携带融合基因穿梭质粒的构建及在人肝癌细胞中的表达

构建携带胸苷激酶(tk)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因穿梭质粒,并观察其在肝癌细胞系HepG2细胞中的表达。应用基因重组技术,构建EGFP与tk的融合表达穿梭质粒载体,经限制酶切鉴定和测序分析,脂质体转染将其导入HepG2中,48h后用荧光显微镜观察荧光的表达,RT-PCR法检测融合蛋白tk和EGFP的mRNA表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测转染融合蛋白载体后不同浓度的更昔洛韦(GCV)对HepG2细胞的细胞毒作用。酶切鉴定和测序分析证实重组质粒中插入融合目的基因片断及载体DNA大小、方向和插入位点正确,在转染此穿梭质粒的HepG2细胞中检测到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR检测到融合蛋白tk和EGFP的mRNA表达;GCV对转染了携带tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体有明显的细胞毒作用。成功构建携带tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体,转染人肝癌细胞株HepG2中tk和EGFP的独立表达没有受到影响,该载体可利用绿色荧光蛋白作为报告基因监测tk的表达并可用于肝癌的自杀基因治疗。     

医院医疗质量管理的完善与实施

医院医疗质量管理的完善与实施关健词医院管理，质量管理，质控标准医疗质量考评在实行现代科学方法管理中，为加强医院管理，不断提高医疗质量．逐步把分散的质量管理方法，纳入统一的、强有力的质量管理体系，做到医疗质量管理工作制度化、规范化、系列化、程序化，从而...     

内镜下喷注胃止血胶治疗消化性溃疡并出血48例观察

本文介绍了我院自1995年以来，在内镜直视下喷注胃止血胶（简称V2胶）治疗消化性溃疡并出血的方法及治疗效果。1材料与方法病人按常规准备，咽部给予充分麻醉，另备注胶管、注射器及胃止血胶。首先在内镜下消除胃内血块，吸尽胃液，并在内镜直视下，找准出血部位，将溃疡面吸干     

姜黄素对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的　观察姜黄素对体外培养肝星状细胞 (HSC)增殖与凋亡的影响。方法　不同浓度姜黄素处理HSC株HSC T6 ,MTT法检测细胞增殖 ,流式细胞仪、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果　在 2 0～ 10 0 μmol/L浓度范围内 ,姜黄素可剂量依赖性地抑制HSC增殖 (P <0 .0 1)。 2 0、4 0、6 0 μmol/L姜黄素处理HSC 2 4h后 ,细胞周期分析发现S期细胞减少 ,G2 /M期细胞显著增加 (P <0 .0 1) ;流式细胞术检测到明显的亚G1峰 ,各组的凋亡指数 (% )分别是 15 .3± 1.9,2 6 .7± 2 .8,37.6± 4 .4 ,与对照组 (1.9± 0 .6 )相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;4 0 μmol/L姜黄素作用 12、2 4、36、4 8h ,凋亡指数 (% )分别是 12 .0± 2 .4、2 6 .7± 3.5、33.8± 1.8和 4 9.3± 1.6 ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;透射电镜观察到细胞皱缩、核染色质浓缩沿核膜排列和凋亡小体形成等 ;琼脂糖凝胶电泳可见到明显的DNA梯带形成。结论　姜黄素可显著抑制HSC增殖 ,使细胞周期停滞于G2 /M期 ,并诱导其凋亡 ,其作用具有时间和剂量依赖性     

单链抗体在消化系肿瘤免疫诊治中的作用研究进展

新型小分子抗体-单链可变区片段(scFv)是用基因工程方法将抗体重链和轻链可变区通过一段连接肽连接而成的重组蛋白,是保持了亲本抗体的抗原亲和活性和特异性的最小功能性抗体片段,具有分子量小、免疫原性低、血液清除快、肿瘤穿透性强、成本低等优点,可成为将药物、毒素、放射性核素、细胞因子导向肿瘤的有价值的分子,并在肿瘤疫苗的开发和诊断试剂的发展上具有较大的潜力。文章主要就当前scFv在消化系肿瘤免疫诊治的进展以及应用中存在的问题作一简要综述。     

弹性酶治疗高脂血症性非酒精性脂肪性肝病的临床观察

目的观察弹性酶肠溶片治疗高脂血症性非酒精性脂肪性肝病的有效性、安全性及耐受性,为临床应用提供依据.方法将76例高脂血症性非酒精性脂肪性肝病患者,随机分为弹性酶组（n=44）,口服弹性酶肠溶片（300 IU/粒）,每次2粒,每日3次,疗程60天,安慰剂组（n=32）,口服安慰剂（淀粉）,剂量及疗程相同;治疗前、治疗30天、60天分别检测肝、肾功能、血脂,并B超随访.结果 6例患者治疗中失访,70例患者纳入疗效统计.弹性酶组总有效率为85%（34/40）,安慰剂组总有效率为20%（6/30）,两组比较差异有统计学意义（P=0.000）;弹性酶组肝功能、血脂明显改善,两组比较差异有统计学意义（P《0.05）;弹性酶对肾功能无明显毒副作用.结论弹性酶肠溶片具有改善肝功能、降低血脂、防治高脂血症性非酒精性脂肪性肝病的作用.     

临床病理讨论 第298例——腹胀伴呕吐、腹痛、休克、猝死

病历摘要患者男 ,4 6岁 ,因上腹胀 6h ,伴频繁呕吐、腹痛 3h ,于2 0 0 2年 7月 2 6日晚 8点入院。 6h前因进食冻存饺子后 ,开始出现上腹部饱胀不适 ,但无腹痛、腹泻及发热。约在 3h前患者突然出现恶心、频繁呕吐 ,吐出胃内容物 ,无咖啡样物 ,伴阵发性上腹痛、胸痛 ,疼痛难忍 ,大汗淋漓 ,四肢乏力 ,视物模糊 ,随即不省人事 ,急诊以“休克原因待查”收入院。既往患者饮食不规则时容易出现腹胀、腹泻。 2年前体检时发现“高血压病” ,未接受正规治疗。否认肝炎、结核病史。家族史无特殊。入院体检 :T 35 7℃ ,P 130次 /分 ,R 2 5次 /分 ,BP …     

肝细胞癌血清学诊断研究进展

肝细胞癌(HCC)的早期,正确诊断仍是当前研究的热点和难点.以甲胎蛋白(AFP)为代表的血清肿瘤标志物检测结合影像学及病理学检查已成为肝癌早期诊断的重要手段之一.现就其最新进展作一简述.     

携带AFP增强子反义c-fms真核表达载体的构建及其临床意义

目的 构建人肝癌细胞中高效特异表达的反义c-fms真核表达载体,观察其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法 采用PCR法扩增人c-fms癌基因第571位酪氨酸为中心的DNA片段,将其反向克隆人pcDNA3载体（命名pAS);将扩增的人甲胎蛋白（AFP）增强子核心区克隆人pAS（命名pAEAS)。磷酸钙法将空载体pcDNA3及反义真核表达载体pAS、pAEAS分别转导入HepG2肝癌细胞及HeLa宫颈癌细胞,观察细胞生长速度及凋亡。结果 人反义c-fms基因片段及AFP增强子核心区片段,测序结果与Genbank中登录的序列一致。导入反义基因的HepG2肝癌细胞生长速度较对照细胞明显减慢（P＜0．05）,pAEAS抑制作用较pAS强（P＜0．05,pcDNA3组、pAS组、pAEAS组HepG2肝癌细胞凋亡率分别为5．25％、14．7％、31．2％（P＜0．01）,pAEAS组细胞DNA出现梯状凋亡带。在HeLa宫颈癌细胞中,pAS及pAEAS组生长速度减慢,但二者差异无显著性（P＞0．05）,pcDNA3组、pAS组、pAEAS组细胞凋亡率分别为3．99％、8．27％、8．86％（P＜0．05）,DNA均未出现梯状凋亡带。结论 携带AFP增强子的人反义c-fms真核表达载体对AFP阳性肝癌细胞生长有选择性抑制作用,可诱导凋亡,是一种新的肝癌基因治疗方法。     

多途径教学《微生物学》和《免疫学》

《微生物学》和《免疫学》是医学基础学科,与预防、保健、临床工作紧密联系,教学中理论深奥,重点难点不易把握,学生学习甚感抽象,难理解更难记忆。笔者在教学中发掘自身优势与学生潜力,想方设法提高学生积极性,激发学习兴趣,为培养实用型人才收到良好效果。