人细胞色素P450 1A2的异源表达及代谢活性测定

目的获得单一的具有活性的人细胞色素P450 1A2（CYP1A2）重组酶,以进一步进行该酶参与的药物代谢研究。方法以人肝组织提取的总RNA为模板,RT-PCR扩增全长的人类CYP1A2基因片段,插入转座载体pFastBac构建重组转座质粒pFastBac-CYP1A2,转化入DH10Bac大肠杆菌,获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-CYP1A2,以之转染草地夜蛾细胞（Sf9）,与细胞色素氧化还原酶（CYPOR）进行共表达。利用蛋白质印迹分析鉴定其表达,并以非那西丁为底物,利用HPLC对其进行代谢活性测定。结果蛋白质印迹分析表明人CYP1A2蛋白在Sf9细胞中成功表达,且该重组酶对非那西丁的Km值为（82.04±11.39）μmol·L^-1（n=3）,Vmax值为（1.78±0.26）nmol·min^-1·mg^-1蛋白（n=3）,表观清除率Clint值为0.02mL·min^-1·mg^-1蛋白。结论利用杆状病毒/昆虫细胞系统,可获得具代谢活性的人CYP1A2重组酶,该酶可进一步用于其他底物的I相代谢研究。     

尿中美芬妥英手性色谱分离单纯形法最优化

应用单纯形法对尿中美芬妥荚(MP)的手性气相色谱分离条件进行最优化。优化结果选定柱温为185℃,载气流速为2.5ml/min。在此条件下测得柱效(以S-MP计)n=936/m,MP两对映体的分离度R为0.96%。并对20名健康志愿者口服消旋体后0～8h内的尿样进行分析测定。     

3,4—甲撑二氧去氧麻黄碱在生物体内的立体选择性代谢

采用立体选择性分析方法测定３，４－甲撑二氧去氧麻黄碱在大鼠和小鼠体内０－９６ｈ的排泄量。结果表明药物及其代谢对映体呈现立体选择性的代谢。药物的Ｓ－（＋）－对映体在Ｎ－脱甲基代谢途径中占优势，Ｒ－（－）－对映体则在Ｏ－脱烃基代谢途径中占主导地位。     

地非三唑的RP-HPLC法测定及其体外代谢研究

目的为研究抗早孕新药地非三唑(DL111-IT)的代谢作用机理和进一步开发利用,建立其体外代谢的RP-HPLC测定法。方法以Lichrospher ODS-C₁₈为色谱柱,甲醇-pH 7.5磷酸盐缓冲液(70∶30)为流动相,检测波长:235 nm,流速1.0 mL·min^-1,地西泮为内标,对鼠肝微粒体孵育液中DL111-IT的RP-HPLC法进行方法学研究。应用建立的方法对DL111-IT在不同来源的鼠肝微粒体中的体外代谢进行试验。结果DL111-IT浓度在1.01～101.0 μg·mL^-1呈良好的线性关系,在不同浓度下测得平均绝对回收率和相对回收率分别为(92±4)%和(100.3±1.9)%(N=5);DL111-IT在鼠肝微粒体中的代谢, β-萘黄酮组明显快于其他组。结论本法简便、准确,可用于DL111-IT的体外代谢研究。     

顶空GC测定盐酸法舒地尔中残留溶剂

目的 建立盐酸法舒地尔中甲醇、二氯甲烷和乙醇残留量的测定方法。方法 采用顶空毛细管气相色谱法，以Agilent HP-INNOWAX毛细管柱(30 m´0.32 mm, 0.5 µm)为分析柱，柱温为程序升温：起始温度35 ℃，保持12min，以40 ℃·min^-1升温至200 ℃，保持5 min；载气为高纯氮气，柱流速1.0 mL·min^-1；气化室温度200 ℃；FID检测器，检测室温度250 ℃。结果 外标法测得甲醇、二氯甲烷和乙醇的平均加样回收率分别为96.21%、77.96%和95.56%。样品中检测到的甲醇、二氯甲烷和乙醇残留量均远在药典规定的限量以下。结论 建立的方法能有效控制盐酸法舒地尔原料药中甲醇、二氯甲烷和乙醇的残留量。     

鸡肝散药效成分木犀草素在大鼠体内的药代动力学

建立RP-HPLC法测定大鼠灌胃鸡肝散提取物后血浆中木犀草素的含量，并研究木犀草素在大鼠体内的药代动力学行为。大鼠灌胃鸡肝散提取物后，血浆样品经三氯乙酸沉淀蛋白，用RP-HPLC法测定。血浆中木犀草素的线性范围为0.37～47.27 μg·mL^-1；定量限为0.37 μg·mL^-1；方法回收率93%～99%，提取回收率75%～85%，日内及日间精密度均小于5%。鸡肝散提取物在大鼠体内的药代动力学行为符合开放二室模型。经大鼠性别和测定时间两因素方差分析，提示不同性别的大鼠的血药浓度具有显著性差异。通过质谱法鉴定了血浆中代谢物为葡糖醛酸结合物。建立的大鼠血浆中木犀草素的含量测定方法具有灵敏、准确，专属性强等特点，可用于鸡肝散药效成分木犀草素的体内药代动力学研究。     

药学多学科综合设计性实验的实践

药学实验教学对于培养学生的创新精神和实践能力有很重要的作用,但目前的教学方法存在不少缺陷。以“维生素C注射剂的制备及含量测定”实验为例,开设药剂和药分综合设计性实验。通过近三年的教学实践,使学生全面、立体地了解了药学各学科间的关系,增强了动手能力和综合应用能力。     

血浆中氟伐他汀测定方法的研究及其应用

 目的建立血浆中氟伐他汀钠的含量测定方法,并用此法研究氟伐他汀钠在Beagle犬体内的药动学。方法血浆样品, 加同体积KH2PO4缓冲液(pH 2),乙醚提取,采用Diamonsil^TM C₁₈(4,6 mm×200 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇-10 mmol·L^-1 KH₂PO₄ (用H₃PO₄调pH2)(75:25)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,荧光检测(λ_ex=305 nm,λ_em=390 nm)。所得数据用3P87药动学程序处理,求出有关的药动学参数。结果氟伐他汀在20.16～5 040.0μg·L^-1内线性关系良好(r=0.999 8),最低检测限为5.04 μg·L^-1(S/N=3)。高、中、低3个质控样品的平均方法回收率为93.30％～102.9％,提取回收率大于90％,日内、日间精密度的 RSD均小于5％。结论本法简便、灵敏、重现性好,可用于氟伐他汀钠的血药浓度分析及药动学研究。     

四方蒿片剂的HPLC指纹图谱研究

四方蒿Elsholtzia blandaBenth·又名鸡肝散、滇香薷、四棱蒿等,为哈尼族民族药,其叶、花或全草均可入药,用于治疗感冒、痢疾、肝炎等病症[1];主要产于云南南部和东南部、贵州和广西等地,资源丰富。四方蒿的主要成分为黄酮,尤以花序中黄酮含量最高[2,3]。研究证明四方蒿总黄酮有保护心肌细胞的作用,对心肌缺血、急性心肌梗死等有明显的疗效[4-7]。四方蒿片剂由四方蒿花序提取物制得,为控制其质量,作者采用HPLC建立了四方蒿片剂     

四方蒿片剂的溶出度测定

四方蒿片剂是由唇形科植物四方蒿(Elsholtzia blanda Benth)花序提取物制得的一种中药制剂。四方蒿资源十分丰富,主要分布于云南、贵州等地,其叶、花或全草均可入药,用于治疗感冒、痢疾、肝炎等病症,哈尼族民间用于治疗眼部疾病及呼吸道感染,其疗效甚佳。文献报道,动物实验模型表明,四方蒿