GENSCREEN~ULTRA HIV抗原抗体酶联免疫诊断试剂盒的敏感性评价

目的评价BIO-RAD公司开发研制的人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗原抗体酶联免疫诊断试剂盒(GENSCREEN~ ULTRA HIVAg-Ab),对不同来源样本检测的敏感性。方法以法国生物梅里埃公司生产的HIV1+2抗原/抗体ELISA检测试剂为参比试剂,分别使用评价试剂和参比试剂检测621例样本,分析两种试剂检测HIV抗原/抗体的敏感性。结果评价试剂和参比试剂检测502份HIV感染者/AIDS患者临床血浆标本均为阳性,符合率为100%,敏感性为100%。评价试剂和参比试剂检测92份HIV分离培养上清液,评价试剂检出89份阳性、参比试剂检出31份阳性,表明评价试剂检测HIV-1p24抗原的敏感性高于参比试剂。另外,又检测了27份HIV抗原系列稀释样本,计算出评价试剂检测HIV抗原的敏感性是参比试剂的4～8倍。结论评价试剂检测HIV抗体的效果与参比试剂相同,检测HIV-1p24抗原的敏感性高于参比试剂。     

5株不同亚型HIV-1毒株gp120序列特征分析及其蛋白的表达

目的 分析我国HIV-1主要亚型毒株的gp120区域的序列特征,并表达出gp120糖基化蛋白,为研究gp120的致病机制和设计疫苗奠定基础.方法 利用巢式PCR从来自于不同省份的5名HIV-1感染者外周血单个核细胞DNA中扩增全长gp120基因并测序,对序列特征进行分析,并将获得的gp120基因克隆入真核表达载体,体外表达获得gp120糖基化蛋白.结果 序列分析显示,此5条gp120序列分属HIV-1 Thai-B、BC重组和AE重组哑型,虽然亚型不同,但这些gp120序列在相同的位置都存在着一些保守的糖基化位点,且都具备相同的Furin蛋白酶第一切割位点,与参考序列比较发现,不同的HIV亚型序列中,除V3序列长度较为保守外,V1、V2、V4、V5各区域都有不同程度的缺失现象,与BC重组和AE重组亚型相比,Thai-B亚型V3的顶端环呈现出多种组合.最终将这5条gpl20序列都克隆人真核表达载体并表达出糖基化的gp120蛋白.结论 在设计疫苗和检测试剂时应考虑到膜区的高变性,gp120糖蛋白的体外表达有利于进一步开展针对我国主要HIV流行毒株膜蛋白致病机制和疫苗学的研究.     

HIV感染者CD4/CD8细胞与病毒载量的关系

目的　探讨HIV感染者体内CD4细胞数与病毒载量的关系。方法　对 84人的 2 0 7次血样进行病毒载量的测定 ,对 194人的 491次血样进行CD4/CD8细胞数的检测。CD4/CD8细胞计数采用流式细胞仪的绝对计数法进行检测 ,使用核酸序列测试 (NASBA)方法检测病毒载量。对其中一部分人进行随访 ,采集血样并检测相应指标。结果　HIV感染者体内的CD4细胞数与病毒载量的Log值呈负相关 (r =-0 576,P <0 0 1) ,CD4/CD8比值与病毒载量的Log值呈负相关 (r =-0 544,P <0 0 1)。CD4细胞数较低的感染者 ,CD8细胞数也较低。在HIV感染者体内 ,随着病毒载量的升高 ,CD4细胞数呈下降趋势。结论　病毒载量与CD4有明显的相关关系 ,当病毒载量较低时 ,使用CD4细胞数可以粗略估计血浆中病毒载量的高低。CD4/CD8比值与病毒载量的Log值呈现负相关。当病毒载量较高时 ,HIV感染者体内病毒载量与CD4细胞数的变化趋势相反 ,但不完全同步     

人类免疫缺陷病毒-1在注射器中的存活时间和影响因素研究

为了解人类免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ)在注射器中的存活规律及其影响因素 ,进而推断ＨＩＶ经不安全注射传播的危险 ,我们设计并实施了本项研究 ,以期为制订措施预防不安全注射传播ＨＩＶ提供理论依据。1.材料与方法 :实验选用ＨＩＶ 1ⅢＢ标准株 ,以ＰＢＳ +10 %ＦＢＳ模拟人血液 /体液成分 ,10倍系列稀释病毒悬液 ,模拟制成病毒原液、10 -1、10 -2 等三种含不同滴度ＨＩＶ 1的病人体液 ,按照 10、30、5 0、80、10 0 μｌ等 5种体积分别吸入不同注射器中 ,室温无菌条件下放置。在放置的第 1、3、5、7、14、2 1天 ,用 9倍体积ＲＭＰＩ16 40反复冲…     

我国部分地区HIV-1流行毒株亚型分布及gag基因变异特征研究

目的：分析我国4个地区的人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）主要流行毒株的亚型分布,以及在宿主免疫压力下的基因变异和抗原表位的变化情况,初步探讨这些地区HIV-1gag基因的分子进化特征。方法：从来自河南、广东、四川、北京的HIV-1感染者血浆样本中提取基因组RNA,经逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增部分gag基因,用扩增产物直接进行测序;使用Genotyping Tool软件进行亚型分析,使用MEGA4.1软件绘制系统进化树;用Distance工具计算各个亚型序列的基因离散率;用SNAP程序分析同义替换率与非同义替换率的比值（Ks/Ka）,并对各亚型中我国人群中较常见的HLA-Ⅰ型限制的CTL抗原表位的突变情况进行分析。结果：这些地区HIV-1主要流行毒株gag基因亚型主要是B′、CRF07_BC、CRF01_AE、B、CRF08_BC和CRF02_AG。各亚型内的基因离散率不同,由大到小排列为CRF01_AE〉B〉CRF08_BC〉CRF07_BC〉B′,Ks/Ka为CRF01_AE〉B〉CRF08_BC〉B′〉CRF07_BC。p17区段的CTL抗原表位变异远大于p24区段。各个亚型共享序列中存在的突变位点由多到少排列为CRFOI_AE〉B〉B＇〉CRF07-BC。结论：我国HIV-1流行毒株的gag基因序列中，CRF01-AE亚型受到的选择压力最大，基因离散率也最大，且CTL抗原表位的变异亦最大，其次是B和B’亚型，CRF07-BC亚型变异最小。各亚型间CTL抗原表位变异的差异明显。     

人免疫缺陷病毒的职业感染与预防

随着我国艾滋病疫情发展,医务人员越来越多地遇到人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染者诊治问题,预防医务人员职业性ＨＩＶ感染已成为当务之急。因此,概述了职业性ＨＩＶ感染的发生特点、影响传播的因素、预防措施及意外事故处理措施。适用于和实验室工作人员及医疗管理人员艾滋病知识的宣传教育。     

北京市部分艾滋病患者的耐药性分析及对抗病毒治疗效果的影响

目的了解北京市部分艾滋病患者抗病毒治疗后耐药发生情况及其对抗病毒治疗效果的影响。方法以北京市部分未经抗病毒治疗的艾滋病患者（17人）以及经抗病毒治疗的患者（51人）为研究对象，通过问卷调查了解一般情况、服药方案、服药依从性及抗病毒治疗前后的临床表现等。同时采集10ml EDTA抗凝静脉血，检测CD4／CD8细胞数、病毒载量及基因型耐药性。结果未服药患者耐药性突变位点主要有118位密码子；服药患者耐药性突变位点和突变的频次显著增加，发生率大于10％的突变位点有103位、118位、151位、181位、184位和190位密码子，并发现TAM突变（M41L、K70R）和Q151复合体突变（A62V、V751、F77L、F116Y和Q151M）。病毒耐药谱表现为出现对非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTI）类药物（DLV、EFV和NVP）和核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI）类药物（AZT、DDI、IMT、OOC）具有高度耐药性的毒株，及对NRTI和蛋白酶抑制剂（PI）具有中度和低度耐药性的毒株。未服药人群的耐药性毒株的流行率为6．7％，服药患者为45．0％，交叉耐药和多重耐药严重。抗病毒治疗后没有发生耐药患者病毒载量对数的平均值为1．9 log（拷贝／m1），明显低于耐药组病人的3．8 log（拷贝／m1）。结论北京市部分HIV感染者耐药性毒株的流行已经达到较高的水平，并且多重耐药严重。耐药发生后影响治疗效果，规范治疗及提高服药依从性是治疗取得良好效果的重要因素。     

1例早期HIV感染者体内病毒准种的各基因片段分析

目的比较1例早期艾滋病病毒（HIV）感染者体内病毒不同基因片段准种复杂度。方法使用套式聚合酶链反应（Nested-PCR）,扩增HIV感染者外周血淋巴细胞中病毒的gag、pol、vif-vpr和env区的部分基因,通过克隆、测序方法观察该感染者体内病毒准种分布情况,比较不同基因片段检测病毒准种的可靠性。结果不同基因片段检测病毒准种结果显示,该早期感染者体内的病毒不同基因片段显示的准种基因离散率不同,其中gag区显示出的病毒准种复杂度最高,反映为该区段病毒准种的基因离散率最高,为0．008;其他各区基因（pol、vif-vpr、env）的离散率依次为0．006、0．001、0．000。结论该HIV感染者体内病毒准种的基因中,gag区基因的突变率较高,提示Gag在机体感染HIV早期承受的免疫压力较高,因此在病毒准种研究中,gag区应该作为重要的基因区域。     

HIV抗体质控血清的稳定性研究

目的：研究配制的质控血清的稳定性和影响因素。方法：将配制的HIV抗体质控血清进行不同的处理，然后统一用3种试剂进行检测：（1）在37℃，室温和4℃保存不同时间；（2）加入0．1％的叠氮钠和0．01％的硫柳汞保存不同时间；（3）室温和－20℃之间反复冻融。结果：人工配制的质控血清在4℃条件下6个月内可以保持稳定，在室温条件下1个月内保持稳定。反复冻融及加入0．1％的叠氮钠或0．01％的硫柳汞对检测结果没有影响。双抗原夹心法试剂检测的S／CO值显著高于间接法试剂。结论：在常规条件下血清中的HIV抗体能够在较长时间内保持稳定。     

HIV抗体免疫印迹试验不确定结果的特征及鉴别方法研究

目的 研究HIV抗体确认不确定结果的血清学特征并比较不同实验方法鉴别不确定结果的效果.方法 以解放军艾滋病检测确认实验室2005-2006年确认的42例HIV抗体不确定者为研究对象,对血清样本进行HIV抗体条带免疫印迹检测、HIV病毒载量检测和HIV-1 p24抗原检测,同时进行随访,将随访前后的标本同时检测,比较免疫印迹带型的进展,判断HIV感染的真实状况,以随访的结果为标准,判断不同的方法鉴别不确定结果的效果.结果 (1)42例HIV抗体不确定病例中,共有8种带型:p24(45.2%)、gpl60(30.9%)、gp160±p24(11.9%).(2)对23例进行3个月以上随访,其中22例带型没有变化,判断为HIV抗体阴性;1例的带型在随访后出现显著进展,满足HIV抗体阳性诊断标准;随访证实,22例(95.6%)的不确定是非特异反应,只有1例是早期HIV感染.(3)对23例通过随访确定HIV感染状态的病例,条带免疫印迹检测1例血清学阳转的病例为阳性,22例血清学没有进展的病例中16例为阴性,6例仍为不确定,特异性是72.7%.HIV-1 p24抗原检测23份标本全部为阴性,1例血清学阳转标本漏检.检测7份血浆标本的病毒载量,1例血清学阳转的病例病毒载量为18 000 cp/ml,而6例血清学没有进展的病例检测结果全部低于最低检测限(＜LDL).结论 条带免疫印迹试验能够鉴别大约70.0%的不确定反应,病毒载量检测也是鉴别不确定结果的有效方法;使用这两种方法,可以对HIV抗体不确定进行早期鉴别诊断.