云南省脑炎患者脑脊液中检测到基因Ⅰ和Ⅲ型流行性乙型脑炎病毒

目的调查云南省流行性乙型脑炎(乙脑)患者感染乙脑病毒(JEV)基因型状况。方法在云南省西双版纳州医院和大理州医院采集脑炎患者急性期血清标本20份和脑脊液标本11份,用RT-PCR法检测JEV核酸,阳性者进行JEV-PreM/C区基因序列测定,用核苷酸同源性和系统进化分析进行基因型鉴定。结果用RT-PCR法从11例脑炎患者脑脊液标本中检测到JEV核酸阳性3份(JB114、JB135和DLN24),而20例脑炎患者血清标本均为阴性。3株病毒的PreM/C区核苷酸序列同源性分析显示,JB114、JB135与JEV基因Ⅰ型代表株同源性高达98.3%和99.2%,而与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型仅为82.5%~84.6%;DLN24与基因Ⅲ型代表株同源性为94.6%,而与基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型分别为85.0%、82.5%和80.4%。进化树分析显示,JB114和JB135位于基因Ⅰ型分支中,DLN24位于基因Ⅲ型分支上。结果表明,来自西双版纳的JB114和JB135病毒株属于基因Ⅰ型,来自大理的DLN24病毒株为基因Ⅲ型。结论云南省乙脑患者中分别存在基因Ⅰ型和Ⅲ型JEV感染的病例,表明云南省存在这两个基因型病毒的共同流行。     

人源化抗CD3单链抗体的构建、序列分析和表达研究

目的构建和表达抗CD₃单链抗体,并对其构象进行模拟分析.方法应用重叠延伸拼接法连接抗CD₃抗体的轻链可变区基因和重链可变区基因,构建抗CD₃单链抗体基因(ScFv),并将其克隆于原核表达载体中表达.结果拼接后的抗CD₃ScFv基因全长732bp,构象模拟分析表明其三维结构稳定,兼容性分数S>0,表达的目的蛋白约26.5kD.结论抗CD₃ScFv基因的成功构建,为进一步研究抗CD₃/抗乙肝病毒的双特异性抗体奠定了基础.     

革螨、恙螨细胞培养及其特征的初步研究

目的建立螨类细胞培养方法,为从细胞分子水平研究革螨、恙螨作为HFRS媒介提供条件。方法采用革螨、恙螨的若虫、幼虫进行螨类细胞培养,建立螨细胞系。革螨、恙螨若虫、幼虫经消毒、胰酶消化处理后,接种于含15%FBS改良TC199培养基中培养。结果两种螨细胞2周后细胞生长良好,并形成单层,现已传了4代。细胞形态以梭形为主,染色体2n=6,细胞对数期群体倍增时间20.50h。最能适应在TC199培养基上生长。动态观察对氨基酸要求,发现谷氨酸、酪氨酸、鸟氨酸,胱氨酸和精氨酸需量最大。结论本结果为研究HFRSV在螨体内增殖、定位提供了条件和方法。     

急性脑静脉窦血栓及其脑损伤的MRI技术探讨

目的：探讨不同MRI成像序列在急性脑静脉窦血栓形成及其脑损害诊断中的价值。方法：回顾性分析本院经临床和影像学证实的11例急性脑静脉窦血栓形成患者的影像学资料,比较常规T1WI、T2WI、T2＊WI、DWI、CE-T1WI和MRV对检出急性脑静脉窦闭塞及其继发脑损伤的优缺点,其中6例测量脑损害区的ADC值。结果：11例中平扫T1WI能明确显示静脉窦血栓9例,T2WI显示8例,CE-T1WI和CE-MRV对11例均能明确显示;CE-MRV还能更好地显示静脉窦的回流静脉和侧支血管。MRI检查发现继发性脑损伤8例,T2WI对缺血水肿的显示优于其它序列,对脑出血的检出以T2＊WI较好。ADC值与脑损伤的面积和位置有关。结论：MRI对脑静脉窦血栓及其相应脑损害的诊断具有重要作用,联合应用多种MRI检查方法能更可靠地提供脑静脉窦血栓的诊断信息及其脑损害的程度。     

红花对兔耳增生性瘢痕CTGF表达的影响

目的:观察红花对兔耳增生性瘢痕(HS)结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,探讨红花抑制兔耳HS可能的分子生物学机制.方法:27只新西兰大白兔耳腹侧建立HS模型,每耳2块.建模后45 d开始对HS行注射治疗,1次/wk,连续注射4次.设立阴性对照组、阳性对照组、生理盐水组、低浓度红花(125 g/L)组、高浓度红花(500 g/L)组.注射后第2,4,6周分别切取8只兔耳HS及皮肤,采用免疫组织化学方法(SP)检测每块组织CTGF蛋白的表达(CTGF蛋白面密度及平均吸光度),逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测每块组织CTGF-mRNA的表达.结果:注射后第2,4,6周,两种浓度红花组CTGF蛋白面密度、平均吸光度及CTGF-mRNA的表达均低于阳性对照及生理盐水组,有统计学差异(P<0.05);其中高浓度红花组CTGF蛋白面密度、平均吸光度及CTGF-mRNA的表达为同时段所有HS组中最低(P<0.05).结论:高、低浓度红花均能抑制兔耳HS的CTGF的表达,高浓度红花的作用较低浓度红花强.     

DWI成像在宫颈癌分期中的应用

目的 研究宫颈癌弥散加权成像(DWI)表现,评价DWI在宫颈癌分期中的价值.方法 搜集确诊的宫颈癌66例,均行常规MRI及DWI检查,MRI检查前均未进行任何治疗.观察原发肿瘤的位置、信号特征及侵犯范围,进行分期,同时测量癌灶ADC值.将MRI分期、临床分期分别与病理分期、宫颈癌ADC值与FIGO分期、Ⅰ～Ⅱa期与Ⅱb～Ⅳ期宫颈癌ADC值进行对比.结果 (1)临床分期总准确度为66.7%,对浸润性癌(Ⅱb及Ⅱb以上)诊断的总准确度为71.4%,灵敏度为72.2%,特异性为80.0%;MRI分期总准确度为78.8%,对浸润性癌(Ⅱb及Ⅱb以上)诊断的总准确度为90.9 %,灵敏度为84.4 %,特异性为93.3 %.(2)宫颈癌ADC值与FIGO分期无相关性(r=0.144,P=0.247).宫颈癌Ⅰ～Ⅱa与Ⅱb～Ⅳ两组分期的ADC值差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DWI在宫颈癌MRI分期中具有重要作用,尤其在浸润性癌与非浸润性癌的判定方面具有优势,MRI分期优于临床分期.     

鼻息肉患者血清抗ebv-lmp1抗体的检测及其临床意义

目的:检测鼻息肉患者血清抗Epstain-Barr病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP1)抗体并探讨其临床意义。方法:行功能性鼻内镜手术治疗的鼻息肉患者20例为实验组,健康自愿者20例为对照组。以谷胱甘肽-EBV-LMP1胞外区融合蛋白(GST-LMP1)为检测抗原,ELISA和Western blot检测健康自愿者和鼻息肉患者手术治疗前、治疗后第15、30、90、180天血清抗EBV-LMP1抗体。结果:ELISA检测鼻息肉患者和健康自愿者血清抗EBV-LMP1抗体水平分别为0.976±0.131、0.400±0.102,两组比较有统计学差异(P<0.01)。鼻息肉患者术前和术后第15、30、90、180天血清抗EBV-LMP1抗体水平分别为:0.976±0.131、0.921±0.138、0.899±0.168、0.576±0.144、0.521±0.117,术后第90、180天与术前比较,差异有统计学意义(P<0.01);但是术后第15、30天与术前比较,无统计学差异。Western blot检测鼻息肉患者术前血清抗体水平与术后第15、30天比较无统计学差异;但是与术后第90、180天比较有统计学差异(P...     

Bcl-2、钙视网膜蛋白在发育异常肠壁神经节细胞中的表达

目的探讨Bcl-2和钙视网膜蛋白(calretinin,CR)在不同发育程度肠壁神经节细胞中的表达及意义。方法采用免疫组织化学染色观察Bcl-2、CR在40例先天性巨结肠病(hirschsprung disease,HD)、10例先天性巨结肠类缘病(hirschsprung’s allied disease,HAD)和对照组肠壁神经节细胞的表达情况。结果Bcl-2表达于发育较差的神经节细胞,在发育成熟的神经节细胞不表达。CR表达于发育成熟的神经节细胞,在发育较差的神经节细胞不表达或弱表达。结论Bcl-2和CR在肠神经节细胞的特异性表达,有助于判断神经节细胞的成熟程度。Bcl-2在发育异常肠壁神经节细胞的功能维持和恢复上可能起到了重要作用。     

恙螨体内汉坦病毒核酸的基因芯片检测

目的 建立快速、灵敏、特异的汉坦病毒基因芯片诊断方法。方法 根据发表的汉坦病毒属(HV)76-118株和R22株S基因核苷酸序列，设计引物和探针，制备寡核苷酸芯片。用CV3标记核苷和引物，运用不对称PCR技术制备单链荧光标记核苷酸片段，并与芯片上的寡核苷酸探针杂交，荧光扫描仪检测并分析信号。结果 研究制备的基因芯片能够检测汉坦病毒HTN型和SEO型病毒核酸的特异性荧光信号。结论 HV的基因芯片检测具有特异、灵敏、快速的优点。基因芯片的制备和检测技术的建立，可为肾综合征出血热等传染病的诊断和预防提供理想的方法。     

炭疽杆菌致死因子LF253的制备及活性分析

目的 :制备具有生物学活性的重组致死因子253(lethal factor 253,LF253)抗原,获得纯化的目的蛋白,检测其与全分子致死因子(lethal focfor,LF)蛋白竞争性结合保护性抗原(protective antigen,PA)的能力。方法:PCR扩增致死因子LF253片段的DNA,将目的基因插入p ET-28a(+)表达载体中,利用大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌,IPTG诱导重组蛋白表达,通过His标签亲和层析柱获得目的蛋白,Western blot和ELISA法检测蛋白抗原性,Biacore T-100测定重组蛋白与保护性抗原PA结合的亲和力,细胞毒性实验检测其生物学活性。结果:成功构建原核表达载体p ET-28a/LF253,诱导获得重组蛋白s LF253的表达。Western blot和ELISA检测结果证实,该重组蛋白具有良好抗原特异性;细胞毒实验结果表明,重组蛋白可在体内外中和致死毒素引起的生物学效应。结论:本研究制备的融合蛋白s LF253能够与保护性抗原PA结合,可竞争性抑制LF全分子蛋白与PA的聚合,阻断炭疽毒素的致死作用,为今后炭疽疫苗等药物的研发奠定了基础。