介绍一种有效的拯救小鼠杂交瘤的方法:脾内接种法

在小鼠杂交瘤的制备、传代过程中,常遇到一些棘手问题;小到影响实验进展,大到细胞丢失:其中常见的是 1.污染,包括支原体、细菌及真菌污染。在杂交瘤未冻存前:这些污染会造成很大的损失。2.有些杂交瘤复苏后不易存活。3.个别情况下杂交瘤增殖不良,不易向24孔板内扩增。腹腔接种在一定程度上可以解决这一问题,但常规方法要求细胞数量较     

日本脑炎病毒单克隆抗体的研究进展

近年来,抗各种不同日本脑炎病毒(JEV)株的McAb不断产生,并已在JEV的研究中广泛应用,取得了前所末有的进展。在分子病毒学中,McAb为进一步弄清JEV的抗原位点,不同位点之间的关系,不同位点与不同生物学功能之间的关系,以及选择保护性位点,制备亚单位疫苗提供了有力的工具。在乙脑检验诊断中,McAb为检出JEV,阐明JEV不同毒林之间的关系提供了条件。在乙脑实验性治疗以及对临床患者探索性治疗中,McAb为乙脑的特异性防治提供了依据,是一种很有希望的制剂。     

抗人白细胞间素-2多克隆及单克隆抗体的生物学特征

利用人工合成的白细胞间素2(IL-2)多肽片段,用中和试验、竞争ELISA和染色IL-2分泌细胞的碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标技术,对己制备的抗人IL-2多克隆抗体及单克隆抗体(McAb)的表位特异性、中和活性、亲和常数及杭天然IL-2的反应性进行了全面鉴定。结果表明:利用多种免疫方案、融合前强化加强免疫及多个脾脏混合融合制备策略所获得的McAb,在生物学特征上表现出多样化,即这些McAb的表位特异性、中和活性、亲和力及抗天然IL-2活性各不相同。其中抗IL-2 C末端的McAb为首次报道。这组McAb适用于对IL-2研究的不同目的。     

抗细菌外毒素的单克隆抗体的研究进展

近年来,对细菌外毒素的研究已从胞细水平,分子水平进入基因水平。目前已对一些常见的外毒素如霍乱弧菌肠毒素、大肠杆菌的ST和LT、白喉杆菌外毒素、破伤风杆菌痉挛毒素等高产菌株的外毒素进行基因克隆,并报道了产毒条件,提纯方法、分子结构 理化生物学特性及检验技术。使人们可为制备抗外毒素单克隆抗体(McAb)提供充足的外毒素抗原,用于外毒素分子结构与     

肾综合征出血热病毒76－118株的反转录及聚合酶链反应扩增、鉴定的初步研究

用反转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增了肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）７６－１１８株ＭＲＮＡ３＇－端２３７ｂｐ基因片段。制备了长臂光敏氨基已酸生物素标记的２３７ｂｐ探针。经琼脂糖电泳和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹，生物素－亲和素系统杂交和显色，对２３７ｂｐ扩增产物进行了特异性和灵敏性鉴定。ＰＣＲ技术与反转录技术相结合可用来对一些ＲＮＡ病毒进行研究和诊断，并能快速制备出质量较好的标记探针。     

细胞介导细胞毒试验方法的种类及其评价

细胞介导细胞毒(CMC)在机体抗感染、同种排斥及抗肿瘤免疫中有极为重要的作用.参与CMC的细胞除细胞毒T细胞及自然杀伤细胞外,粒细胞及巨噬细胞(Mφ)也能直接杀伤各种瘤细胞.这些细胞的杀伤机制有所不同,但其杀伤过程一般均可分为识别、结合、杀伤启动并产生致死性打击、靶细胞死亡等几个阶段.因此,完善的测定CMC的细胞毒方法(CMCA)不应仅以靶细胞受损、死亡的量来反映杀伤细胞的活性,而且应能反映出杀伤过程中,效应细胞     

单克隆抗体在自然杀伤细胞研究中的应用

自然杀伤细胞(NK)在机体抗御肿瘤,抗感染及抗移植物的免疫应答中具有重要的作用、受到人们的重视。NK不但能在体内外非特异性地杀伤各种肿瘤靶细胞,并能通过杀伤作用及分泌免疫因子参与机体免疫调节,在免疫网络中占有显著的地位。NK细胞是一个异质性细胞群,在形态,功能和表型上与其它免疫细胞相重叠,而发现的NK细胞特异性标志又极少,给研究工作带来了困难。近年来,由于杂交瘤技术及淋巴因子依赖性淋     

控制聚合酶链反应的污染问题

聚合酶链反应(Polymerase Chain Rea-ction,PCR)能高效扩增目的DNA 片段,在数小时内完成20～50个循环就可以使目的DNA 扩增数百万倍。现已广泛用于基因的结构与功能的研究,并大大地推动了分子生物学及有关学科的飞速发展。PCR 不仅可用于基因的分离、克隆和核酸序列分析、以及在突变体和重组体的构建,基因表达调控的研究,基因的多态性分析,肿瘤机制探讨等中显示强大的生命力;而且在传染病和遗传病的诊断、法医鉴定等中具有先进性和实用性。因此,PCR 无论是     

抗家鼠型肾综合征出血热病毒单克隆抗体对感染乳鼠保护作用的初步研究

以家鼠型HFRS病毒R22株100LD_(50)感染2～4日龄乳鼠。于感染后0、48、96及120h分别经腹腔注射对该株病毒具有中和活性的单一McAb或混合McAb,同时设该病毒免疫血清、单注射该病毒和Sp2/0腹水3种对照,观察McAb对感染乳鼠的保护作用,观察时间为35d。结果在感染后96h内注射单一McAb、混合McAb及免疫鼠血清的保护率均可达100％,而Sp2/0腹水对照组与病毒对照组的乳鼠均在感染后第13～16d发病死亡。在死亡乳鼠的脑,肺组织中检出了HFRS病毒抗原,而在保护存活乳鼠的脑、肺组织中均未检出病毒抗原。McAb对感染乳鼠的保护率与其浓度相关。在感染后24h分别注射不稀释、10~(-1)、10~(-2)和10~(-3)稀释的混合McAb,其保护率依次为100％、88.7％、55.6％和16.7％。     

抗人白细胞间素Ⅱ高效价多克隆及单克隆抗体的制备

采用不同免疫方案免疫家免及小鼠制备抗人IL-2多克隆及单克隆抗体．其中以沙门氏菌体吸附方法效果最佳，其免疫效价比福氏佐剂方法高数倍、而抗原用量却仅为前者的1／4。选用强化加强免疫及细胞富集措施，并采用大鼠胸腺混合培养上清替代滋养细胞，一次融合获得106个阳性株。经过自然淘汰试检，筛选出18株稳定分泌抗人IL-2单克隆抗体的杂交瘤，其中未亚克隆化的原始孔细胞在体外连续传代2个月以上，仅三株出现抗体转阴现象。