荧光定量聚合酶链反应检测miR-342-3p及靶基因EVL在多发性骨髓瘤细胞中的表达

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者中miR-342-3p及靶基因EVL的表达情况及意义。方法建立应用颈环式结构引物反转录扩增微小RNA(miRNA)的反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,并采用荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)对miR-342-3p及靶基因EVL的表达进行定量分析。结果①5例MM患者中miR-342-3p相对表达量为7.6±5.7,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②MM细胞株U266中miR-342-3p相对表达量为7.0±3.2,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。③5例MM患者中EVL基因相对表达量为6.3±3.2,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。④MM细胞株U266中EVL基因相对表达量为4.3±1.1,较对照组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MM存在miR-342-3p及EVL基因表达异常,可能为研究MM发病机制提供思路。     

多发性骨髓瘤患者外周血CD4~+T淋巴细胞亚群特点研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者外周血CD4+T淋巴细胞亚群特点。方法用流式细胞术检测30例MM初诊患者、20例治疗后患者及10名健康志愿者(对照组)外周血CD4+T淋巴细胞亚群,比较分析3组之间调节性T细胞(Treg)、辅助性T细胞(Th)1、Th17比例及Treg/Th17、Th1/Th17比值。结果初诊MM患者外周血Th17比例明显高于对照组,Treg、Th1比例及Treg/Th17、Th1/Th17比值明显低于对照组。治疗后患者Treg、Th1比例及Treg/Th17、Th1/Th17比值较治疗前明显提高,Th1及CD4+CD25+细胞比例基本恢复至对照组水平,CD4+Foxp3+细胞比例及Treg/Th17、Th1/Th17比值仍明显低于对照组。结论 MM患者外周血Th17细胞在初始T细胞的分化过程中取得了极化优势。治疗后Th17细胞极化优势现象明显改善,Th17细胞可能参与了MM的疾病进程。     

儿童慢性特发性血小板减少性紫癜Th1和Th2功能极化分析

目的探讨Th1/Th2极化改变与儿童cITP之间关系。方法流式细胞仪检测21例cITP患儿糖皮质激素治疗前后和28例健康者外周血CD3＋CD8-细胞内IFN-γ和IL-4表达。结果cITP患儿治疗前Th0、Th1细胞和Th1/Th2比值较对照组显著降低（P〈0.01）,治疗后Th0、Th1细胞和Th1/Th2比值较治疗前显著增高（P〈0.01）,与对照组比较,治疗后cITP患儿Th0、Th1细胞增高（P〈0.05）,Th2细胞和Th1/Th2比值无显著差异（P〉0.05）。结论cITP患儿起病时表现为Th1减低,Th2相对优势表达,治疗有效者表现为Th1显著增高,Th2无改变,cITP起病时Th1分泌的IFN-γ分泌减少可促进产生自身抗体,糖皮质激素治疗主要通过增加IFN-γ的分泌达到治疗目的。     

儿童特发性血小板减少性紫癜外周血Th细胞IFN-γ、IL-4表达分析

目的研究儿童特发性血小板减少性紫癜(ITP)体内Th1/Th2失衡及其与疾病关系。方法采用流式细胞仪对53例ITP患儿(急性32例,慢性21例)治疗前后和28例健康者外周血CD3+、CD8-细胞内IFN-γ和IL-4表达水平进行检测分析。结果急性ITP患儿起病时Th细胞中表达IFN-γ(Th1)阳性百分比高于正常人(P<0.05),而慢性ITP患儿Th1细胞较对照组显著降低(P<0.01),治疗缓解后急性ITP患儿Th1细胞与对照组无明显差别(P>0.05),慢性ITP患儿Th1细胞比例增高(P<0.05)。结论儿童急、慢性ITP呈现不同的Th1/Th2极化失衡,与疾病的活动、缓解有一定的关系,提示Th1/Th2极化在疾病发生中可能起了重要作用。     

多发性骨髓瘤微小RNA基因序列突变的检测及其意义

目的 了解多发性骨髓瘤(MM)患者微小RNA(miRNA)基因突变率及其临床意义.方法 采用聚介酶链反应单链构象多态性(PCR-SSCP)银染法检测4种人类MM细胞系(KM-3、ARH-77、U266、RPMI8226)、20例MM患者及20例血液学正常者12种miRNA基因突变,实验结果结合临床分析.结果 细胞系KM-3、RPMI8226检测出miRNA-335基因突变;MM患者中检出miR-19a、miR-19b和miRNA-335基因突变各1例,总突变率为15.00%(3/20);正常对照组未检出突变.病例组突变者中1例确诊4个月左右死亡,2例取材时已处于疾病终末期.结论 miRNA基因在MM中存在较高的突变率,miR-19a、miR-19b和miRNA-335基因突变可能与MM发病机制有关;发生突变的患者(表现)临床预后差,对miR-19a、miR-19b和miRNA-335基因突变的检测可能有助于对MM病程进展和预后的分析.     

慢性免疫性血小板减少性紫癜患者滤泡辅助性T细胞变化的研究

目的 探讨滤泡辅助性T细胞（Tfh）在成年人慢性免疫性血小板减少性紫癜（ITP）免疫发病机制中的作用.方法 采用流式细胞术检测42例慢性ITP患者治疗前后、42名健康者外周血CXCR5＋CD4＋细胞比例,采用酶联免疫吸附试验检测血浆白细胞介素（IL）-21浓度.结果 初发ITP患者组外周血中CXCR5＋CD4＋T细胞占CD4＋T细胞比例高于健康对照组[（12.15±6.82）％比（8.79±4.91）％,P＜ 0.005];经过激素治疗后,ITP患者外周血中CXCR5＋CD4＋T细胞占CD4＋T细胞比例有所下降[治疗后（9.01±5.13）％,P＜ 0.001],治疗后与健康对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）.初发ITP患者外周血血浆IL-21浓度高于健康对照组[（97.56±29.48） μg/ml比（30.36±12.93） μμg/ml,P＜0.001];经过激素治疗后,ITP患者外周血血浆IL-21浓度较治疗前有所下降[治疗后（67.35±20.58） μμg/ml,P＜0.001],但仍高于健康对照组（P＜ 0.001）.结论 慢性ITP患者存在Tfh细胞分布及功能异常,可能与慢性ITP的发生发展有关.