竹节参β-香树素合成酶基因克隆及生物信息学分析

目的克隆三萜皂苷代谢关键酶竹节参β-香树素合成酶(β-AS)基因,采用生物信息学分析其序列及其结构与功能,为竹节参合成及调控机制研究提供基础。方法提取竹节参叶片RNA,扩增β-AS基因编码区序列,将序列连接至pMDTM18-T载体进行克隆、测序,并利用生物信息学分析比较移栽品和栽培品竹节参β-AS蛋白的特征,构建竹节参β-AS蛋白的系统进化树。结果克隆出移栽品和栽培品竹节参的β-AS基因编码区序列,开放阅读框(ORF)均为2 286 bp,编码761个氨基酸。2个品种β-AS蛋白在细胞中的基本结构和功能是一致的,但两者之间存在8个氨基酸差异,使两者的蛋白质二级结构、三级结构磷酸化位点以及理化性质存在差异,可能会导致两者的催化活性存在差异。结论克隆得到野生移栽品和栽培品竹节参的β-AS基因,并对2个品种β-AS蛋白进行了生物信息学分析和比较,为今后研究该酶的结构特征、功能以及其与皂苷含量的相关性提供参考,也为竹节参合成生物学研究提供了生物基因元件。     

噻氯匹定的临床应用

噻氯匹定 (ｔｉｃｌｏｐｉｄｉｎｅ)是 70年代合成的广谱抗血小板药 ,自80年代广泛应用于心脑血管疾病的治疗。由于血小板粘附、聚集及释放反应在血栓性疾病的发生发展中起了关键作用 ,抗血小板药在栓塞性疾病的治疗中地位日趋上升 ,噻氯匹定在临床应用中显示作用肯定 ,因此越来越受到重视。本文就其药理学及临床应用综述如下。1　药理作用噻氯匹定是噻吩吡啶的衍生物 ,其抗血小板作用不是通过抑制环氧化酶的途径 ,而是通过抑制纤维蛋白原桥的形成 ,抑制纤维蛋白与血小板表面受体 (糖蛋白复合物ＧｐⅡｂ/Ⅲａ)之间的结合反应 ,抑制由ＡＤＰ…     

竹节参总皂苷通过调节TGF-β1/Smad3通路改善衰老大鼠心肌纤维化的作用研究

研究竹节参总皂苷(saponins extracted from Panax japonicas,SPJ)对衰老大鼠心肌纤维化的改善作用及作用机制。将18月龄SD雄性大鼠随机分为衰老模型组、SPJ低剂量组、SPJ高剂量组,每组10只;衰老模型组,SPJ低、高剂量组分别灌胃给予等量的生理盐水,SPJ 10,60 mg·kg^-1·d^-1,每周6次,持续灌胃6个月至24月龄;另取10只6月龄大鼠作为青年对照组。处死动物后,采用HE染色观察各组大鼠心肌形态;Masoon染色观察各组大鼠胶原沉积的变化;RT-PCR法检测各组大鼠心脏组织中胶原相关蛋白COL1α2,COL3α1,肌成纤维细胞标记物α-SMA和基质金属蛋白酶MMP9,MMP2的mRNA表达水平;Western blot法检测各组大鼠心脏组织中TGF-β1,p-Smad3,IL-1β,TNF-α的蛋白表达。SPJ能有效改善衰老大鼠心肌纤维紊乱程度,减少炎性细胞浸润,降低衰老大鼠胶原蛋白沉积;能明显下调衰老心脏组织中COL1α2,COL3α1,α-SMA和MMP9,MMP2的mRNA表达水平;同时,能有效抑制衰老心脏中TGF-β1,p-Smad3,TNF-α,IL-1β蛋白的表达量。SPJ能有效改善衰老大鼠心肌纤维化程度,其作用机制与抑制衰老心脏中TGF-β1,p-Smad3蛋白表达,降低心肌炎症反应有关。     

骨松宝颗粒联合依降钙素治疗骨质疏松症的临床研究

目的 探讨骨松宝颗粒联合依降钙素治疗骨质疏松症的临床疗效。方法 选取于2017年4月—2020年4月南阳市中心医院收治的128例骨质疏松症患者,根据随机数表法分为对照组（64例）和治疗组（64例）。对照组肌肉注射依降钙素注射液,10 U/次,2次/周。治疗组在对照组的基础上口服骨松宝颗粒治疗,5 g/次,3次/d。两组均治疗1个月。观察两组的临床疗效,比较两组平均骨密度（BMD）、骨钙素（BGP）、Ⅰ型胶原羧基末端交联肽（β-CTX）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、Oswestry功能障碍指数（ODI）评分的变化情况。结果 治疗后,治疗组总有效率89.06%,显著高于对照组71.88%（P<0.05）。治疗后,两组BMD、BGP显著升高,但β-CTX、IL-6、TNF-α显著下降（P<0.05）;治疗后,治疗组BMD、BGP高于对照组,而β-CTX、IL-6、TNF-α低于对照组（P<0.05）。治疗后,两组患者ODI评分均显著下降（P<0.05）;且治疗组低于对照组（P<0.05）。结论 骨松宝颗粒联合依降钙素治疗骨质疏松症疗效确切,可改善骨转换因子和炎症细胞因子,降低ODI评分,具有一定的临床推广应用价值。     

探讨基于谱效关系的中药质量评价的物元分析新方法

通过分析现行中药质量控制模式的局限性,引入"价值工程"中为产品评价提供的简便实用的物元分析数学模型,以中药材为例简述基于谱效关系建立中药质量评价物元模型的研究方法.提出的中药质量控制与评价的新模式,首先以中药"谱-效"关系的研究结果作为合理评价中药质量的主要依据,以物元模型来分析和评价中药的质量,提供了相对合理的计算方法.构建符合中药特点的质量控制新模式,以期为保证中药安全性、有效性和质量稳定性,促进中药现代化发展提供新的科学对策和技术支持.     

实验性精索静脉曲张对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的 :探讨大鼠精索静脉曲张对睾丸生精细胞凋亡的影响 ,阐明精索静脉曲张引起不育的病理机制。　方法 :选用雄性SD大鼠 32只 ,随机分为假手术组、4 5d模型组、6 0d模型组及 90d模型组。采用肾静脉缩窄法建立精索静脉曲张动物模型 ,流式细胞术分别检测各组大鼠睾丸凋亡细胞数及各级生精细胞数。　结果 :假手术组未出现明显的凋亡峰 ,各模型组均出现明显的凋亡峰 ,且随着造模时间的延长凋亡峰增高。　结论 :精索静脉曲张可引起睾丸生精细胞大量凋亡 ,各级生精细胞数减少 ,这可能是精索静脉曲张引起睾丸生精功能障碍从而导致不育的根本机制     

miR-21对骨质疏松小鼠骨髓基质细胞增殖的影响

目的探讨miR-21对骨质疏松小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)增殖的影响。方法采用双侧卵巢切除法构建骨质疏松小鼠模型(VOX),分离、培养、纯化小鼠BMSCs并采用si PORT Neo FX转染pre-miR-21、pre-miR-negative control(pre-miR-NC)、antmiR-21、ant-miR-negative control(ant-miR-NC)并进行RT-PCR验证,MTT法检测小鼠BMSCs增殖情况、茜素红与碱性磷酸酶染色法检测小鼠BMSCs成骨能力、Western-blotting检测细胞增殖、成骨分化相关蛋白水平。结果骨质疏松症小鼠BMSCs中miR-21相对表达水平低于Ctrl组(P0.05),OVX-pre-miR-21组BMSCs中miR-21相对表达水平、细胞增殖、PCNA水平、Ki-67水平、ALP染色程度、ALP活性、茜素红染色程度、Runx2水平、Osterix水平均高于OVX-pre-miR-NC组(P0.05),OVX-premiR-NC组BMSCs中miR-21相对表达水平、细胞增殖、PCNA水平、Ki-67水平、ALP染色程度、ALP活性、茜素红染色程度、Runx2水平、Osterix水平均显著低于Ctrl-pre-miR-NC(P0.05); OVX-ant-miR-21组BMSCs中miR-21相对表达水平、细胞增殖、PCNA水平、Ki-67水平、ALP染色程度、ALP活性、茜素红染色程度、Runx2水平、Osterix水平均显著低于OVX-ant-miR-NC组(P0.05),OVX-ant-miR-NC组BMSCs中miR-21相对表达水平、细胞增殖、PCNA水平、Ki-67水平、ALP染色程度、ALP活性、茜素红染色程度、Runx2水平、Osterix水平均显著低于Ctrl-ant-miR-NC(P0.05)。结论提高miR-21表达水平可促进骨质疏松小鼠BMSCs增殖能力与成骨分化能力。     

三种GC-1细胞DNA损伤模型的建立及比较分析

目的建立3种小鼠睾丸精原细胞株GC-1细胞DNA损伤模型并分析其异同。方法分别采用UVB辐照、D-半乳糖(D-Galactose,D-Gal)、博来霉素(bleomycin,BLM)刺激GC-1细胞不同时间,Western blot和免疫荧光法检测γ-H2AX表达及定位;免疫荧光法检测8-OHdG表达及定位;Western blot法检测p-p53和p21表达水平。结果UVB辐照和D-Gal处理后,γ-H2AX蛋白表达分别在4 h和6 h达高峰BLM刺激后,γ-H2AX蛋白表达逐渐上升且BLM浓度越高,其达到高峰时间越短。UVB辐照和BLM刺激后,胞核胞质内均有8-OHdG表达,且时间越长,核内表达越多;D-Gal处理后,8-OHdG主要表达在胞质,且在6 h达高峰。UVB辐照后,p-p53和p21蛋白表达不断上升,p21表达较滞后;D-Gal处理后,p-p53和p21表达分别在6 h和12 h达高峰;BLM刺激后,p-p53和p21蛋白表达呈同步上升趋势,BLM浓度越高,其达高峰时间越短。结论成功建立3种GC-1细胞DNA损伤模型,且D-Gal处理GC-1细胞DNA损伤较轻,而UVB辐照和BLM刺激DNA损伤较重。     

杠板归抗炎及抑菌活性部位研究

目的研究杠板归抗炎及体外抑菌作用以确定其有效部位。方法采用二甲苯诱发小鼠耳廓炎症、采用新鲜鸡蛋清致小鼠足肿胀评价其抗炎作用；采用试管二倍稀释法评价其抑菌作用。结果杠板归总提部位具有显著的抗炎作用，正丁醇部位有一定的抗炎作用；体外抑菌实验表明，杠板归乙酸乙酯部位对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、粪链球菌、铜绿假单孢菌有明显的抑菌作用，对白色念球菌有一定的抑菌作用。结论杠板归总提部位具有显著的抗炎活性，正丁醇部位有一定抗炎活性，杠板归乙酸乙酯部位抑菌作用明显，证实了杠板归用于炎症治疗的科学性。