H-2Kb基因转移诱导小鼠心肌移植免疫耐受

目的探讨H-2Kb基因转移诱导小鼠心肌移植免疫耐受的可行性。方法通过逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将供体小鼠(C57BL/6)的H-2Kb基因(小鼠MHC-类基因)导入到受体小鼠(BALB/c)的造血细胞。结果H-2Kb基因可以稳定地整合进小鼠造血细胞的基因内,并在受体内表达较长时间。正常对照小鼠的心肌移植物平均存活时间(MST)为9.4±1.84d。诱导耐受组小鼠的心肌移植物MST为45.7±6.001d,比对照组明显延长(P<0.05)。结论H-2Kb基因转移诱导了供体特异性的免疫耐受,为临床移植控制排斥反应提供了一种新的方法     

下肢静脉性溃疡与白细胞浸润和新生血管的关系

目的探讨白细胞浸润和新生血管与下肢静脉性溃疡的关系。方法采用不同体位下肢血常规白细胞计数和免疫组织化学法测定微血管密度,比较溃疡组、无溃疡组和对照组的白细胞计数和微血管密度。结果溃疡组中,患肢下垂位血白细胞计数比平卧位减少23.7%,与其他组相比差异有统计学意义(P<0.05);患肢皮肤中白细胞和微血管密度比其他组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);白细胞与微血管密度呈显著正相关(r=0.73,P<0.05)。结论白细胞浸润和新血管生成是下肢静脉性溃疡发生发展的重要因素。     

旋毛形线虫分泌抗原P53的序列分析及重组表达产物的免疫学鉴定

目的 分析旋毛形线虫分泌抗原P53的免疫学特性,评价其免疫诊断价值.方法 克隆并测序分析旋毛形线虫P53的编码区序列,应用生物信息学分析其与其他蠕虫同源蛋白的相似性以及潜在的线性B细胞和T细胞表位;并将成熟肽编码区克隆至pET28a(+)原核表达质粒中,纯化的重组蛋白用旋毛形线虫感染血清和其他寄生蠕虫感染血清经Western印迹法鉴定其免疫反应性.结果 生物信息学分析未发现其他寄生蠕虫的P53同源基因,表明TsP53具有多个T细胞和B细胞识别表位,Western印迹法显示TsP53抗原只与旋毛形线虫感染血清反应,与其他几种蠕虫感染血清无反应.结论 P53具有良好的抗原性,是非常有前景的旋毛形线虫特异性诊断抗原.     

小于胎龄儿大鼠胰岛素抵抗与ghrelin水平的关系

Objective To observe the change of insulin sensitivity index (ISI) and ghrelin level, to examine their correlation and to explore the role and significance of ghrelin in insulin resistance (IR) in small for gestational age (SGA) rats. Methods The SGA models were established by starvation method in pregnant SD rats. Experimental rats were grouped by body length and/or body weight 4 weeks after birth.Experiment grouping: ( 1 )SGA group with growth catch-up (Group S 1, n=26 ); (2)SGA group without growth catch-up (Group S2, n=31 ); (3)Normal control group was composed by male rats whose mothers ate and drank freely during pregnancy (Group C, n=27). Body weight and serum ghrelin level was checked 4 weeks after birth. Body weight, serum ghrelin, fasting blood glucose and fasting insulin were tested when the rats were 12 weeks old, and then ISI was calculated. Correlation of all the indexes was analyzed. Results The ISI of 12-week-old SGA rats was significantly decreased as compared to normal control (Group S1:2.00± 0.58, Group S2:2.23±0.58 vs Group C: 3.17±0.54, both P＜0.05). Serum ghrelin level of SGA rats was decreased compared with Group C, but the disparity was not statistically significant [Group S1: (1.357± 0.548) μg/L, Group S2: (1.428±0.714) μg/L vs Group C: (1.843±0.459) μg/L,both P＞0.05 ]. Ghrelin level in 12-week-old rats presented negative correlation with fasting insulin level in blood(r=-0.836,P＜0.01 ), and positive correlation with ISI (r=0.810, P＜0.01). Conclusion The decrease of serum ghrelin level is correlated with IR in adult SGA rats. Low serum level of ghrelin may be the result of IR.     

肠道病毒71型VP1基因及蛋白结构与功能的生物信息学分析

目的 分析肠道病毒71型(EV71)VP1基因及其编码蛋白的结构与功能,以指导其生物学功能研究.方法 利用多种生物信息在线分析工具和分析软件包分析EV71 2008-GZCH07株VP1基因及编码蛋白与其他EV71代表株的序列,进行多序列同源比对,并构建分子进化树.预测该基因编码的蛋白质理化特性,二级结构、三维结构等结构特性,酶学特性和抗原表位等免疫学特性.结果 2008-GZCH07株与ZJ001株同源性最高(97%和98%),与人柯萨奇病毒A16同源性最低,与EV71 A、B、C型病毒的同源性为86%～98%.2008-GZCH07株与ZJ001株和 BJ08-Z025-5株的进化距离较近,属于C4亚型;A、B、C三型EV71的VP1编码蛋白中,2008-GZCH07株VP1编码蛋白与B、C型进化距离较A型近.VP1基因全长510 bp,开放读码框位于116～510 bp区域,编码132个氨基酸,等电点为4.39.VP1蛋白富含α螺旋和无规卷曲,无跨膜区域,含5个高疏水性区域,属于胞外蛋白.蛋白质同源建模分析表明该区域位于蛋白表面,形成环状结构,含有5个抗原簇,7个关键催化位点位于该区域内或其附近.结论 EV71-VP1基因编码蛋白分布有多个磷酸化位点,具有较多的生物功能位点和潜在的抗原表位区域,可能是免疫诊断、药物作用研究及疫苗研制的靶抗原,可为EV71诊断、治疗及预防方面的应用价值提供重要的参考依据.     

鲍曼不动杆菌流行株Ⅰ类整合子RFLP分析及耐药基因盒研究

鲍曼不动杆菌是引起医院感染的一种重要致病菌,随着抗菌药物以及免疫抑制剂的广泛使用,其引起的感染在临床上越来越常见,鲍曼不动杆菌的耐药机制复杂,包括基因突变、外膜孔蛋白改变、灭活酶以及药物外排系统等。近年来国内外大量的文献都表明细菌的多药耐药与整合子有关。为了解中山大学附属第一医院鲍曼不动杆菌整合子阳性菌株的耐药基因盒的结构及其与抗菌药物之间的关系,     

免疫磁珠法在肾移植HLA快速分型中的应用

临床为了尽快选配供受者，常常需要快速分离纯化T、B淋巴细胞，进行HLA快速分型。应用免疫磁珠法与传统方法从等待肾移植的肾脏病患者和供体捐献者的静脉或腹腔血中分离T、B淋巴细胞，进行HLA—Ⅰ、Ⅱ类抗原组织配型。结果显示，在HLA组织分型中免疫磁珠法操作简单快速，分离的淋巴细胞纯度高、活力强、实验结果准确、分型抗原易于指定，有利于临床快速选配供受体等特点。在肾移植组织配型中可取代传统的方法。     

活化巨噬细胞培养上清液对VSMCsⅠ型胶原合成的影响

[目的]观察活化巨噬细胞培养上清液对原代培养VSMCs Ⅰ型胶原代谢的影响.[方法]体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞并制备活化巨噬细胞培养上清液,L-3H脯氨酸掺入法和RT-PCR检测不同浓度和作用时间的巨噬细胞培养上清液对VSMCs的胶原合成和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响.[结果]活化巨噬细胞培养上清液促进VSMCs的胶原合成,L-3H脯氨酸掺入量明显增加,呈剂量相关性,r=0.48(P＜0.05);Ⅰ型胶原mRNA表达随浓度和时间增加而上升,r值分别为0.58(P＜0.05)和0.55(P＜0.05).[结论]活化巨噬细胞分泌促进VSMCs胶原代谢,呈时间和剂量相关性,这可能是支架植入术后血管内膜过度增生的重要机制之一.     

pp67-mRNA在移植术后人巨细胞病毒感染中的诊断价值

目的　建立一种快速客观的人巨细胞病毒 (HCMV)活动性感染的新诊断方法。方法　采用核酸基础序列扩增法 (NASBA)测定移植术后患者外周血标本中巨细胞病毒信使核糖核酸 (pp67 mRNA) ,并与CMV抗原pp65检测法作比较 ,了解pp67的诊断价值。 结果　共检测移植术后患者 50例 ,pp65阳性患者 (≥ 1个 /5万WBC) 2 6例 ,其中pp67阳性患者 16例 ;有症状的CMV病患者 9例 ,pp65与pp67均为阳性 ;pp65阴性者中无pp67阳性。pp67的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为 10 0 %、82 %、56%和 10 0 %。结论　pp67 mRNA是实用客观的HCMV感染快速诊断方法 ,更准确的反映了HCMV的活动状况 ,值得推广应用     

肾移植术后巨细胞病毒抗原检测及其临床意义

目的 建立一种早期、快速诊断人巨细胞病毒（ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ）感染的抗原检测方法,以了解肾移植术后受者的ＨＣＭＶ感染情况并探讨其临床意义。方法 利用抗ＨＣＭＶ前早期抗原和早期抗原的单克隆抗体,建立了免疫组化Ｅｎｖｉｓｉｏｎ＾ＴＭ二步法。用于检测外周血多形核白细胞（ＰＭＮＬ）中ＨＣＭＶ抗原（前早期抗原和早期抗原）,诊断ＨＣＭＶ活动性感染。结果 检测肾移植术后受者８６