骨髓基质干细胞/胶原凝胶复合物原位构建工程化肝组织

目的 探讨大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)与胶原凝胶材料复合后原位植入肝内的组织再生潜能.方法 将来源于雄性SD大鼠的BMSCs与液态鼠尾胶原复合后,原位植入雌性大鼠肝组织挖除部位,分别于植入后1、2周取材.采用苏木素-伊红(HE)染色对植入部位组织学特征进行观察,并采用免疫组化染色和FISH方法分别对白蛋白、CK19及SRY基因进行检测.结果 BMSCs与胶原凝胶复合后,细胞均匀的分布在整个BMSCs/胶原复合物中.体内植入后1周,观察到植入细胞分化出圆形、多角形等细胞形态.植入后两周,组织学显示植入部位形成肝细胞样的细胞集落,免疫组化染色显示这些细胞抗白蛋白抗体染色(Alb)阳性.此外,植入部位还形成由上皮样细胞围成的管状结构,抗CK19抗体染色提示这些上皮样细胞为胆管上皮细胞.原位杂交证实植入部位细胞主要来自植入的雄性大鼠的骨髓基质干细胞.结论 BMSCs与胶原复合后原位植入肝内可形成类肝样组织.该方法经进一步研究有望用于肝脏病损的修复治疗.     

透明质酸支架构建工程化肝组织小块的初步研究

目的探索肝窦血管内皮细胞和肝细胞与透明质酸支架复合后构建工程化肝组织小块的可行性。方法分离小鼠肝细胞和肝窦血管内皮细胞，分别种植于透明质酸海绵状支架上培养，形成支架材料-细胞复合体，植于小鼠肝包膜下肝组织表面。2周后将支架取出观察植入效果。结果分离获得的肝细胞和肝窦血管内皮细胞活力较高。构建的支架-细胞复合物植入体内后与宿主肝组织紧密融合，可见移植物内有微血管形成，血管周围肝细胞聚集生长，结构类似正常肝组织。结论利用透明质酸支架复合肝窦血管内皮细胞和肝细胞构建工程化肝组织小块的方法可行。     

工程化肝组织肝表面片状植入新方法

目的 探索较大尺度工程化肝组织原位肝表面贴覆片状植入、尽快建立血供的可行性.方法 将采用胰酶冷消化法分离的新生大鼠肝细胞(1×1010个/L)、肺组织块贴壁法分离的大鼠微血管内皮细胞(1 ×1010个/L),与片状胶原支架、血管内皮生长因子(VEGF,10g/L)复合构建肝细胞/内皮细胞/血管生长因子/胶原支架复合的片状工程化肝组织.将其在15只大鼠肝表面贴覆植入,4周后取样进行大体观察及组织切片苏木素-伊红(HE)染色.结果 分离的肝细胞及内皮细胞活率均为90％以上.片状工程化肝组织经肝表面贴覆法植入后,大体观察可见能与原位肝脏紧密贴合生长,形成体积大于1 cm3的类肝样组织.体内植入后4周,植入物与肝脏贴合紧密,融合生长.组织学观察显示移植物中肝细胞均匀分布,未见细胞变性及死亡,有血管生成.结论 肝表面贴覆植入法简便安全,可构建较大尺寸的工程化肝组织,有望达到原位修复受损肝脏的目的.     

以胶原凝胶为支架原位构建可注射型工程化肝

背景：为了解决肝移植供体的不足，最具潜力的肝组织工程技术悄然兴起，为肝组织的修复与功能重建开辟了新的前景。目的：探索一种以新生大鼠肝细胞为种子细胞，以胶原凝胶为支架材料，可原位注射的工程化肝组织构建方法。设计、时间及地点：以动物为观察对象的实验方法探索，于2007—03／2008—02在解放军总医院普通外科研究所完成。材料：成年雌性SD大鼠及出生24h以内的雄性新生SD大鼠。方法：以胰酶消化法获取新生大鼠肝细胞，以PKH26标记后与液态胶原复合，采用注射方法植入大鼠肝脏。主要观察指标：于肝细胞／胶原凝胶复合物植入当天及植入后第3，7天序贯取样、切片，分别行苏木精-伊红染色和自蛋白免疫组织化学染色后对“类肝组织”进行形态学观察，并观察植入细胞的示踪荧光。结果：①以胶原为基质构建的工程化肝组织能方便地植入到肝脏。②荧光显微镜观察到移植区域主要由PKH26阳性细胞组成。③苏木精伊红染色显示，移植区域肝细胞在胶原凝胶中可存活、生长。④免疫组织化学染色证实植入肝细胞能够表达自蛋白。结论：以新生大鼠肝细胞，胶原凝胶为基础构建可原位注射的工程化肝组织是可行的，这种方法对于发展以组织工程为基础的原位肝脏重建具有良好的应用前景。     

肝脏部分切除对骨髓间充质干细胞定向肝细胞分化的影响

目的:探讨肝脏损伤对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向肝细胞诱导分化的影响。方法:昆明系小鼠分两组,分别行肝脏2/3切除和开关腹手术,分别于术后12 h,24 h,36 h,48 h,72 h后提取MSCs,取第3代的MSCs,流式细胞仪鉴定MSCs后,应用HGF联合EGF诱导,20 d后免疫荧光染色鉴定肝细胞标志物ALB,CK8,计数ALB阳性细胞数量和同视野细胞总数,计算阳性率。结果:诱导分化20 d,两组均有ALB、CK8表达,24 h时间点,实验组阳性率(10.41±0.11)%,对照组阳性率为(9.83±0.32)%,实验组与对照组阳性率比较差异有显著性意义;其余时间点实验组和对照组阳性率比较差异均无显著性意义(P>0.05)。结论:肝脏损伤后24 h,提取MSCs定向肝细胞的阳性率高。     

血管化组织工程肝小块构建的研究

目的 利用组织工程方法和原理初步构建血管化肝小块组织。方法 肝细胞和肝窦内皮细胞取自小鼠肝脏。采用内管网高分子聚酯类聚合物（PLGA）材料作为支架。肝窦内皮细胞接种在内管网PLGA支架管道的内壁使之在体外预内皮化。肝细胞与纤维蛋白原混合制成肝细胞／纤维蛋白原混合液，接种在喷洒有凝血酶的预内皮化的内管网支架上。构建的复合物分别植于小鼠肠系膜部位（A组）和肝组织表面（B组）．2周后将支架取出观察，比较不同部位的植入效果。结果 支架体外预血管化后，其管道内可见内皮细胞均匀贴壁；体内植入后内皮细胞优势生长；A组小鼠肠系膜间支架中有血管长入，但未见有肝细胞留存；B组可见支架内有少量肝细胞团，并有血管长入。结论 简易PLGA内管网多孔支架可以用于肝组织小块的构建．而肝组织表面更适合组织工程肝小块的体内植入。     

麝香跟痛散填充足跟垫治疗跟痛症临床观察

目的:观察麝香跟痛散填充足跟垫环形药垫治疗跟痛症临床疗效。方法:对105例跟痛症患者采用麝香跟痛散填充制成中空环形药垫,兼有中医外治及西医足跟垫双重功效治疗。结果:105例中,治愈60例,好转30例,无效15例,总有效率为85.7％。结论:麝香跟痛散填充足跟垫治疗跟痛症疗效显著。     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞定向分化肝样细胞

目的观察骨髓间充质干细胞体外诱导分化为肝样细胞。方法自大鼠的股骨中提取骨髓细胞,利用 Percoll 法行骨髓间充质干细胞分离、纯化。取第3代的骨髓间充质干细胞,应用肝细胞生长因子(HGF)20ng/ml 表皮生长因子(EGF)1.5μg/ml 联合诱导。两周后免疫荧光染色及逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)鉴定诱导后细胞白蛋白的 mRNA 的表达。结果诱导分化一周骨髓间充质干细胞变为圆形,两周后免疫荧光染色可见肝细胞标志物 CK18和白蛋白表达,RT-PCR 检测有白蛋白的 mRNA 的表达。结论骨髓间充质干细胞体外诱导能定向分化为肝样细胞。     

肝十二指肠韧带内注射利多卡因减轻大鼠盱脏的热缺血／再灌注损伤

肝脏的缺血预适应(Ischemic preconditioning,IP)能有效地减轻肝脏缺血/再灌注(ischemia/reprefusion,I/R)损伤,但其在临床的使用尚受到限制.李晓立等的初步研究表明,肝脏I/R损伤前,肝十指肠韧带内流向普鲁卡因预处理能明显减轻肝脏L/R后早期的微循环障碍,可能是一种更方便临床使用的减轻I/R损伤的方法.本实验采用肝     

局部封闭配合麝香跟痛散填充足跟垫治疗萎缩型足跟脂肪纤维垫炎30例疗效观察

萎缩型足跟脂肪纤维垫炎多发于年老体弱或久病卧床患者,足跟部因不经常负重而发生退行性变,皮肤变薄,跟下脂肪垫部分萎缩,骨骼发生脱钙变化而致,与跟垫组织退行性病变有关。2010-01—2011-05,我们采用局部封闭配合麝香跟痛散填充足跟垫治疗萎缩型足跟脂肪纤维垫炎30例,并与单纯局部封闭治疗30例对照观察,结果如下。1资料与方法