丁酸钠诱导MCF-7细胞凋亡反义cDNA文库的构建和初步鉴定

目的构建丁酸钠诱导McF-7细胞凋亡过程的反义cDNA文库,以分离丁酸钠抗肿瘤效应基因。方法收集经2．5mmol/L丁酸钠处理0、12、18、24、36、48、72h的人乳腺癌MCF-7细胞,提取poly(A)+RNA,逆转录合成cDNA第一链和第二链,双链cDNA修平末端后连上EcoRⅠ/HindⅢ接头,分别用EcoRⅠ/HindⅢ酶切消化后,反向连上载体pcDNA 3．1,连接产物转化大肠杆菌得一反义cDNA文库,随机挑取40个克隆子进行酶切鉴定。结果构建的反义cDNA文库含1×10~6重组子,重组效率为90%,插入子平均长度为1．5kb。结论构建的文库容量较大,质量较高,为进一步分离丁酸钠抗肿瘤效应基因奠定了基础。     

smad4 shRNA 真核表达质粒的构建及鉴定

 目的 针对smad4基因的不同部位,构建不同smad4shRNA表达质粒载体,在转录后水平抑制smad4的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆。方法 用DNA重组技术将针对人smad4基因不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中,构建smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3。脂质体介导转染人宫颈癌细胞株HeLa,经G418筛选抑制smad4表达的稳定细胞克隆。结果 3个smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。RT-PCR、Westernblotting均证实：3种shRNA重组质粒中pGenesil-smad4-shRNA2可明显降低细胞内smad4mRNA丰度及smad4蛋白表达。结论 成功构建了smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3,并筛选出特异而高效地阻断smad4表达的克隆。此实验结果为进一步研究smad4蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。     

应用重组人血小板生成素(rhTPO)临床观察

目的　评价沈阳三生的重组人血小板生成素(rhTPO)对血小板减少患者的疗效和安全性。方法　11例血液恶性肿瘤患者和7例难治性ITP患者皮下注射rhTPO(1 0 μg/kg·d) ,动态监测注射后血小板生长情况。结果　肿瘤化疗组使用rhTP0 9d后,血小板计数较对照组明显升高(P <0 0 5 ) ,血小板恢复至10 0×10 9/L需19±9 4d ,较对照组2 4±6 .2d明显缩短。难治性ITP组显效6例,良好1例,总有效率10 0 %。无明显不良反应。结论　rhTPO对化疗后骨髓抑制引起的血小板减少及难治性ITP患者的血小板严重减少有促进增生作用,无明显不良反应     

利用改良抑制消减杂交方法建立再生障碍性贫血CD4+T细胞的基因差异表达文库

目前发现T细胞介导的免疫在再生障碍性贫血(再障)发病机制中起重要作用，并且已有多个独立的研究小组从再障患外周血及骨髓中成功分离出能引起造血功能衰竭的致病相关性T细胞克隆，并证实其表型为CD4^ T细胞，但这些T细胞异常增殖、活化及抑制机体造血功能的具体机制仍不清楚。我们通过改良抑制消减杂交的方法，建立CD4^ T细胞的差异基因表达库，为揭示再障病理损伤的机制提供线索。     

立体定向治疗顽固性癫痫27例远期疗效随访

目的：分析立体定向治疗顽固性癫痫的远期疗效。方法：对27例行立体定向脑内单靶点或多靶点毁损。结果：27例中远期随访疗效属满意7例,占26％,显著进步7例,占26％,良好6例,占22％,较差7例,占26％。结论：立体定向手术治疗疗效是令人满意的,强调术中多靶点联合和术后综合治疗。     

Inhibitory Effects of Anti-sense PTTG on Malignant Phenotype of Human Ovarian Carcinoma Cell Line SK-OV-3

To construct eukaryotic expression vector expressing full length anti-sense pituitary tumor transforming gene (PTTG) mRNA and observe its blocking effect on the potential invasion of human ovarian carcinoma cell line SK-OV-3. PCR primers containing designed enzyme cut sites were used for cloning full-length PTTG gene fragment, and the resulting PCR product was inserted into the eukaryotic vector pcDNA3. 1 in the antisense direction. The recombinant vector was then transfected into SK-OV-3 by Lipofectamine. The positive cell clone was screened by G418, PTTG and bFGF at protein level expression were detected by Western blot. The biological behavior change of transfection positive cells was observed by colony formation in soft agar assay. Our results showed that SK-OV-3 clones stably expressing full-length recombinant pcDNA3. 1-PTTGas were obtained. The expressions of PTTG and bFGF protein in transfected cells were decreased by 61.5% and 52.3%, respectively as compared with non-transfected ones. The number of colony formation was reduced significantly in transfected cells as compared with empty vector transfected and non-transfected cells. It is concluded that the recombinant vector pcDNA3. 1-PTTGas is a novel tool and provides an alternative anti-sense gene therapy targeted at PTTG in human carcinoma.     

兔慢性肾衰竭加速性动脉粥样硬化病理形态学变化

目的：通过结扎兔肾动脉分支建立慢性肾衰竭模型,观察主动脉病理变化。方法：新西兰白兔60只,随机分为慢性肾衰竭组（CRF组）和假手术组（Sham组）。CRF组结扎左肾动脉分支同时切除右肾,术后动态观察兔主动脉、残余肾的病理形态学变化和肾功能等指标。结果：CRF组兔术后血清BUN、Scr逐渐升高,肾脏病理逐渐出现明显的肾小球硬化和肾间质纤维化;主动脉逐渐出现内皮细胞脱落、脂纹、粥样斑块等动脉粥样硬化的表现。结论：通过结扎兔左肾外动脉分支和切除右肾一次完成的方法可成功建立CRF加速性动脉粥样硬化模型。     

Effect and Comparison of Sodium Butyrate and Trichostatin A on the Proliferation/Differentiation of K562

Thereisampleevidence ,bothinvitroandinvivo,thatHDACinhibitorsblocktheenzymaticac tivityofdeacetylasesandinducehyperacetylationofhistones[1] Furthermore ,aplethoraofculturedtu morcellshasbeentestedforsusceptibilitytoHDACinhibition UpontreatmentwithHDACinhibitors ,thesecellsshowsignsofapoptosis ,growtharrest,differentiationandaltered geneexpression HDACinhibitorsare potentially promisingcandidatedrugsfordifferentiationtherapyofcancer ButyratewasthefirstHDACinhibitortobei dentified[2 ] a…     

供者干细胞输注治疗慢性髓性白血病异基因造血干细胞移植后的复发——1例报告及文献复习

目的:探索异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)后白血病复发的供者干细胞输注治疗方法,提高Allo-HSCT的疗效。方法:慢性髓性白血病-慢性期(CML-CP)患者1例,采用改良的白消安/环磷酰胺(BU/CY)方案预处理。回输HLA配型相合的胞兄的外周血干细胞,单个核细胞(MNC)3.42×108/kg,CD34 细胞3.82×106/kg。移植物抗宿主病(GVHD)的预防采用环胞素A(CsA)联合短疗程甲氨蝶呤(MTX)方案,移植后6个月停用CsA。 192d细胞遗传学复发,给予未经动员的供者淋巴细胞输注(DLI),细胞剂量为1.8×107MNC/kg。 458d血液学复发,给予联合化疗加经粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的供者干细胞输注(DSI),细胞剂量为4.68×108MNC/kg。结果:移植后 13d白细胞植活, 16d血小板植活, 20d短串联重复序列(STR-PCR)检测显示为完全供者的基因型,同时Ph染色体及bcl/abl融合基因转为阴性。于 182d发生了肝脏及皮肤的慢性移植物抗宿主病(cGVHD),未使用免疫抑制剂的情况下,cGVHD逐渐消失。 192d细胞遗传学复发予DLI后完全缓解(CR)。 458d血液学复发,予联合化疗加DSI后再次达CR。随访至今,患者于Allo-HSCT后567d,DSI后79d仍无病存活。结论:DLI≤0.2×108MNC/kg是安全有效的。在血液学水平复发的患者,单用化疗或DLI疗效有限,联合化疗加DSI可使疗效提高,且无明显的并发症发生。