＬ－２和ＮＫ细胞活性增加，并和用药浓度有一定的关系，证明合理的用药浓度能提高小鼠机体免疫功能。     

流式细胞术检测细胞凋亡的分析软件比较

采用PI染色法 ,以流式细胞术通过检测DNA含量分析细胞凋亡 ,比较ModFitLT及CEL LQuest软件的分析数据。结果显示 :ModFitLT与CELLQuest软件均可分析细胞凋亡 ,ModFitLT软件更客观、准确。我们建议使用ModFitLT软件进行细胞凋亡相对定量分析 ,CELLQuest软件只用于细胞凋亡的定性分析。     

家兔动脉成形术后血管内膜增殖与普伐他汀联合阿司匹林的干预效应

目的:观察普伐他汀、阿司匹林联用对家兔颈动脉血管成形术后内膜增殖进展的影响及其作用机制。方法:实验于2002-03/12在北京中医药大学教育部中医内科学重点学科实验室完成。雄性日本大耳白兔30只,体质量1.8～2.0kg,动物适应性喂养1周后随机数字表法分为正常对照组(n=9)、假手术组(n=6)、模型组(n=9)、治疗组(n=6)。模型组和治疗组动物氯胺酮、速眠新混合肌注麻醉,沿气管正中切开皮肤,剥离颈总动脉,给予电刺激。术后第2天开始饲喂高脂饲料(胆固醇:0.7%,猪油:3%,普通饲料96.3%);正常对照组无任何干预措施;假手术组仅剥离颈总动脉,不做电刺激,喂高脂饲料;动物连续喂养8周后超声评价颈总动脉,根据B超选择颈总动脉有斑块或血流明显改变者作颈总动脉球囊扩张术。正常对照组、模型组、假手术组喂普通饲料,治疗组喂普伐他汀与阿司匹林含药饲料(普伐他汀5.046mg/kg,阿司匹林2.268g/kg),4周后测血脂和C-反应蛋白浓度、血清一氧化氮及转化生长因子β水平,观察颈动脉组织病理形态学改变,半定量分析增生内膜中胶原含量的变化,免疫组织化学方法分析增生内膜中巨噬细胞和平滑肌细胞阳性百分率。结果:纳入大耳白兔30只,正常对照组中途死亡1只,死因为牙齿畸型影响进食;模型组1只因电刺激8周时超声评价颈动脉未形成斑块及血流无明显改变而剔出实验,进入分析28只。与模型组比,普伐他汀与阿司匹林联用4周后,治疗组胆固醇及三酰甘油水平明显下降[(4.12±2.30),(0.74±0.17)mmol/L;(0.47±0.27),(0.39±0.14)mmol/L;P<0.05],血清C-反应蛋白水平和转化生长因子β水平均降低[(0.86±0.27),(0.57±0.30)mg/L;(3.45±0.77),(3.23±0.34)ng/L;P<0.05],一氧化氮水平升高[(41.79±35.78),(90.14±32.54)mmol/L;P<0.05],动脉内膜增殖程度明显减轻,管腔狭窄率降低,内中膜厚度及内中膜面积比降低[(71.91±14.90)%,(47.20±18.74)%;(0.41±0.17),(0.26±0.04)mm;1.66±0.63,0.78±0.34;P均<0.05],动脉内膜胶原含量减少(30.92±10.05,21.93±5.81,P<0.01),动脉内膜巨噬细胞阳性百分率降低[(13.94±4.91)%,(7.29±7.28)%,P<0.05],平滑肌细胞含量无明显差异(38.37±5.67,35.79±10.68,P>0.05)。结论:普伐他汀与阿司匹林联用具有抑制内膜增生和减少新生内膜胶原含量的作用,其机制与两药抑制炎症反应、保护内皮功能及抑制细胞外基质生成等有关。     

党参皂苷L1对抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用

目的:观察扶正固本、益气类中药党参皂苷L1对缺氧缺糖再给氧所致大鼠大脑星形胶质细胞损伤是否有保护作用。方法:实验于2004-08/2005-05在北京中医药大学东直门医院中医脑病研究室完成。①选用出生1d的Wistar大鼠40只,雌雄不拘。②分离大脑星形胶质细胞进行原代培养。加入含连二亚硫酸钠10mmol/L的无糖Earle液,置37℃体积分数0.05CO2孵箱中孵育90min进行缺氧缺糖处理。然后吸弃Earle液,加入不含连二亚硫酸钠的无血清DMEM培养液,继续置37℃体积分数0.05CO2孵箱中孵育90min进行再给氧处理。③将在相同或不同细胞培养板中的不同培养孔中细胞按随机抽签法分为6组(每10孔或8孔细胞为1组):正常对照组(正常细胞培养),模型组(进行缺氧缺糖再给氧处理),尼莫地平组[在无糖Earle液和无血清DMEM培养液加入终浓度0.5mg/L尼莫地平[购自山东新华制药股份有限公司,生产批号:0211048,10mL(2mg)/支],其余处理同模型组],缺氧缺糖再给氧 党参皂苷L1高、中、低浓度组[在无糖Earle液和无血清DMEM培养液分别加入质量浓度1.3,0.13和0.013mg/L党参皂苷L1(由北京中医药大学中医内科学教育部重点实验室采用高效液相色谱法制备法分离得到,含量为96.2%),其余处理同模型组]。测定乳酸脱氢酶漏出率时缺氧缺糖处理后直接测定,而不做再给氧处理。④四唑盐比色法测定细胞存活率,Hoechst33342和碘化丙啶原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和细胞坏死率、细胞凋亡率,比色法测定乳酸脱氢酶漏出率。结果:①荧光显微镜观察细胞形态:尼莫地平组和党参皂苷L1各浓度组与模型组比较均可见红染的坏死细胞数量明显减少,尼莫地平、党参皂苷L1各浓度组与模型组比较凋亡细胞数量无明显变化。②星形胶质细胞存活率:模型组明显低于正常组、尼莫地平组和党参皂甙L1中、低浓度组(F=42.464,P<0.01)。③细胞坏死率和乳酸脱氢酶漏出率:模型组明显高于其他5组(F=69.344,24.994,P<0.01)。④细胞凋亡率:模型组明显高于正常组(F=3.311,P<0.05),与尼莫地平组和党参皂苷L1各浓度组比较,差异不明显(P>0.05)。结论:中药党参皂苷L1对缺糖缺氧再给氧造成的星形胶质细胞损伤具有保护作用,可抑制细胞坏死,但对凋亡过程无保护作用。     

党参皂苷L1对抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠星形胶质细胞损伤的作用

目的：观察扶正固本、益气类中药党参皂苷L1对缺氧缺糖再给氧所致大鼠大脑星形胶质细胞损伤是否有保护作用。 方法：实验于2004-08／2005-05在北京中医药大学东直门医院中医脑病研究室完成。①选用出生1d的Wistar大鼠40只，雌雄不拘。②分离大脑星形胶质细胞进行原代培养。加入含连二亚硫酸钠10mmol／L的无糖Earle液，置37℃体积分数0．05CO2孵箱中孵育90min进行缺氧缺糖处理。然后吸弃Earle液，加入不含连二亚硫酸钠的无血清DMEM培养液，继续置37℃体积分数0．05CO2孵箱中孵育90min进行再给氧处理。③将在相同或不同细胞培养板中的不同培养孔中细胞按随机抽签法分为6组（每10孔或8孔细胞为1组）;正常对照组（正常细胞培养），模型组（进行缺氧缺糖再给氧处理），尼莫地平组[在无糖Earle液和无血清DMEM培养液加入终浓度0．5mg／L尼莫地平[购自山东新华制药股份有限公司，生产批号：0211048，10mL（2mg）／支1，其余处理同模型组]，缺氧缺糖再给氧＋党参皂苷L1高、中、低浓度组[在无糖Earle液和无血清DMEM培养液分别加入质量浓度1．3，0．13和0.013mg／L党参皂苷L1（由北京中医药大学中医内科学教育部重点实验室采用高效液相色谱法制备法分离得到，含量为96．2％），其余处理同模型组]。测定乳酸脱氢酶漏出率时缺氧缺糖处理后直接测定，而不做再给氧处理。④四唑盐比色法测定细胞存活率，Hoechst33342和碘化丙啶原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和细胞坏死率、细胞凋亡率，比色法测定乳酸脱氢酶漏出率。 结果：①荧光显微镜观察细胞形态：尼莫地平组和党参皂苷L1各浓度组与模型组比较均可见红染的坏死细胞数量明显减少，尼莫地平、党参皂苷L1各浓度组与模型组比较凋亡细胞数量无明显变化。②星形胶质细胞存活率：模型组明显低于正常组、尼莫地平组和党参皂甙L1中、低浓度组（F=42．464，P〈0．01）。③细胞坏死率和乳酸脱氢酶漏出率：模型组明显高于其他5组（F=69．344，24．994，P〈0．01）。④细胞凋亡率：模型组明显高于正常组（F=3．311，P〈0．05），与尼莫地平组和党参皂苷L1各浓度组比较，差异不明显（P〉0．05）。 结论：中药党参皂苷L1对缺糖缺氧再给氧造成的星形胶质细胞损伤具有保护作用，可抑制细胞坏死，但对凋亡过程无保护作用。     

党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠皮质神经细胞凋亡的作用

目的：以原代培养的胚胎大鼠大脑皮质神经细胞进行缺氧缺糖再给氧处理，观察党参总皂苷对神经细胞凋亡的抑制作用。方法：胚胎大鼠大脑皮质神经细胞原代培养，含连二亚硫酸钠的无糖Earle’s液进行缺氧缺糖处理造模，MTT法测定细胞存活率，Hoechst 33342和PI原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死、凋亡细胞百分率，APO-BRDU法流式细胞术检测凋亡细胞百分率，Fluo-3法流式细胞术检测细胞内Ca^2+浓度，评价药效。结果：细胞存活率：与模型组[(19．69&;#177;5．80)％]比较党参总皂苷0．52mg／L组[(39．21&;#177;12．21)％]，0．052mg／L组[(37．9l&;#177;4．67)％]能显著提高细胞存活率(P&;lt;0．001)；细胞坏死率：与模型组[(44．99&;#177;12．81)％]比较党参总皂苷0．52mg/L组[(15．66&;#177;4．67)％]，0.052mg／L组[(23、98&;#177;4.04)％]和0．0052mg／L组[(20．50&;#177;5．19)％]能显著降低细胞坏死率(P&;lt;0．001)；原位双染法细胞凋亡率：与模型组[(17．44&;#177;4．82)％]比较党参总皂苷0．52mg／L组[(10．58&;#177;2．04)％]，0．052mg／L组[(11．61&;#177;2．35)％]能显著降低细胞凋亡率(P&;lt;0．05)；流式细胞术检测细胞凋亡率：与模型组[(8．55&;#177;3．84)％]比较党参总皂苷0．52mg／L组[(3．85&;#177;1．92)％]，0．0052mg／L组[(3．45&;#177;2．22)％]能显著降低细胞凋亡率(P&;lt;0．05)；细胞内Ca^2+平均荧光值，与模型组(47．37&;#177;9．68)比较党参总皂苷0．52mg／L组(23．56&;#177;13．19)能显著降低细胞内Ca^2+平均荧光值(P&;lt;0．05)，表明党参总皂苷能明显降低细胞内Ca^2+浓度。结论：党参总皂苷对缺血再灌注损伤后神经细胞的坏死和凋亡过程均具有抑制作用，这种作用可能与其能降低细胞内Ca^2+浓度有关，提示党参总皂苷是党参治疗脑卒中急性期的主要效应成分。     

比较猪去氧胆酸与牛磺熊去氧胆抗神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的作用

目的:研究猪、熊胆粉的主要成分猪去氧胆酸及牛磺熊去氧胆对神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用。方法:实验于2000-07/2002-08在北京中医药大学中医内科学教育部重点实验室完成。培养人神经母细胞瘤细胞,以含连二亚硫酸钠的无糖Earle液模拟造成缺氧缺糖再给氧损伤,随机分为正常培养对照组,缺氧缺糖再给氧组,猪去氧胆酸3.125,1.563,0.781μmol/L浓度组,牛磺熊去氧胆3.125,1.563,0.781μmol/L浓度组。应用锥虫蓝染色测定细胞死亡率,应用比色法测定乳酸脱氢酶漏出率,四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞存活率,应用以Hoechst33342和碘化丙啶原位双染法荧光显微镜检测细胞坏死率和凋亡率。结果:①细胞死亡率:猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3.125,1.563,0.781μmol/L浓度组细胞死亡率均明显低于缺氧缺糖再给氧组犤(34.1±7.1)%,(32.8±8.2)%,(29.4±9.8)%,(27.7±6.9)%,(26.8±9.4)%,(26.2±11.1)%,(71.2±9.2)%,P<0.001犦。②乳酸脱氢酶漏出率:猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3.125,1.563,0.781μmol/L浓度组乳酸脱氢酶漏出率均明显低于缺氧缺糖再给氧组犤(46.6±5.6)%,(49.8±5.3)%,(47.0±4.0)%,(48.5±2.7)%,(44.1±4.3)%,(40.2±7.5)%,(66.4±7.6)%,P<0.001犦。③细胞存活率:猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3.125,1.563,0.78     

泽兰对人冠状动脉平滑肌细胞增殖的影舷

目的研究中药泽兰对人冠状动脉平滑肌细胞（HCASMC）增殖的影响。方法利用体外细胞实验,通过人碱性成纤维生长因子和人表皮生长因子刺激细胞增殖,随机分为空白组、不同浓度泽兰水提物（LLST）组（320μg/mL、640μg/mL、1 280μg/mL、2 560μg/mL、5120μg/mL）和不同浓度泽兰醇洗脱物（LLCX）组（40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL、640μg/mL）。采用MTT法和流式细胞术分别测定细胞OD值、G0/G1期、S期、G2/M期和apoptosis期细胞百分比,观察泽兰不同浓度药液对细胞增殖的影响。结果 MTT结果显示泽兰LLST和LLCX 10个剂量均可抑制细胞增殖（P〈0.05）。细胞周期结果显示：泽兰LLST 320μg/mL、640μg/mL、1 280μg/mL浓度组和泽兰LLCX40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL浓度组的G0/G1期细胞百分比较空白组增高（P〈0.05）;S期细胞百分比较空白组降低（P〈0.05）。抑制增殖作用的最佳药物浓度分别为1 240μg/mL和160μg/mL。结论中药泽兰具有抑制HCASMC增殖的活性。     

丹参素对缺糖-缺氧损伤神经细胞的保护作用

研究表明脑组织缺血性损伤过程中存在着神经细胞凋亡。且神经细胞凋亡在缺血性脑损伤中起十分重要的作用。药物可通过干预神经细胞凋亡过程阻止缺血性损伤的进一步发展，而发挥对神经细胞损伤的保护作用。细胞内Ca^2 超载是缺血性脑损伤的发病机制之一，在缺血后神经元凋亡发生中也     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的人α_1(I)胶原基因启动子活性的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的调控作用和川芎嗪干预的影响环节。方法将2.5kb长度的人α1(I)胶原基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)“报告基因”组成的重组体pCOLH2.5,采用脂质体法转染至培养的大鼠心肌成纤维细胞,分别加入AngⅡ和川芎嗪,ELISA法测定CAT活性。结果AngⅡ可明显促进pCOLH2.5片段的启动活性,川芎嗪能抑制AngⅡ的促pCOLH2.5启动活性(P<0.05)。结论川芎嗪能在转录水平上阻断AngⅡ诱导的人α1(I)胶原基因启动子活性增加,从而抑制I型胶原的合成,阻滞和延缓心肌纤维化的发生发展。