输出小管-睾丸网注射提高小鼠精原干细胞移植效率

目的:探讨小鼠精原干细胞移植的关键技术,寻求有效可行的精原干细胞移植方法。方法:选用4-5周龄雄性BALB/c小鼠45只腹腔内注射40 mg/kg的白消安建立受体模型,消化分离新生绿色荧光小鼠睾丸精原细胞作供体细胞。在三维显微注射系统下分别采用睾丸网注射法(n=15),输出小管注射法(n=30),经输出小管注射失败后的补救方式为经输出小管-睾丸网注射,将供体细胞注射到受体小鼠左侧睾丸精曲小管内,右侧睾丸作为对照。观察注射后精曲小管的充盈度和外漏的情况;移植后2个月观察受体小鼠的生精功能恢复情况。结果:经睾丸网注射成功率仅为35.7%(5/14),其中9只因睾丸网穿破、细胞悬液外漏到间质而失败。经输出小管注射成功率为72.4%(21/29),失败的主要原因为穿刺过程中穿破输出小管,进一步采用经输出小管-睾丸网注射补救,总成功率提高为93.1%(27/29),注射成功后可见70%-80%的精曲小管被蓝染的细胞悬液充盈,均无外漏现象。移植后2个月,体视荧光显微镜下可见移植侧睾丸包含多段绿色阳性克隆;组织学染色示移植侧睾丸大部分精曲小管恢复正常生精。结论:经输出小管和经输出小管-睾丸网显微注射技术是小鼠精原干细胞移植的有效方法。     

后腹腔镜下置入双J管的新方法

目的介绍一种简单有效的后腹腔镜下双J管置入方法。方法使用吸引器和分离钳充分暴露输尿管切口,将吸引器的手柄旋开,置入带导丝双J管,在监视器下调整双J管头端,使其对准输尿管开口并缓慢送入输尿管下端,抽出双J管导丝,将吸引器拔出换为分离钳,两把分离钳配合下将双J管尾端置入输尿管上段。结果自2006年9月至2010年8月采用此方法在后腹腔镜下输尿管切开取石或肾盂成形术放置双J管共122例,平均放置时间3min,平均手术时间40min,全部成功完成手术。结论后腹腔镜下输尿管上段切开取石术中的双J管置入是手术难点之一,我们首创的利用吸引器管腔置入双J管的新方法所需器材简单易得,置入过程安全迅速,有效地缩短了手术时间。     

BALB/c小鼠精原干细胞体外长期培养和鉴定

目的:建立小鼠精原干细胞长期培养体系,探讨精原干细胞体外增殖分化的关键因子。方法:收集出生4~6 d BALB/c绿色荧光小鼠睾丸,采用改良的两步消化法获得细胞悬液,种植到铺有明胶的培养皿中,分别于种植后1、5、24 h通过差速贴壁法去除体细胞,获得高度纯化的精原干细胞,种植到丝裂霉素C处理的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养。基础培养液为StemPro-34SFM干细胞培养液并补充15种添加成分;添加20 ng/ml大鼠胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、10 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和200 ng/ml DDNF受体α1(GFRα1)促进精原干细胞增殖。分别采用免疫荧光染色和RT-PCR检测精原干细胞已知抗原和标志性基因的表达。结果:饲养层上培养3~4 d后精原干细胞增殖形成典型的克隆,为边缘不清楚的团块状;小鼠精原干细胞能在该培养体系中稳定传代培养达3个月。免疫荧光共聚焦显微镜观察示Oct-4特异性表达在培养的精原干细胞核上;而GFRα1显著表达在培养的精原干细胞膜表面;RT-PCR也证实培养的精原干细胞表达Oct-4、GFRα1、Sox2和c-Ret等象征未分化精原细胞的标志基因。结论:BALB/c小鼠精原干细胞可在体外长期培养(3个月),该培养体系的建立将为研究精原干细胞增殖分化调控机制及精原干细胞移植治疗男性不育奠定基础。     

经尿道120W绿激光前列腺汽化术与前列腺电切术疗效比较

目的 通过前瞻性随机对照实验比较经尿道120W绿激光前列腺汽化术与前列腺电切术的临床疗效.方法 将38例BPH患者随机分为两组,分别行经尿道120W前列腺绿激光汽化术(120W PVP组,18例)和前列腺电切术(TUKP组,20例),比较两组患者手术时间、术中出血、手术前后症状改善、术后膀胱冲洗时间、留置导尿管时间、住院时间及近期并发症.结果 两组患者术后国际前列腺症状评分(IPSS)、生活质量评分(QOL)、最大尿流率和残余尿量均较术前明显改善(P<0.01).但两组上述指标间比较差异无显著性(P>0.05);120WPVP组术中出血、术后膀胱冲洗时间、留置导尿管时间、住院时间明显短于TURP组(P<0.05),而其手术时间明显长于TUKP组(P<0.01);120WPVP组患者术后尿失禁、尿道狭窄、血尿、性功能障碍等并发症发生率明显低于TURP组(P<0.05).结论 120WPVP能有效治疗BPH,且与TURP具有相似的临床疗效,同时120W PVP相对于TUKP具有操作安全、术中出血少、术后尿失禁、尿道狭窄等并发症少、恢复快等特点.     

腹膜后腹腔镜切除输尿管息肉的临床疗效(附10例报告)

目的:探讨腹膜后腹腔镜下切除输尿管息肉的临床疗效及安全性。方法:回顾分析2005～2010年为10例病理证实为输尿管息肉的患者行腹膜后腹腔镜切除术的临床资料。结果:10例患者均顺利完成手术,无一例中转开腹。手术时间120～260 min,平均160 min,术中出血量20～400 ml,平均50 ml。术后患者均无高热,3例发生暂时性漏尿,3 d后消失,术后3个月拔除双J管。随访6～18个月,患者均恢复良好,未见输尿管狭窄及复发,积水均消失。结论:腹腔镜手术治疗体积较大、蒂较宽、形状不规则的输尿管息肉疗效显著,术后不易复发,手术并发症少,值得推广应用。     

胰岛素样因子3在氟他胺诱导的小鼠隐睾模型中的表达和意义

目的:通过氟他胺诱导小鼠隐睾动物模型的建立,探讨其睾丸组织的胰岛素样因子3(INSL-3)mRNA表达的变化。方法:妊娠BALB/c小鼠随机分成A、B、C、D、E 5组,每组9只(雄鼠3只,雌鼠6只),合笼交配;分别在雌鼠孕第12²1天持续10 d给予氟他胺灌胃,剂量依次为0、150、300、500、700 mg/kg;分别在出生后第4周和第8周时运用荧光定量PCR技术检测子代小鼠睾丸组织中INSL-3 mRNA的表达情况。结果:A组小鼠无隐睾,B、C组有单侧隐睾,发生率分别10.0%和25.0%;D、E组有双侧隐睾的发生,发生率分别为21.1%和40.0%。随着给药剂量的增大,INSL-3 mRNA的表达逐渐降低;与对照组相比,B、C组表达强度无明显变化(P>0.05);D、E组表达强度明显低于A组(P<0.05)。结论:剂量为150与300 mg/kg的氟他胺能诱导单侧隐睾模型,剂量为500与700 mg/kg的氟他胺能诱导双侧隐睾模型;并且隐睾小鼠睾丸的INSL-3表达随氟他胺浓度升高水平明显下降,可能是隐睾发生的机制之一。     

出血性放射性膀胱炎合并膀胱自发性破裂的诊治分析

目的 探讨出血性放射性膀胱炎合并膀胱自发性破裂的临床特点和诊治方法.方法 分析12例急诊膀胱破裂修补术后诊断为出血性放射性膀胱炎的临床资料、术后治疗手段和程序.结果 12例患者均存在盆腔放疗史,术前存在膀胱血块梗阻8例,有憋尿史4例.术中均发现膀胱壁广泛不规则增厚,病检提示膀胱慢性炎症.术后1~2周内,10例再发膀胱大量出血,给予膀胱灌注1%甲醛.3例治愈,7例因严重出血膀胱内血块引起排尿困难,给予电切镜下膀胱血块清除术加膀胱壁广泛电凝止血后.出血控制.术后给予高压氧治疗后治愈.近期2例于膀胱修补术后早期给予高压氧治疗,未发生再发出血.结论 膀胱自发性破裂术中发现膀胱壁病变、有盆腔放疗史的惠者,应高度怀疑出血性放射性膀胱炎的可能.术后再发膀胱出血率高,治疗可分步骤进行.术后早期给予高压氧治疗对预防再发出血是必要的.