大鼠颈7神经根及其束支运动纤维含量与分布特点的研究

目的了解大鼠C7神经根各束支运动纤维含量及其功能定位，为临床选择神经供体提供依据。方法雄性SD大鼠30只，采用显微解剖方法将大鼠C7及其所属束支、上肢各神经终支分离，测量各束支截面积及计数运动纤维含量。结果大鼠C7神经根前股发出一定数量的运动纤维到肌皮神经、正中神经，总量约207根，但在C7前股定位不明确；后股发出相应的运动纤维束支到桡神经、腋神经与胸背神经，总量约323根，这些束支在C7后股的定位较明确。C7神经根所支配的范围很广，其中以C7后股发出的胸背神经束支支配的背阔肌占比例最大（运动纤维含量〉50％）。结论大鼠C7神经根前、后股束支、运动纤维分布与人类相似，是研究C7神经根选择性移位较好的动物模型。     

RNA干扰介导的蛋白酶体亚基RC2下调延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩

目的探讨RNA干扰（RNA interference, RNAi）介导的蛋白酶体亚基RC2（Rat component 2）下调延缓失神经肌萎缩的疗效。方法将48只SD大鼠，建立右下肢趾长伸肌失神经支配模型，随机分为实验组和对照组，每组24只。在电穿孔技术介导下，实验组和对照组分别转染含RC2基因和非同源对照序列的siRNA重组质粒溶液（0．8μg/μl）各50m。转染后3d，采用Western blot测定两组趾长伸肌中RC2蛋白含量；转染后14、21、28d，测定肌湿重维持率、肌肉蛋白含量和肌纤维横截面积，并观察肌纤维超微结构的变化。结果转染后3d，实验组RC2的蛋白水平明显下调，抑制率为25％，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）；转染后14d和21d实验组肌湿重维持率、肌肉蛋白含量和肌纤维横截面积均明显优于对照组（P〈0．05）；28d时，两组间各项指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论RNA干扰介导的蛋白酶体亚基RC2下调延缓失神经肌萎缩的疗效可以维持3周。     

药物及吸烟对大鼠血管吻合口内皮细胞愈合的影响

目的 观察肝素、利多卡因、阿司匹林等药物及香烟对血管吻合口内皮细胞的愈合方式与过程的影响。方法 雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠２３２只，按各组术后时间切取吻合口部位的血管壁作标本，用扫描电镜观察。结果 肝素、利多卡因、阿司匹林能抑制血小板在针孔处黏附聚集；促进纤维蛋白覆盖也促进血管内皮细胞早期向吻合口移行生长。大鼠被动吸烟则使血管吻合口处血小板聚集增多，时间延长，并延缓纤维蛋白在吻合口上的覆盖，抑制内皮细胞     

中药EGb_(24/6)对鼠坐骨神经损伤后神经元保护的实验研究

周围神经损伤后神经元的变性、死亡对周围神经再生及功能的恢复有着重大的影响[1] 。如何保护神经损伤后的神经元 ,减少其死亡 ,促进神经再生及功能恢复已引起重视。中药ＥＧｂ(ＥｘｔｒａｃｔｏｆＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ)通过对抗脑缺血引起的谷胺酸毒性作用 ,来保护神经元[2 ] 。我们用ＥＧｂ对神经损伤后神经元的变化进行了观察。一、材料与方法1.动物和分组 :雄性ＳＤ大鼠 18只 ,体重 180～ 2 2 0ｇ(鼠龄约 8～ 9周 )分成损伤对照组和实验组即ＥＧｂ2 4 / 6组 (ＥＧｂ2 4 / 6由美国ＰＨＡＲＭＡＮＥＸ ,ＩＮＣ公司提供 )。2 .手术方法…     

脑源性神经营养因子Va166Met多态性与脑出血的关联分析

目的探讨脑源性神经营养因子Va166Met多态性与脑出血的关系。方法采用限制性内切酶片段长度多态性技术检测脑源性神经营养因子Va166Met多态性,在110例脑出血患者和101名健康对照组中的分布;比较病例组、对照组基因型、等位基因分布差异。结果（1）脑出血组和对照组A基因型分布频率分别为0．40和0．20,显著高于对照组,差异具有统计学意义（χ^2=13．81,P=O．001）;（2）两组等位基因分布频率差异也具有统计学意义,差异具有统计学意义（χ^2=13．12,P=0．000）。结论脑源性神经营养因子Va166Met多态性的A等位基因同脑出血相关,可能该病的易感基因。     

颈7神经不同平面切断对神经元影响的实验研究

目的 研究颈7神经不同平面切断及不同时期对神经元逆行性退变的影响,为临床选择合适的时间和方法保护受损神经元提供实验依据.方法 36只SD雌性大鼠随机分为三组:对照组、神经根部切断组和神经支部切断组.利用True Blue逆行示踪技术对各组大鼠背根神经节感觉神经元和脊髓前角运动神经元精确计数,并利用神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)免疫荧光双标技术检验标记神经元的活性.结果 术后1周,神经根部切断组和神经支部切断组较对照组无明显的感觉和运动神经元数量变化.术后16周,神经根部切断组和神经支部切断组较对照组感觉和运动神经元减少,其中神经根部切断组较神经支部切断组减少更明显(P＜0.05).且各组True Blue标记神经元全部被NSE免疫荧光双标.结论 颈7神经根部切断和神经支部切断均发生感觉和运动神经元逆行性退变,且不同平面切断对神经元退变的影响有显著性差异.提示臂丛神经根性损伤后早期修复受损神经有利于防止神经元退变.     

神经干细胞移植再支配失神经骨骼肌的实验研究

目的 探讨采用神经干细胞移植的方法使失神经骨骼肌重获神经再支配的可行性。方法 将108只SD大鼠按注射药物的不同随机分为3组，每组36只大鼠。切断右侧胫神经建立腓肠肌失神经实验模型。实验组：将神经干细胞悬液注射到切断胫神经的远端。对照组：注射等量的细胞培养液。损伤组：注射等量的生理盐水。术后8、10、12周采用免疫组织化学、HRP逆行示踪技术和神经形态学的方法，检测失神经骨骼肌是否重新获得移植神经干细胞的再支配。结果 术后8周局部即可检测到分化的神经元和神经胶质细胞，其再生的轴突与靶肌肉已经建立神经突触连接。术后10、12周时，再生的神经纤维进一步增多。结论 周围神经断伤后局部用神经干细胞移植能够使远端失神经骨骼肌重新获得神经再支配。     

激活态雪旺细胞信号转导通路的初步研究

目的培养、鉴定激活态的雪旺细胞，探索激活态雪旺细胞信号转导通路。方法用改良成年sD大鼠雪旺细胞培养法激活态的雪旺细胞，S-100染色鉴定，Western Blot法测定ERK1／2水平，初步探索激活态雪旺细胞的信号转导通路。结果光镜下激活态雪旺细胞和正常态的雪旺细胞形态上无差异，S-100染色均为阳性，Western Blot法检测细胞内的ERK1／2水平无明显的差异，但P-ERK1／2水平两者差异有统计学意义（P〈0．01）。这可能是雪旺细胞被激活的一个关键。结论激活态雪旺细胞和正常态雪旺细胞是同一细胞的二种不同存在的状态，有活性的P-ERK1／2水平的升高可能是雪旺细胞激活的关键。对于激活态雪旺细胞完整的信号转导通路尚需要进一步研究。     

激活态许旺细胞在胶原几丁糖膜上的生长规律

背景：新型组织工程材料和许旺细胞扩增后置入生物合成管内去修复周围神经的缺损，是人工生物材料管的两大进展。 目的：以胶原几丁糖为支架，以激活态的许旺细胞为种子细胞，观察二者的亲和性以及激活态的许旺细胞在胶原几丁糖膜上的生长规律，为人工神经的预构做准备。 设计：开放性实验。 单位：复旦大学附属华山医院手外科。 材料：实验于2003-07／2003-12在卫生部手功能重建重点实验室完成。选取清洁级雄性SD大鼠4只。胶原几丁糖膜（上海其胜生物材料技术研究所提供），许旺细胞激活液（自制）。 方法：大鼠麻醉后坐骨神经切断预变性7d，再次麻醉后引颈处死，迅速切取双侧坐骨神经，置于含青霉素和链霉素的D—HANK’S液中，剔除神经外膜，剪碎成1min的小段，移入盛有质量浓度为5g／L的胰蛋白酶和0．6g／L的胶原酶的离心管中，每2mL液体中加入激活液0．5mL，复合酶分步消化法获激活态许旺细胞，以浓度为2&;#215;10^7 L^-1激活态的许旺细胞200μL接种于胶原几丁糖膜上和培养皿上，2周后通过相差显微镜和扫描电镜观察细胞生长情况，S-100染色鉴定细胞的纯化程度。 主要观察指标：①绘制细胞生长曲线，确定体外倍增时间。②激活态许旺细胞倒置相差显微镜下观察结果。③激活态许旺细胞接种于胶原几丁糖膜上扫描电镜观察结果。 结果：①体外倍增时间的确定：激活态的许旺细胞接种于胶原几丁糖膜和培养皿上时的浓度均是2&;#215;10^7 L^-1，2周后细胞浓度分别达到30&;#215;10^7 L^-1和20&;#215;10^7 L^-1。根据DT=（t-t0）lg 2／（lgn-lgno）算出激活态许旺细胞在胶原几丁糖膜上的倍增时间为4d。②激活态许旺细胞倒置相差显微镜下观察结果：接种于培养皿上的激活态许旺细胞24h后大多数由圆球形变成长梭形，有突起，多为双极，也有的呈三极状；接种于膜上的激活态许旺外形上和培养皿中无明显差异，但膜上的激活态许旺细胞在相差显微镜下犹如“刻在沙地上的文字”一般。S-100染色见激活态许旺细胞成棕色，纯度达95％以上。③激活态许旺细胞接种于胶原几丁糖膜上扫描电镜观察结果：激活态许旺细胞多数生长于胶原几丁糖膜的凹陷中或紧贴膜表面，呈有规律的首尾相接贴附于膜上，胞体呈纺锤形，直径在4-6μm，长度为60-80μm，细胞呈梭形，有许多细小分枝。1周时膜的形态仍然完整。 结论：胶原几丁糖膜和高度纯化的激活态许旺细胞有良好的亲和性，以其为工艺材料制成的组织工程支架很有可能在促进周围神经再生中发挥优势作用。     

不同部位骨骼肌失神经支配后超微结构变化的实验研究

目的：探讨长期失神经支配后萎缩骨骼肌神经修复手术疗效欠佳的机制。方法：12例臂丛神经损伤后1、2、3、6、12和18个月患者，术中切取小指展肌和肱二头肌的失神经骨骼肌，以相同部位的正常骨骼肌作对照，观察失神经骨骼肌超微结构和计数肌卫星细胞数量变化。结果：失神经支配后2个月，骨骼肌细胞的超微结构基本正常，肌纤维周围无明显增生的胶原纤维，可见到运动终板，肌卫星细胞数量多；6个月，肌丝断裂，排列紊乱现象明显增多，细胞核体积变小，染色加深，细胞核固缩，肌纤维周边出现较多的成纤维细胞和脂肪细胞以及增生的胶原纤维；12个月后，未见类似运动终板的结构，肌卫星细胞体积缩小，数量减少，小指展肌较肱二头肌中肌卫星细胞含量下降速度快。结论：失神经经支配晚期骨骼肌纤维中运动终板消失和胶原增生以及肌卫星细胞含量的迅速下降可能是影响疗效的主要因素之一。