三色流式细胞术分析儿童初治急性淋巴细胞白血病免疫表型特征

目的:应用三色流式细胞术研究儿童急性淋巴细胞白血病(AL L)免疫表型特征。方法:采用CD4 5/ SSC双参数散点图设门方法检测37例儿童AL L 免疫表型。结果:37例儿童AL L 中B- AL L 34例,占91.9% ,其中CD1 9阳性表达率10 0 % ,明显高于CD1 0 (82 .4 % ,P<0 .0 5 )和CD2 2 (6 1.8% ,P<0 .0 1)的表达。T- AL L 2例,仅占5 .4 % ;CD34 /HL A- DR阳性率较高(86 .5 % / 81.1% ) ,二者表达较一致;AL L 伴髓系抗原表达占2 7% ,主要表达CD33。结论:儿童AL L中以B- AL L为主,B- AL L白血病细胞稳定持续表达CD1 9,CD1 9是诊断B- AL L较为可靠的表面标记。此外,儿童AL L具有较高的CD34 和髓系抗原表达。     

TFPI-2对K562细胞体外生长和侵袭能力的影响

目的研究组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）基因对白血病细胞系K562细胞生长和侵袭的影响。方法通过脂质体法将TFPI-2基因转染到K562细胞,用实时定量RT—PCR和Western blot分别检测转染前后TFPI-2mRNA和其蛋白质的表达。生长曲线测定,平板克隆和（Transwell）小室穿透实验测定转染前后3组细胞生长、恶性增生能力以及体外侵袭能力的差异。结果转染成功TFPI-2基因的K562细胞（K562-T）有TFPI-2mRNA及其蛋白质的表达,与对照组K562组、K562-V组细胞相比,K562-T细胞生长速度缓慢,克隆形成率明显低于前2组（P〈0．05）,有统计学意义;其穿膜细胞数（16&#177;4．51）明显低于前两者（33．67&#177;4．51）及（28．67&#177;3．51）,P〈0．05,有统计学意义。结论TFPI-2基因对K562细胞的生长和侵袭能力有抑制作用。     

地中海贫血筛查指标的临床应用价值

目的探讨地中海贫血筛查指标的临床应用价值。方法采用红细胞脆性、平均红细胞体积(MCV)、血红蛋白电泳筛查地中海贫血可疑病例,并对可疑病例进行地中海贫血基因诊断和血清铁蛋白检查。结果①从3644例受检者中筛查出636例可疑地中海贫血患者,红细胞脆性、MCV、HbA2三者检出率分别为17.5%、17.1%、7.1%;可疑地中海贫血患者中,红细胞脆性<70%、MCV<80fL、HbA2≥3.5%的患者分别为100%、97.8%、40.4%。②可疑地中海贫血患者中,红细胞脆性<65%组与脆性为65%～70%组比较,地中海贫血基因诊断符合率差异有统计学意义(P<0.05),但后组基因诊断符合率仍然高达54.3%。③可疑地中海贫血患者中,MCV<80fL组与MCV≥80fL组比较,HbA2≥3.5%且MCV<80fL组与HbA2≥3.5%且MCV≥80fL组比较,地中海贫血基因诊断符合率差异无统计学意义(P>0.05)。④可疑地中海贫血患者中确诊缺铁性贫血、地中海贫血、地中海贫血合并缺铁性贫血比例分别为16.3%、67.0%、16.7%,地中海贫血筛查的特异性为83.7%。结论①红细胞脆性<70%是地中海贫血筛查最敏感简便的指标,宜作为产前检查地中海贫血筛查指标。②MCV<80fL是地中海贫血筛查的简便指标,但需要结合红细胞脆性、HbA2等红细胞参数提高检出率。③对筛查出的可疑地中海贫血患者必须同时进行地中海贫血基因检查和铁代谢检查。     

多发性骨髓瘤患者间充质干细胞TAZ和Wnt/β-catenin基因表达及其骨潜能的研究

 目的　研究多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓间充质干细胞（MSC）成骨诱导后成骨转录共刺激因子（TAZ）和Wnt／β-catenin mRNA的表达,探讨多发性骨髓瘤骨病（MBD）潜在的治疗靶点。方法　体外分离培养10例初治MM患者及10名健康对照者骨髓MSC,体外诱导分化为成骨细胞,茜素红实验检测矿化物沉积、荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测骨桥蛋白（OPN）、骨钙素（OC）、碱性磷酸酶（ALP）、核心结合因子α1（Cbfα1）mRNA的表达,分析成骨细胞分化指标变化;荧光定量RT-PCR方法检测成骨细胞的TAZ、Wnt／β-catenin mRNA,分析两组间TAZ和Wnt／β-catenin mRNA表达差异。结果　骨髓MSC 体外成骨诱导后,茜素红染色阳性,呈现明显红色钙化结节;实验组MSC 诱导后与诱导前相比,成骨细胞分化指标OC、ALP、Cbfα1 mRNA表达增高[（2.0958±0.5665、2.6670±0.3847、0.8463±0.3473）比（1.3487±0.9291、1.1452±0.6054、0.4439±0.2945）]（t值分别为2.171、6.709、2.795;均P＜0.05）;对照组MSC 诱导后与诱导前相比,成骨细胞分化指标OPN、OC、ALP、 Cbfα1 mRNA表达增高[（2.1096±0.8267、2.8991±0.3531、4.3045±0.2844、1.3273±0.4075）比（1.2200±0.9091、0.8780±0.3927、1.9161±0.2684、0.6736±0.2513）]（t值分别为2.289、12.103、25.134、4.411;均P＜0.05）。MSC 体外诱导成骨细胞,实验组与对照组相比,成骨指标OPN、OC、ALP、Cbfα1 mRNA表达降低[（1.2710±0.5636、2.0958±0.5665、2.6670±0.3847、0.8463±0.3473）比（2.1096±0.8267、2.8991±0.3531、4.3045±0.2844、1.3273±0.4075）]（t值分别为-2.650、-3.805、-10.822、-2.841;均P＜0.05）。实验组骨髓MSC体外成骨诱导后TAZ、β-catenin mRNA（2.2315±1.0723、0.5801±0.2159）比对照组（4.4140±0.8325、0.9516±0.292）表达降低（t值分别为-5.085、-3.235;均P＜0.05）。结论　骨髓MSC 体外诱导细胞OPN、OC、ALP、Cbfα1 mRNA表达增高,成功诱导分化为成骨细胞;MM患者MSC 向成骨细胞分化潜能比健康人降低,TAZ和Wnt／β-catenin 基因可作为MBD的潜在治疗靶点。     

Wnt/β-catenin基因对骨髓瘤患者间充质干细胞成骨潜能的影响

目的:探讨Wnt/β-catenin基因和多发性骨髓瘤骨病的关系。方法:分离培养多发性骨髓瘤患者和正常人的骨髓间充质干细胞(MSCs),体外诱导分化成骨细胞,茜素红实验检测矿化物沉积、荧光定量RT-PCR方法检成骨指标(OPN、OC、ALP、Cbfal)和Wnt/β-catenin mRNA表达,分析MSCs细胞成骨能力变化及两组间Wnt/β-catenin mRNA表达差异。结果:骨髓MSCs体外成骨诱导后,茜素红染色阳性,呈现明显红色钙化结节;MSCs体外诱导成骨细胞,试验组与对照组比较,成骨指标OPN、OC、ALP、Cbfαl mRNA表达降低(P<0.05);骨髓MSCs体外成骨诱导后β-catenin mRNA表达降低(P<0.05)。结论:骨髓MSCs体外可成功诱导分化为成骨细胞;多发性骨髓瘤患者MSCs向成骨细胞分化潜能比正常人降低,Wnt/β-catenin可作为多发性骨髓瘤骨病潜在治疗靶点。     

赛格力与惠尔血动员健康供者造血干细胞效果的比较

目的:回顾性比较国产粒细胞集落刺激因子(G–CSF)赛格力与进口G–CSF惠尔血对健康供者外周血造血干细胞的动员效果。方法:供者应用赛格力或惠尔血4.2~12.8μg·kg~(-1)·d~(-1)连续5 d皮下注射,若第4天白细胞低于30×10~9·L~(-1),第4.5天开始采集前2 h加用G–CSF 5μg·kg~(-1)皮下注射,用COBE Spectra血细胞分离机采集外周血造血干细胞,若采集数量不够,第5.5天再采集1次。并观察供者动员、采集时出现的不良反应。结果:赛格力组与惠尔血组所用剂量,分别为(7.6±1.6)μg·kg~(-1)·d~(-1),(5.4±0.7)μg·kg~(-1)·d~(-1),组间比较,差异具有统计学意义(P0.05)。赛格力组与惠尔血组动员后白细胞均升高,分别为(43.3±11.1)×10~9·L~(-1),(45.1±7.5)×10~9·L~(-1),组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。赛格力与惠尔血对供者外周血造血干细胞的影响,赛格力组有2例供者需采集2次,两组结果分别为采集物单个核细胞(MNC)·kg~(-1)(9.3±4.4)×10~8·kg~(-1),MNC·kg~(-1)(8.9±6.2)×10~8·kg~(-1);CD34~+·kg~(-1)(6.9±5.3)×10~6·kg~(-1),CD34~+·kg~(-1)(8.3±7.3)×10~6·kg~(-1),组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。两种动员剂对供者不良反应无显著差异。结论:赛格力动员效果略差于惠尔血,但通过增加赛格力剂量、采集干细胞次数,两者均能成功的动员健康供者。赛格力能可靠用于健康供者的动员。     

JAK2V617F点突变在真性红细胞增多症中的诊断价值

目的:探讨JAK2酪氨酸激酶点突变(JAK2V617F点突变)在真性红细胞增多症(PV)中的临床价值.方法:运用实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)检测25例血红蛋白量(HGB)男185～200 g/L,女165～200 g/L组(A组)及18例血红蛋白量男、女>200 g/L组PV患者(B组)、30例健康体检者(C组)外周血单个核细胞JAK2V617F点突变率;并比较PV患者中JAK2V617F点突变阳性组与阴性组之间的年龄、性别、血红蛋白量(HGB)、红细胞压积(HCT)、白细胞数(WBC)、血小板数(BPC)等临床特征.结果:43例PV患者外周血单个核细胞中JAK2V617F点突变率为88%;25例A组及18例B组PV患者外周血单个核细胞中点突变率分别为88%,89%,两组间无统计学差异,P>0.05,30例C组点突变均为阴性;43例PV患者中,JAK2V617F点突变阳性组与点突变阴性组比较,两组在发病年龄、HGB、HCT均无统计学差异;阳性组白细胞计数、血小板计数分别为(12.8±6.0)×109/L、(486±108)×109/L,均显著高于阴性组的(7.9±1.1)×109/L、(320±97)×109/L,P<0.05.结论:JAK2V617F点突变结合血红蛋白量测定可以作为真性红细胞增多症的辅助诊断依据.JAK2V617F点突变阳性组与阴性组患者临床特征存在一定差异.     

急性非淋巴细胞白血病患者NK细胞亚群及其NCR受体测定

目的： 探讨初发的急性非淋巴细胞白血病患者NK细胞亚群分布及自然细胞毒受体（NCR）的水平。方法：应用流式细胞仪技术测定26例初发急性非淋巴细胞白血病患者外周血NK细胞、NK细胞亚群、自然细胞毒受体。结果： 初发急性非淋巴细胞白血病患者外周血NK细胞明显低于对照组（P<0.01），CD56bright及CD56dimNK细胞明显低于正常对照组（P<0.01），NKp30、NKp44、NKp46在CD56+CD3-细胞中的表达均低于正常对照组（P<0.05）。结论： 急性非淋巴细胞白血病发病可能与NK细胞及亚群减低，自然细胞毒受体表达降低有关。     

腺病毒载体介导的发夹状RNA抑制三氧化二砷耐药的K562/AS2细胞MRP1基因表达的实验研究

 目的　构建MRP1特异性发夹状RNA（shRNA）重组腺病毒载体,并研究其对耐三氧化二砷（ATO）的白血病K562／AS2细胞MRP1基因表达的抑制作用。方法　构建MRP1特异性shRNA重组腺病毒,并感染K562／AS2细胞;用荧光实时定量PCR法分析MRP1 mRNA的表达水平;流式细胞术检测MRP1蛋白表达;MTT法检测该细胞对ATO及依托泊苷（VP16）的细胞毒作用。结果　pAd-EGFP-U6-MRP1-shRNA重组腺病毒感染前后,K562／AS2细胞中MRP1 mRNA和蛋白表达水平分别为（34.70±0.28）、（4.19±0.03）（P＜0.05） 和 （26.40±0.16）、（10.85±0.37）（P＜0.05）;感染前后K562／AS2细胞对ATO及VP16耐药倍数分别为（11.4078±0.3183）、（1.6126±0.3015）和（5.9141±0.0149）、（1.7664±0.1038）,逆转倍数分别为（7.2409±1.3668）和（3.3555±0.1886）（P＜0.05）。结论　成功构建了pAd-EGFP-U6-MRP1-shRNA重组腺病毒载体,该载体感染K562／AS2细胞后可抑制细胞MRP1基因表达以及逆转该细胞对ATO和VP16的耐药。     

实时定量RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的临床意义

目的:探讨实时定量RT-PCR方法检测急性早幼粒细胞白血病(APL) PML/RARα融合基因的临床意义.方法:采用实时定量RT-PCR方法,用Taqman探针检测32例初治APL患者的PML/RARα融合基因3种异构体表达水平,并对治疗过程中的20例患者融合基因表达水平进行动态观察. 结果:①实时定量RT-PCR的敏感度为101拷贝数/μl,标准品日间差异及日内差异平均变异系数均<5%;②32例PML/RARα融合基因阳性的初治APL患者中,21例为PML/RARα融合基因长型异构体,11例为PML/RARα融合基因短型异构体;③32例初治患者PML/RARα融合基因表达量中位数和±s分别为1.44%,(1.29±1.46)%.比较异构体长型及短型标准拷贝数(NCN)中位数和±s分别为1.40%,(1.46±1.18)%和1.28%,(1.39±1.51)%,差异无统计学意义P<0.05;④20例治疗后APL患者PML/RARα融合基因表达水平随着临床治疗而改变.结论:①建立了检测APL微小残留病的高敏感性、高特异性的实时定量RT-PCR方法;②32例初治APL患者PML/RARα融合基因长型及短型异构体mRNA NCN差异无统计学意义;③PML-RARα融合基因表达水平的变化与临床疾病发展相一致,有助于疗效评价、微小残留病的检测和预后判断.