生长分化因子5诱导兔脂肪干细胞成软骨细胞分化的实验研究

目的 探讨应用生长分化因子5(growth differentiation factor 5,GDF-5)诱导脂肪干细胞(adipose-deftved stern cells,ADSCs)成软骨细胞分化的可能性及效果. 方法 3月龄清洁级健康日本大耳白兔6只,雌雄不限,体重2～3 kg.取兔皮下脂肪4～6 Ml,采用胶原酶消化离心贴壁培养法培养ADSCs,取第3代细胞进行实验.波形蛋白免疫组织化学和CD44、CD49d、CDl06免疫荧光染色鉴定ADSCs.调整细胞密度为1×106个/Ml,分别用普通细胞培养液以及含0、10、100 ng/Ml GDF.5的软骨细胞诱导液诱导培养.倒置相差显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测细胞增殖情况;RT-PCR检测诱导细胞Col Ⅱ和蛋白多糖Mrna的表达;免疫组织化学、阿利新蓝染色、甲苯胺蓝染色和Western blot法检测诱导细胞Col Ⅱ和蛋白多糖表达. 结果 ADSCs呈小圆形、梭形、多角形分布,表面抗原标志CD44、CD49d呈阳性表达,CD106和波形蛋白呈阴性表达.100 ng/Ml GDF-5诱导的ADSCs呈圆形或类圆形,且细胞增殖旺盛.普通培养液和0、10、100 ng/Ml GDF.5成软骨细胞诱导培养后7 d,Col Ⅱ、蛋白多糖Mrna表达均呈浓度依赖性增加,除0、10 ng/Ml GDF-5两组间差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各组差异均有统计学意义(P<0.05):100 ng/Ml GDF.5诱导培养14 d,Col Ⅱ、蛋白多糖Mrna以及蛋白表达达高峰,阿利新蓝、甲苯胺蓝染色以及Col Ⅱ免疫组织化学染色均呈阳性. 结论 经一定浓度的GDF-5诱导的ADSCs,Col Ⅱ和蛋白多糖表达明显增加,具有软骨细胞的部分生物学功能.     

大麻素在鼠累积损伤性椎间盘慢性炎症反应中的表达及意义的初步研究

目的本研究试图通过检测大麻素(CB)的两种主要水解酶——N-乙酰基乙醇胺水解酸性酰胺酶(NAAA)、脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)以及大麻素1、2型受体(CB-1R、CB-2R)在鼠累积损伤性椎间盘慢性炎症反应过程中的表达来探讨其中大麻素的参与过程及作用机制。方法清洁级Wistar大鼠随即分成实验组与对照组,根据Ulrich制作方法准备实验组,以切皮后即缝合为对照组,在术后第3、7、10天,实验组与对照组每次各取6只,取出相应椎间盘,进行形态学观察,应用Real Time-PCR技术检测FAAH、NAAA、CB-1R、CB-2R的表达水平;利用Western blot方法检测CB-2R蛋白含量。结果与对照组相比,实验10 d组可见刺伤所致纤维环断裂,髓核内出血。在椎间盘累积性损伤7 d时,NAAA和FAAH表达含量分别约为对照组的3倍,并形成高峰;而在损伤10 d后,其表达量呈减少趋势。3、7、10 d组CB-2R蛋白表达与对照组相比明显增高(P0.01)。结论作为水解酶的底物CB类物质在第7天时候表达含量呈低谷,而随着时间的延长逐渐增高。CB受体表达在损伤后显著增高证明CB类物质慢性炎症反应阶段的调节作用越来越大。     

MAPK 通路蛋白在百草枯中毒致急性肺损伤大鼠肺组织中的表达及意义

目的：观察MAPK通路蛋白在百草枯中毒致急性肺损伤大鼠肺组织中的表达并探讨其意义。方法36只SD雄性大鼠随机平均分成两组：PQ组予腹腔注射20 mg／kg百草枯,对照组予腹腔注射生理盐水1 mL。在注射百草枯后8 h、1 d和3 d时,收集血清和肺组织标本。分别使用生化法检测血清中超氧化物歧化酶（ SOD）活性和丙二醛（ MDA）含量,采用ELISA方法检测血清中白细胞介素－1β（ IL－1β）和肿瘤坏死因子－α（ TNF－α）含量,利用血气分析仪检测大鼠动脉血氧分压（ PaO2）,行组织切片HE染色进行肺损伤评分,利用Western blot方法检测肺组织中p－p38MAPK、p－JNK、p－ERK1／2蛋白表达水平。结果百草枯中毒后,与对照组比较,PQ组大鼠血清中SOD活性降低（P＜0.05）,MDA、IL－1β和TNF－α含量明显增加（P＜0.05）;PaO2逐渐下降（P＜0.05）,肺损伤评分时间依赖性增加（P＜0.05）;肺组织中p－p38MAPK、p－JNK、p－ERK1／2表达量均明显上调（P＜0.05）。结论百草枯产生氧自由基,可以激活包括 p38MAPK、JNK、ERK1／2在内的MAPK通路,导致急性肺损伤发生发展。     

早期动脉二氧化碳分压联合乳酸评估急性百草枯中毒患者预后的价值

目的:分析动脉血二氧化碳分压(PaCO_2)和乳酸(Lac)水平评估急性百草枯中毒患者预后的临床价值。方法:回顾性分析2012-01—2019-06期间中国医科大学附属盛京医院急诊科收治的急性百草枯中毒患者的临床资料。根据患者的预后分为存活组和死亡组。分析两组患者在入院即刻及24 h的临床资料,并运用Logistic回归、受试者工作特征曲线(ROC曲线)等方法研究PaCO_2和Lac在百草枯中毒患者预后评估中的价值。结果:患者入院即刻的PaCO_2、WBC、NE是影响急性百草枯中毒患者预后的独立危险因素,但三者AUC值均小于0.7;入院24 h时PaCO_2和Lac是影响急性百草枯中毒患者预后的独立危险因素。PaCO_2的AUC值为0.878,当PaCO_2为26.5 mmHg;其敏感度为76.9%,特异度为92.0%,诊断准确率为81.0%。PaCO_2和Lac二者联合的AUC值大于0.9,显著高于单独PaCO_2的AUC值。结论:百草枯中毒患者入院24 h内PaCO_2小于26.5 mmHg以及Lac大于3.2 mmol/L时,提示预后不佳。PaCO_2联合Lac则可以更好的预测百草枯中毒患者的预后。     

骨质疏松症与骨痛

骨痛是骨质疏松症最常见的症状,很多老年人就是因为腰背部疼痛到医院就诊,才发现自己患上了骨质疏松症。临床调查发现,骨痛已经成为影响老年人生活质量的主要因素,而疼痛使患者惧怕活动又进一步造成了骨质疏松的加重,因此对骨质疏松性骨痛的治疗在临床上至关重要。     

大剂量盐酸氨溴索治疗急性百草枯中毒肺损伤的临床研究

目的观察大剂量盐酸氨溴索治疗急性百草枯(PQ)中毒肺损伤的临床效果。方法将40例急性百草枯中毒肺损伤患者分为治疗组(20例)和对照组(20例),对照组给予常规治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用盐酸氨溴索注射液20 mg/(kg·d)静脉滴注q12h,连用5 d;观察两组动脉血气、HRCT变化,发生多脏器功能障碍综合征(MODS)病例,病死率与死亡病例存活时间。检测两组患者治疗前后血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及血清TNF-α、IL-6水平。结果治疗后两组动脉氧分压、氧合指数、HRCT改变等均有所改善(P<0.01或P<0.05),治疗组与对照组比较改善更为显著(P<0.05)。治疗组发生MODS病例数少于对照组(P<0.05),两组病死率比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗后血清MDA水平均下降,治疗组治疗后MDA水平下降较对照组更为明显(P<0.05);两组患者治疗后血清SOD水平均升高,治疗组治疗后SOD水平升高较对照组更为明显(P<0.05)。与治疗前比较,两组患者血清TNF-α和IL-6水平均显著降低(P<0.01);与对照组比较,治疗组患者TNF-α和IL-6降低更显著(P<0.05)。结论大剂量盐酸氨溴索注射液通过提高机体抗氧化能力,抑制脂质过氧化反应,抑制促炎因子的水平,减轻肺损伤,对急性PQ中毒肺损伤有一定治疗作用。     

创伤性上颈椎不稳的修复重建

目的：总结和分析19例创伤性上颈椎不稳的治疗效果,并对治疗方式以及疗效分析进行研究。方法：外伤患者19例,男16例,女3例;年龄21～56岁;包括寰椎骨折3例,齿突骨折10例,枢椎椎弓根骨折3例,寰枢椎半脱位3例,其中6例（单纯齿突骨折1例,寰椎骨折合并齿突骨折1例,枢椎椎弓根骨折1例,寰枢椎半脱位3例）选择非手术治疗,其余13例均采用手术治疗。结果：19例经随访6个月～6年,平均随访1.8年,根据JOA评分标准,非手术和手术患者术后改善率分别为42.5%和87.0%。结论：创伤性上颈椎不稳应早期诊断早期治疗,在选择术式时应保证上颈椎充分固定的同时尽量保留颈椎的功能,而且上颈椎的确切融合对远期疗效起决定性作用。     

中西医结合治疗乳腺小叶增生症118例

本文总结作者在临床工作中，运用中药加部分乳房局部手术切涂治疗１１８例乳腺小叶增生症。探讨了中西医结合治疗乳腺小叶增生症的方法，提出了治疗乳腺小叶增生症应以疏肝理气、调畅气机为主，同时辅以局部手术切除，方能收到良好效果。     

Nrf2在百草枯中毒致大鼠急性肺损伤中的表达和意义

目的研究转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)在百草枯中毒致大鼠急性肺损伤(ALI)中的表达和意义。方法 48只SD雄性大鼠随机平均分成百草枯中毒组和对照组。在注射百草枯后4、8、24和72 h时,收集血清和肺组织标本。采用生化法检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,采用ELISA检测血清中IL-1β和TNF-α含量,检测大鼠肺湿/干重比,行组织切片HE染色进行肺损伤评分,利用Western blot检测肺组织中Nrf2蛋白表达水平,采用免疫组织化学法检测Nrf2在肺组织中的表达。结果大鼠百草枯中毒后血清中SOD活性降低,MDA含量增加,而炎症细胞因子IL-1β和TNF-α含量均明显增加。肺湿/干重比以及肺损伤呈时间依赖性增加。Nrf2在正常肺组织中有少量表达,当百草枯中毒1 d后其蛋白的表达量明显增加。结论 Nrf2参与了百草枯导致ALI的过程,并产生内在的保护作用。Nrf2有望成为治疗百草枯中毒新的靶点,具有良好的临床应用前景。     

GDF-5基因活化基质体内转染修复兔退变椎间盘的实验研究

目的通过GDF5基因活化基质体内转染兔退变椎间盘,观察其修复效果。方法脂质体介导的pcDNA3.1(+)/GDF-5重组质粒混入Ⅰ型胶原支架,置入兔退变椎间盘;实验分为GAM组,普通支架组,脂质体对照组,2个月后RT-PCR和Western blot观察椎间盘髓核细胞GDF-5基因和蛋白表达的稳定性,间苯三酚法检测髓核蛋白多糖含量,流式细胞仪检测细胞凋亡率来观察修复效果。结果 RT-PCR结果显示术后2个月GDF-5基因稳定表达。GAM组蛋白多糖含量高于另外两组(0.05),空白支架组和对照组之间没有差异(=0.601)。GAM组髓核细胞凋亡率明显低于另外两组(0.01),空白支架组和对照组之间没有差异(=0.902)。结论利用GAM可以有效的进行GDF-5基因体内转染并表达,从而修复退变椎间盘。