毒热平注射液对巨噬细胞TIR信号通路的影响

目的:研究毒热平注射液对流感病毒感染的小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1细胞TIR(Toll/IL-1 receptors)信号传导通路的影响。方法:用100 TCID50流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1后换用10,1 mg.L-1含药维持液继续培养,分别于12,24 h弃细胞上清液并收集细胞,提取巨噬细胞RNA,进行实时定量PCR反应(RT-PCR),动态测定毒热平注射液对病毒感染前后巨噬细胞TIR信号传导通路中各信号蛋白:Toll样受体7(TLR7)、髓样分化因子88(MyD88),IL-1受体相关激酶4(IRAK4)、肿瘤坏死因子相关激酶6(TRAF6)和核因子κB(NF-κB)mRNA表达水平的影响。结果:毒热平注射液可剂量依赖性地下调病毒感染巨噬细胞TLR7,MyD88,IRAK4,TRAF6,NF-κB mRNA的表达水平。结论:毒热平注射液能通过调节TIR信号传导通路各信号蛋白的活性发挥抗病毒感染作用。     

原代黄素化卵泡颗粒细胞氧化应激模型的建立与评价

目的 建立过氧化氢(H₂O₂)诱导的原代黄素化卵泡颗粒细胞氧化应激模型。方法 收集2019年10月至12月于保定市妇幼保健院生殖医学科行体外受精患者取卵后废弃的卵泡液,经密度梯度离心收集卵泡颗粒细胞,进行培养。不同浓度H₂O₂处理颗粒细胞12 h,采用最大半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)建立颗粒细胞氧化应激损伤模型。以未加H₂O₂的颗粒细胞为对照组,通过测定模型组丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)水平、雌二醇(estradiol, E₂)分泌量和细胞周期,评价模型组是否建模成功。结果 使用IC50浓度H₂O₂=65μmol/L,建立颗粒细胞氧化损伤模型。与对照组比较,模型组的MDA含量升高、SOD水平下降、E₂分...     

脑微血管内皮细胞条件培养液对体外培养正常神经元的影响

目的:探讨体外模拟脑缺血再灌注损伤条件下及通络救脑注射液干预下脑微血管内皮细胞条件培养液(CMEX-CM)对体外正常培养神经元的影响.方法:先分别进行大鼠大脑微血管内皮细胞和神经元的分离纯化培养及建立体外模拟脑缺血再灌注损伤模型,然后用收集的CMECs～CM 1:1和1:5的浓度作用于体外培养的神经元,MTT法测定神经元的活性、存活率,western～blot检测NF-KB的表达.结果:脑微血管内皮细胞条件培养液可影响神经元生存活性,应用中药通络救脑注射液作用于脑微血管内皮细胞后收集的条件培养液可明显提高神经元的生存活性,可以提高神经元中NF-KB的表达.     

海马注射β-淀粉样蛋白对BACE1 mRNA的影响及通络救脑口服液的干预作用

目的:探讨大鼠大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40对BACE1mRNA表达的影响及通络救脑口服液对其的干预作用。方法:采用大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40诱导Alzheimer's病动物模型后,药物干预4周,第5周应用实时定量PCR法检测BACE1mRNA表达。结果:模型组BACE12-ΔΔCt为4.67±0.52,2-ΔΔCt显著多于假手术组(1.07±0.08,P<0.01),表明模型组BACE1mRNA表达上调;与模型组比较,盐酸多萘哌齐组(1.80±0.23)、通络救脑口服液48mg、24mg、12mg/kg·d分别为2.92±0.22、1.54±0.25和0.54±0.11,2-ΔΔCt显著减少,表明BACE1mRNA表达下调。结论:大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40后大鼠海马组织BACE1mRNA表达水平明显增高,通络救脑口服液可以抑制海马组织BACE1mRNA的表达,从而发挥其抗老年性痴呆的作用。     

快速老化小鼠和脑内注射Aβ1-40小鼠模型的神经行为学差异

目的:比较同品系小鼠,使用不同方法建立拟老年痴呆症模型的神经行为学差异,为不同功效的中药复方药效评价体系寻找有效的指标。方法:选用8月龄SAMP8和SAMR1小鼠,对SAMR1小鼠双侧海马注射Aβ1-40(400 pmol/只)。通过Morris水迷宫、避暗实验检测小鼠行为学改变。结果:行为学显示两种模型小鼠均出现不同程度学习记忆能力下降。SAMP8小鼠游速低于SAMR1小鼠,注射Aβ1-40的SAMR1小鼠在避暗实验的表现不如SAMP8小鼠。结论:注射Aβ1-40的SAMR1和自然衰老SAMP8小鼠神经行为学表现有差异,可根据不同中药复方的功效特点选用不同模型小鼠进行深入研究。     

通络救脑注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤脑保护的IGF-1途径分析

目的:观察通络救脑注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及探讨其发挥保护作用的可能途径.方法:以线栓法构建大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注损伤模型,实验动物随机分为假手术组、模型组、通络救脑药物组、阳性药对照(依达拉奉)组.各设3个时间点,分别为脑缺血再灌注后24h、3d和7d,以TTC染色法测定脑组织梗死体积;以酶联免疫(ELISA)、免疫组化法分别检测血清、脑组织匀浆IGF-1表达水平及表达部位.结果:通络救脑注射液能显著减小各时间点的大鼠脑梗死体积比;缺血再灌注3d通络救脑组大鼠血清IGF-1水平显著升高,模型组和通络救脑组大鼠脑匀浆IGF-1水平与假手术组比较显著提高;免疫组化亦提示缺血侧皮层IGF-1的阳性表达面积比在通络救脑组均显著高于相应时间点的模型组.结论:通络救脑注射液能显著减小局灶性脑缺血再灌注大鼠的脑梗死体积,且与提高IGF-1的表达有关.     

通心络干预的脑微血管内皮细胞条件液对大鼠脑皮层神经元的影响

目的：观察通心络干预的脑微血管内皮细胞条件培养液对大鼠脑皮层神经元氧化应激反应的影响,探讨通心络在脑微血管内皮细胞缺血损伤状态下保护神经元的机制。方法：首先制备4种大鼠脑微血管内皮细胞（BMEC）条件培养液：①正常BMEC条件液（N-CM）;②正常BMEC加通心络药物血清条件液（NT-CM）;③拟缺血损伤BMEC条件液（I-CM）;④损伤BMEC加通心络药物血清条件液（IT-CM）。将它们分别作用于正常和糖氧剥夺损伤（拟缺血）的大鼠皮层神经元后,测定神经元活性、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。结果：①I-CM可使正常神经元的活性和SOD活力下降,MDA含量增加;与I-CM相比,IT-CM可提高神经元活性和SOD活力,降低MDA的含量。②与正常神经元比较,拟缺血神经元活性和SOD活力明显下降,MDA含量增加;I-CM进一步使拟缺血损伤神经元的活力下降;NT-CM和IT-CM在一定程度上可阻抑损伤神经元活性和SOD活力的下降,并降低MDA含量。结论：大鼠脑微血管内皮细胞损伤后可能造成其旁分泌功能紊乱,进一步导致神经元的损伤。通心络可能通过调节内皮细胞的旁分泌功能保护神经元,该保护作用与减少神经元的氧化应激有关。     

急性缺血性脑卒中后的血管保护策略

目的:在研究缺血后血管损伤的病理生理过程的基础上,探讨血管保护的治疗措施,为缺血性脑卒中病探索治疗的新方向。资料来源:应用计算机检索Medline1997-01/2004-08的与急性脑卒中后血管保护策略相关文献,检索词“ischemicstroke,vasculature,vascularendothelialgrowthfactor,apoptosis”,并限定文献语种为“English”。资料选择:就检索到的300余篇文献进行筛选,选择以促进内皮的功能以及阻抑血管平滑肌细胞增殖、炎症反应、血栓形成和内皮凋亡的措施(即血管保护措施)为主要研究内容的文献,无论研究对象为动物还是患者全部纳入,其中研究内容相似的,以近期且发表在较权威杂志者优先,排除综述类文献。资料提炼:共筛选到符合标准的文献29条,将其按血管保护的概念、缺血性脑卒中血管保护措施中急性期的主要靶点、亚急性期主要靶点和慢性期主要靶点进行分类。资料综合:血管保护的靶点应在缺血性脑卒中病理生理机制的背景环境下来评价,且可以分急性(数小时)、亚急性(数小时至数天)以及慢性阶段(数天至数月)来描述。急性期血管病理生理包括血流动力学和代谢的改变,导致血脑屏障的破坏以及血管紧张度的失调,其主要靶点为血管活性因子;炎症是亚急性期血管损伤的重要机制,故多环节炎性因子构成亚急性期主要靶点;而慢性期着重于凋亡过程。结论:在缺血性脑卒中后对脑血管系统的保护似乎是预防水肿和出血、促进康复的合理方法。提高内皮型一氧化氮合酶来源的NO生成量、血管生成素1,抑制血管内皮生长因子、血管生成素2、血管紧张素II、内皮素1、基质金属蛋白酶、自由基以及炎症递质都是血管保护的可能的药物学靶点。     

鳖甲煎丸对肾间质纤维化大鼠细胞增殖的影响

目的 观察鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏细胞增殖的影响,探讨其拮抗肾间质纤维化的作用机理.方法 采用单侧输尿管结扎的方法复制大鼠肾梗阻模型,将其随机分为鳖甲煎丸组、缬沙坦组、模型组,并设假手术组.观察梗阻侧肾脏增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白及基因的表达,同时检测肾间质细胞和肾小管细胞的增殖、凋亡以及细胞周期的变化.结果 模型组及各治疗组大鼠肾脏中PCNA的蛋白及mRNA的表达和肾间质、肾小管细胞PCNA阳性细胞率、细胞凋亡率较假手术组明显升高(P＜0.05,P＜0.01),鳖甲煎丸组、缬沙坦组的表达均低于模型组(P＜0.05,P＜0.01),但是细胞凋亡与增殖的比值模型组较假手术组显著降低(P＜0.05),2治疗组较模型组显著升高(P＜0.05).与假手术组相比,模型组处于S期的细胞比例显著增多(P＜0.01),处于G0/G1期的细胞比例显著减少(P＜0.01),与模型组比较,2治疗组S期的细胞比例明显降低(P＜0.05),G0/G1期的细胞比例明显增加(P＜0.01),G2/M期变化不明显.结论 鳖甲煎丸能够下调肾间质纤维化大鼠肾间质细胞PCNA的蛋白及mRNA表达,促进肾间质细胞凋亡,抑制其增殖,阻止其由G0/G1期进入S期,对肾脏起到保护作用.