单克隆抗体M26—32腹水有效免疫球蛋白的亚类及等电点的…

单克隆抗体杂交瘤细胞株Ｍ２６－３２的高滴度腹水，用Ｍｏｎｏ Ｑ阴离子交换树脂层析柱进行纯化，并用培养的恶性疟原虫和食蟹猴疟原虫抗原片对纯化后的各管作免疫荧光测定。对纯化后单抗有效成分进行Ｉｇ亚类检测和等电聚焦电泳分析，结果证实Ｍ２６－３２单抗的有效成分为ＩｇＭ，等电点为４．７－４．８５。     

蚊抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定

目的建立抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系。方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗药性品系cD NA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的糜蛋白酶基因编码区;经T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到真核表达载体pIE13,构建重组昆虫细胞表达载体pIE13/chy,经酶切和PCR鉴定后,与带有筛选标记的pIE1neo质粒共转染蚊细胞C6/36,通过G418选择培养,建立转染细胞系;用RT PCR、Westernblotting鉴定糜蛋白酶基因的转录表达。结果成功构建了真核表达载体pIE13/chy,证明糜蛋白酶基因已转入C6/36细胞,建立了稳定转染细胞系,表达产物分子质量单位约30ku,与理论值相符。结论稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究糜蛋白酶基因与抗药性的关系奠定了基础。     

昆虫细胞色素P450分子生物学研究进展

微粒体多功能氧化酶是昆虫体内参与各类杀虫剂以及其它外源性和内源性化合物代谢的主要解毒酶系。细胞色素Ｐ４５０（以下简称“Ｐ４５０”或“ＣＹＰ”）是微粒体多功能氧化酶的末端氧化酶，起着与底物结合以及从ＮＡＤＰＨ传递电子到ＮＡＤＰＨ细胞色素Ｐ４５０还原酶的...     

嗜人按蚊各发育期几项生化指标的比较分析

采用聚丙烯酰胺等电聚焦技术,比较研究了嗜人按蚊不同发育期糖、脂、蛋白质和酯酶同工酶电泳图谱。结果显示:糖、脂、蛋白质和酯酶同工酶显带以幼虫期最多,分别为20、10、38和18条;其次为蛹(17、8、29、18)和成虫(18、6、30、13);而卵显带最少(16、3、30、10)。除卵外,它们的共同主带等电点分别约为5.28、5.38、5.60和5.70。此外,酯酶同工酶各发育期比其它几项指标变化较大。     

砷剂防治哮喘气道炎症的分子机制:砷剂对丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶基因表达作用的研究

目的:研究三氧化二砷对T细胞丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶(mitogen-activatedproteinkinasephosphatase,MKP-1)基因表达的影响,探讨砷剂治疗哮喘气道炎症的分子机制。方法:本研究采用定量PCR的技术研究Hut-78T细胞在不同浓度三氧化二砷(5μmol/L和1μmol/L)作用下,在不同时间段(3min,10min,20min,30min及1h),T细胞内MKP-1mRNA的表达水平。结果:Hut-78细胞在经过砷剂处理后,细胞内MKP-1mRNA水平在10min即呈现上升的趋势,5μmol/L砷剂20min组和1μmol/L砷剂20min组细胞内MKP-1mRNA水平均明显高于对照组(t=5.947,P=0.001;t=2.561,P=0.035),而在30min时,所诱导MKP-1mRNA水平均达到高峰,其后均呈下降的趋势。而在时间段20min和1h,5μmol/L砷剂组要高于1μmol/L组(t=3.056,P=0.0223;t=3.501,P=0.0128)。结论:三氧化二砷对MKP-1的基因表达具有上调作用;MKP-1为三氧化二砷作用的早期反应基因之一;砷剂对MKP-1的作用呈时间和剂量相关;小剂量的砷剂可能在哮喘的治疗和预防上具有重要的应用价值。     

不同抗性基因型淡色库蚊对溴氰菊酯相对适合度的研究

目的 :研究溴氰菊酯对 3种不同基因型淡色库蚊的相对适合度。方法 :培养选育 3种不同基因型淡色库蚊 ,测定它们的产卵力、幼虫孵化率、蛹羽化率、成虫寿命、体重和性比 ,计算其种群参数。结果 :抗性品系 (RR)的产卵力、幼虫化蛹率和世代存活率均明显低于敏感品系 (SS) ;杂合子 (RS)的产卵力、幼虫化蛹率和世代存活率也高于RR ,与SS接近。雌雄成虫平均寿命均以SS最长 ,RS次之 ,RR最短。三品系性比差异无显著性 ,成虫体重RR和RS高于SS。种群参数中 ,SS的净增殖率R0 是RR的 2 .1倍 ,SS的内禀增长力rm 高于RS ,RS高于RR。结论 :淡色库蚊对溴氰菊酯产生抗性后 ,相对适合度下降 ,与繁殖不利有关     

家蝇蛋白质、糖、脂的等电点聚焦电泳初步研究

家蝇各发育阶段经等电点聚焦后用考马斯亮蓝R250染蛋白质,雌性成虫、雄性成虫、蛹、幼虫和卵分别显带23、30、23、17和30条;用PAS染糖,分别显带13、13、9、8和9条;用Nile's蓝染脂,分别显带6、12、9、5和8条。四个发育阶段的蛋白质、糖和脂,以成虫期显带较多。各发育阶段所显区带由纯蛋白、糖蛋白、脂蛋白、糖脂蛋白和多糖组成。     

淡色库蚊和致倦库蚊蛋白质斑点比较研究

长期以来对昆虫分类主要依靠形态特征。近年来用生化方法进行分类的研究日见增多。生化方法有助于澄清形态上不易区分的近缘种及进行种下分类。淡色库蚊(Culexpipiens pallens)和致倦库蚊(Culexquinquetasuatus)的分类问题至今还未统一。有认为它们是尖音库蚊的两个亚种,有认为它们是两个独立的蚊种。我们试用双向电泳法比较它们的蛋白组份,然后根据差异多肽斑点的百分率来分类。     

外源性双链RNA在蚊虫细胞中介导的基因沉默

目的 近年来，双链RNA介导的基因沉默(RNA干扰)已在许多动植物中发现，并成为研究基因功能的强有力的工具。为确定蚊虫细胞中是否有RNA干扰现象，以期为利用RNAi效应消除蚊虫抗药性研究奠定基础。方法 设计5′端带T7启动子的绿色荧光蛋白(GFP)及糜蛋白酶特异性引物，PCR扩增目的基因获得5′端带有T7启动子DNA片段，体外转录成单链RNA，退火后形成双链RNA。转染带有GFP基因的昆虫细胞表达载体pAct．GFP和双链RNA进入C6／36蚊虫细胞，72h后收集细胞，用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达差异，用半定量RT-PCR检测GFP的mRNA的表达水平。结果 转染糜蛋白酶基因双链RNA和pAct．GFP质粒的细胞及仅转染pAct．GFP的细胞的GFP表达水平没有明显差异；转染GFP基因的双链RNA和pAct．GFP质粒的细胞的GFP表达水平显著下降，达40％～50％，GFP的mRNA的表达水平也相应下降了60％。结论 在蚊虫细胞内，双链RNA能特异性的抑制相应的同源性基因的表达，引起基因沉默，证实蚊虫细胞内RNA干扰现象的存在。