中药抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血再灌注损伤大脑皮质神经元的保护作用

目的观察体外培养的大鼠大脑皮层神经元在模拟脑缺血再灌注后的变化以及中药抗呆Ⅰ号的影响. 方法先对分离纯化培养的大脑皮层神经元进行体外模拟脑缺血再灌注损伤模型的建立,然后采用 MTT法测定神经元的活性和存活率,用台盼蓝染色法测定其死亡率,用比色法测定乳酸脱氢酶( LDH)的漏出率,用组化染色法测定一氧化氮合成酶( NOS)的活性. 结果体外培养的大鼠大脑皮层神经元随缺血和再灌注时间的延长细胞的活性和存活率逐渐下降、死亡率逐渐升高、培养液中 LDH的漏出率逐渐升高、细胞 NOS表达强阳性细胞数在缺血 4 h(34.6± 3.847)和再灌 3 h( 20.6± 3.362)时显著增高.模型组与正常组相比,差异有非常显著性意义( t=13.236, 8.038, P< 0.01).抗呆Ⅰ号可影响其上述指标的变化. 结论抗呆Ⅰ号可能通过防止氧化磷酸化脱耦联而保护线粒体、防止脂质过氧化及通透性增加而保护细胞膜、抑制 NOS活性的反应性增强而防止一氧化氮( NO)及其衍生的毒性自由基的损伤等途径而发挥对神经元的保护作用.     

抗呆I号对体外模拟脑缺血再灌注损伤星形胶质细胞分泌功能的影响

目的:观察体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞(Ast)在模拟脑缺血再灌注后分泌脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、热休克蛋白70(HSP70)和白细胞介素6(IL-6)的变化以及中药抗呆Ⅰ号的影响。方法:实验于2002-03/2004-05在北京中医药大学完成。在大鼠大脑皮质Ast分离纯化培养的基础上体外模拟脑缺血再灌注,采用免疫细胞化学方法来观察受损Ast在缺血4h,再灌注3,18,24,36,48,72h后分泌BDNF,GDNF,HSP70和IL-6的动态变化及抗呆Ⅰ号的作用。结果:①体外培养的大鼠大脑皮质Ast在体外模拟脑缺血再灌注损伤后其分泌BDNF,GDNF,HSP70和IL-6的能力增强。②抗呆Ⅰ号可使受损Ast的分泌功能更加增强。结论:①体外模拟脑缺血再灌注使受损的Ast发生反应性胶质化,表现为分泌神经营养因子、炎性细胞因子及应激反应蛋白的能力增强。②抗呆Ⅰ号通过增强Ast的分泌功能来保护和修复受损的神经组织。     

脑卒中后抑郁模型大鼠脑单胺递质变化及中药颐脑解郁方的干预作用

目的:观察脑卒中后抑郁模型大鼠脑内单胺神经递质水平变化,以及中药颐脑解郁方对其的影响。方法:实验于2004-01-15/05在北京中医药大学基础医学院科研中心实验室及中心实验室高效液相测试中心进行。取雄性Wistar大鼠60只,随机分为正常组、脑卒中组、模型组、氟西汀组、颐脑解郁方组,每组12只。正常组不干预,其他4组复制局灶脑缺血模型,除脑卒中组外复制大鼠脑卒中后抑郁模型。造模结束后第1天分别开始灌胃双蒸水、氟西汀、颐脑解郁方共6周。用高效液相-电化学法测定脑前皮质、海马去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺及其代谢物5-羟基吲哚乙酸含量。结果:60只大鼠全部进入结果分析。在大脑前皮质中:①5-羟色胺含量:正常组[(512.78±73.00)ng/g]及脑卒中组[(484.05±55.92)ng/g]高于模型组[(375.93±86.35)ng/g],氟西汀组[(465.04±86.85)ng/g]和颐脑解郁方组[(459.41±68.24)ng/g]较模型组显著增加,但此两组间无差异。②去甲肾上腺素含量:模型组[(368.59±84.24)ng/g]较正常组显著降低[(438.82±63.21)ng/g],颐脑解郁方组[(485.91±58.98)ng/g]较模型组显著增加。③5-羟基吲哚乙酸含量:正常组[(615.68±65.01)ng/g]及脑卒中组[(600.67±41.17)ng/g]高于模型组[(501.78±82.88)ng/g],氟西汀组[(590.05±86.45     

大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液对皮层神经元活性的影响以及通络救脑注射液的干预作用

目的:探讨脑微血管内皮细胞条件培养液对神经元活性的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法:制备正常、正常用药、拟缺血损伤、拟缺血损伤用药4种脑微血管内皮细胞条件培养液(N-CM、NT-CM、I-CM、IT-CM),分别作用于培养的皮层正常神经元和拟缺血损伤神经元,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率检测分析各个条件培养液对神经元活性的影响特征。结果:①N-CM对正常神经元无明显影响,但对拟缺血损伤的神经元表现出一定的保护作用,尤其是NT-CM可明显提高受损的神经元活性;②I-CM可降低正常神经元活性,对已受损的神经元则进一步加重损伤,IT-CM可明显改善这种损伤状态。结论:脑微血管内皮细胞的旁分泌作用可能在中枢系统缺血性损伤中起重要作用,有可能是不能透过血脑屏障的中药成分发挥治疗作用的靶点。     

星形胶质细胞正常条件培养液对体外脑缺氧/复氧损伤神经元的影响

目的:探讨星形胶质细胞正常条件培养液(NCMA)对体外脑缺氧/复氧(H/R)损伤神经元的营养性作用。方法:先行大鼠大脑皮质星形胶质细胞和神经元的分离纯化培养,然后用NCMA以不同的浓度培养正常及脑H/R损伤的神经元,通过MTT法测定其神经元的活性和存活率。结果:NCMA能提高正常及脑H/R损伤神经元的活性和存活率。结论:NCMA对培养的神经元具有营养性支持作用。     

新生大鼠大脑皮层神经细胞的体外原代培养

本文探讨了新生大鼠出生２４ｈ内大脑皮层神经细胞原代培养的方法，建立了稳定的神经细胞培养模型。通过光镜和细胞Ｎｉｓｓｌ染色、ＡＣｈＥ染色，对培养各阶段的神经细胞进行了观察，系统地描述了它们的生长发育过程和形态特征。本方法扩大了大脑皮层神经细胞培养材料的来源。另外，对培养方法的特点进行了讨论。     

抗呆1号对脑缺血再灌注小鼠海马星形胶质细胞GFAP表达的影响

应用免疫组织化学方法探讨抗呆Ⅰ号对小鼠前脑缺血再灌注损伤后海马星形胶质细胞表达GFAP动态变化的影响,其与缺血性神经元的联系.结果显示:前脑缺血再灌注1 d只有少数星形胶质细胞表达GFAP,再灌注3 d表达GFAP的阳性细胞数增加,再灌注7～10 d表达GFAP的阳性细胞数达到高峰,同时,可见细胞反应性胶质化特征,前脑缺血再灌注15 d GFAP阳性反应细胞数仍维持在较高水平.用药组GFAP的表达细胞数较模型组明显减少.而正常对照组和假手术组只有少数星形胶质细胞表达GFAP.且星形胶质细胞表达GFAP的强弱与神经细胞的存亡有关.说明前脑缺血再灌注后海马反应性星形胶质细胞表达GFAP呈动态变化,抗呆Ⅰ号对缺血再灌注损伤星形胶质细胞和神经细胞有良好的保护作用.     

半夏泻心汤药物血清对ICC膜电位与[Ca2+]i的影响

半夏泻心汤出自张仲景的《伤寒论》,是治疗寒热错杂之心下痞的代表方剂之一,具有和中降逆,开痞散结之功。以往的研究表明,该方具有显著的调节胃肠运动的作用,为深入研究其作用机制,笔者采用细胞分离、培养和激光共聚焦显微扫描等技术,通过观察半夏泻心汤药物血清对小鼠胃肠起搏     

脑卒中后抑郁状态模型大鼠学习和记忆水平的Morris水迷宫测定

目的:观察脑卒中后抑郁状态模型大鼠学习和记忆水平的变化。方法:实验于2004-01/04在北京中医药大学基础医学院科研中心实验室进行。取雄性Wistar大鼠36只随机分为正常组、脑卒中组、抑郁组各12只。正常组大鼠不干预,脑卒中组大鼠首先制造局灶脑缺血,抑郁组大鼠在局灶脑缺血模型基础上复制大鼠脑卒中后抑郁状态模型。以蔗糖水消耗量进行行为学评价,以OPEN-FIELD测定直立活动和水平活动得分,以Morris水迷宫测试评价各组大鼠其学习和记忆水平。结果:36只大鼠均进入结果分析。①蔗糖水消耗量:脑卒中组大鼠[(23.51±3.42)g]低于正常组[(26.13±3.80)g],但差异无统计学意义(P>0.05);抑郁组[(19.85±3.06)g]低于正常组,差异有非常显著性意义(F=10.10,P<0.01)。②水平和直立活动得分:抑郁组较脑卒中组得分显著降低[(12.25±3.60,7.08±1.73)比(26.00±6.78,15.83±4.37),P<0.01]。③Morris水迷宫学习成绩:随着学习时间的延长,各组平均逃避潜伏期均显著下降,但抑郁组下降趋势较正常组和脑卒中组缓慢。第3,4天抑郁组平均逃避潜伏期[(13.78±4.45),(10.49±4.99)s]较正常组[(8.09±5.40),(6.18±2.90)s]和脑卒中组显著延长[(7.53±4.42),(7.37±2.41)s,P<0.01,P<0.05]。④Morris水迷宫记忆成绩:脑卒中组和抑郁组的