邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠胸腺独特上调的高表达基因

目的 观察邪毒壅盛证荷瘤小鼠胸腺基因表达的特征.方法 综合采用荷瘤小鼠及其标准化辨证方法,采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array检测不同证候H22荷瘤小鼠胸腺组织基因的表达,并分别筛选2006年及2009年两批数据中邪毒壅盛证独特高表达的基因,进行理论研究.结果 2006年、2009年早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠胸腺组织一致独特上调的基因108个,取各自最高表达的15个基因,有8个重叠:Trim30、Sept6、Mcm3、Supt16h、Vps35、Smc3、Rsl1d1、Pa2g4,另分别有Smc1a、Eif3s10、Phf6、Sesn1、Iws1、Lin7c、Itch,以及Tax1bp1、Ifi204、Pnn、Ptbp2、Ascc3、Ddx10、Luc7l2等非重叠基因,这些基因主要涉及细胞的增殖、基因的表达与调控.结论 邪毒壅盛证荷瘤小鼠胸腺高表达的基因多涉及促进基因的表达与复制,这与该证候肿瘤增长迅速相关,提示胸腺尚处于被动且积极的免疫代偿状态;鉴于与邪毒壅盛证同期的气虚证,以及与其它对照比较,这些基因独特上调,提示荷瘤小鼠同病异证在胸腺层面是有其物质基础的.     

黄连-大黄-肉桂复方及其组分对人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞增殖的影响

目的观察黄连-大黄-肉桂复方及其组分配伍对人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞增殖的影响,并从PI3K/AKT-FOXO3a通路探讨其作用的分子机制。方法体外培养人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞,采用MTT法分别检测复方和复方中黄连、大黄、肉桂各自主要有效成分小檗碱、大黄素和桂皮醛不同配伍的肝癌细胞增殖;进一步以复方及有效组分最佳配伍(简称"组分")作用肝癌细胞24h,RT-qPCR检测PI3K、AKT和FOXO3a mRNA表达,Western blot检测PI3K p110、AKT、p-AKT、FOXO3a和p-FOXO3a蛋白表达。结果复方、小檗碱、大黄素和桂皮醛对肝癌细胞增殖具有抑制作用,并有较明显的量效和时效关系,小檗碱、大黄素和桂皮醛最佳配伍比例分别为44、23、46μmol/L;与对照组比较,复方和组分均能显著上调人肝癌SMMC-7721及HepG2细胞FOXO3a mRNA表达,PI3K mRNA表达也呈上调趋势,SMMC-7721细胞AKT mRNA表达显著下调,但组分使HepG2细胞AKT mRNA表达显著上调;复方和组分均可抑制PI3K p110、AKT及p-AKT蛋白表达,显著促进FOXO3a蛋白表达,对p-FOXO3a蛋白表达有抑制趋势。结论复方和组分均能抑制SMMC-7721、HepG2细胞增殖,其抗肝癌作用可能与PI3K/AKT的抑制和FOXO3a的激活有关。     

大鼠、小鼠辨证的思路与方法

辨证论治是中医学的特色和优势,为开展辨证论治的研究与发展,我国业已发展出百余种证侯动物模型,起到了积极的作用。本文在扼要回顾存在的问题和研究进展后,以气虚证为例,介绍了大鼠和小鼠辨证的思路与方法：（1）人类与大鼠、小鼠气虚证候的比较。研究表明,大鼠、小鼠的气虚表现与人类十分近似,是可以模拟人类气虚辨证的方法和思路,给大鼠、小鼠辨证的。（2）大鼠、小鼠气虚的计量化辨证。标准化和计量化辨证涉及4个基本问题,即如何计量化采集四诊指标、如何计量化辨证、如何确定辨证的标准和阈值,以及如何判断证候及其改善的程度。为此,我们借鉴药理行为学检测技术,比较了悬尾不动、抖笼、旷场、抓力等方法,最终确定旷场和抓力作为气虚证的计量化四诊指标,建立气虚程度/指数计算公式：气虚程度/指数=各动物抓力实测值/正常组均数×0.5＋各动物水平移动实测值/正常组均数×0.3＋各动物直立次数/正常组均数×0.2,以及气虚辨证的入选标准和阈值。通过大量、重复的实验检测与应用,证明以上方法和辨证标准是可行的,而且初步证明气虚证在神经-内分泌-免疫网络有其广泛的基因表达与剪接改变的基础。目前已初步实现大鼠、小鼠常见虚证标准化、计量化的四诊检测和辨证,该方法和技术可以动态跟踪疾病动物证候的演变,评价辨证论治疗效,还可以广泛用于病-证结合的动物实验研究,辨证论治治疗方案的实验优化和评价,中药、中药有效成分和方剂药性的判断等,适用于中医基础、药理、诊断、临床等各中医药学科的研发工作。     

同病异证荷瘤小鼠垂体G蛋白信号通路与激素表达的特征

目的 分析同病异证荷瘤小鼠垂体G蛋白信号通路及功能激素基因表达的特征.方法 采用小鼠计量化四诊和辨证方法、及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,观察正常小鼠、早期邪毒壅盛证和气虚证荷瘤小鼠垂体G蛋白信号通路及功能激素相关基因表达特征.结果 邪毒证和气虚证小鼠垂体G蛋白信号通路中的PP...     

神经肽在不同证候H22肝癌小鼠肾上腺组织的表达特征

[目的]揭示神经肽在不同证候肝癌小鼠肾上腺组织的基因表达特征。[方法]采用实验小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1．0 ST Array等技术,检测H22肝癌小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候肾上腺基因表达的差异,重点关注40个确切的神经肽基因在证候间的表达。[结果]在正常与肝癌小鼠肾上腺中,40个神经肽基因表达呈现3种情形：①生长激素（GH）、催乳素（PRL）、生长介素（SM）,神经肽Y（NPY）、缩胆囊肽（CCK）,阿黑皮素原（POMC）、脑啡肽（ENK）等为高表达基因;②垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）、卵泡刺激素（FSH）、促黄体生成激素（LH）、促甲状腺激素（TSH）、生长抑素（SS）、生长激素释放激素（GHRH）、神经降压肽（NT）、胰高血糖素样肽（GLP）、胰多肽（PP）、中间叶促皮质样肽（CLIP）、催产素（OT）、肾上腺髓质素（ADM）、P物质（SP）、K物质（SK）、8睡眠诱导肽（DSIP）、甘丙肽（Gal）、血管紧张素Ⅱ（AT-Ⅱ）和血管紧张素原（ATG）等为低表达量基因;③促性腺激素释放激素（GnRH）、胎盘生乳素（PL）、促甲状腺释放激素（TRH）、促皮质激素释放激素（CRH）、血管活性肽（VIP）、胃泌素释放肽（GRP）、神经肽K（NPK）、强啡肽（DYN）、血管加压素（AVP）、降钙素基因相关肽（CGRP）、胰岛淀粉样多肽（IAPP）、尾加压素Ⅱ（UⅡ）、内皮素（ET）、脑钠素（BNP）和心钠素（ANP）等神经肽基因不表达。就证候而言,与正常组比较,总体趋势为下调的基因多,上调的基因少,其中,邪毒壅盛证的LH、ET上调,气虚证中GH和POMC下调,阳气虚证和气阴阳虚证ATG和Gal上调;而FSH在各虚证中均下调,PACAP、CCK、NT基因在各个证候中均显著下调近10倍。[结论]神经肽基因在小?     

不同温补肾阳中药主要组分对小鼠肾上腺皮质瘤细胞增殖及皮质酮分泌的影响

目的:研究温补肾阳中药主要组分对小鼠肾上腺皮质瘤细胞增殖及皮质酮分泌的影响。方法:以Y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞为实验对象,分别采用0.2~640μmol/L淫羊藿苷、仙茅苷、金丝桃苷、松果菊苷、松脂醇二葡萄糖苷、补骨脂素和耐斯糖干预Y1细胞24~72 h;并以0.1%DMSO为对照组,佛司可林为诱导剂组;通过MTT法检测细胞增殖、q PCR检测细胞皮质酮合成酶基因表达、ELISA检测细胞上清液皮质酮水平。结果:Y1细胞铺板0~72 h内,对照组细胞增殖明显,80~640μmol/L淫羊藿苷治疗72 h显著抑制Y1细胞增殖,且呈现量效关系(P0.05);640μmol/L松果菊苷治疗24 h、48 h和72 h均显著抑制Y1细胞增殖(P0.05);10~80μmol/L补骨脂素治疗48 h显著促进Y1细胞增殖(P0.05);大于320μmol/L补骨脂素治疗72 h显著抑制Y1细胞增殖(P0.05);然而,仙茅苷、金丝桃苷、松脂醇二葡萄糖苷、耐斯糖对Y1细胞增殖无明显影响。基础状态下,与对照组比较,仅10μmol/L补骨脂素显著增强Cyp11b1基因表达(P0.05);佛司可林显著促进各组Star、Cyp11a1和Cyp11b1基因表达及皮质酮分泌(P0.05)。结论:淫羊藿苷、松果菊苷和补骨脂素对Y1细胞增殖抑制作用与其浓度和作用时间有关,本研究中采用的温补肾阳中药主要组分对Y1细胞皮质酮合成与分泌作用弱。     

肿瘤对小鼠肾上腺皮质细胞胆固醇稳态分子表达的影响

目的：探讨肝癌状态下肿瘤大小对肾上腺皮质细胞内胆固醇稳态分子表达的影响。方法：在220只KM小鼠右腋下接种H22肝癌腹水细胞,复制肝癌荷瘤小鼠模型,在接种第11天依据肿瘤体积排序,筛选瘤体大组和瘤体小组各18至、并设立18只正常小鼠为对照组。采用生化方法检测血脂含量;应用实时荧光定量PCR检测各组小鼠肾上腺组织Srb1、Ldlr、Npc1、Npc2、Stard3、Hmgcr、Lipe、Acat1、Abca1、Abcg1、Srebp-1c、Lxrα、Lxrβ、Rxrα、Apoa1、Apoe基因mRNA表达,并以Gapdh和β-actin两个基因作内参照;应用Western blot方法检测SRB1和ApoA1蛋白表达。结果：瘤体大组小鼠肿瘤质量明显大于瘤体小组（P＜0.05）;与正常组比较,两组肝癌小鼠血浆HDL-C显著下降（P＜0.05）;瘤体大组肝癌小鼠,肾上腺皮质细胞胆固醇摄取相关分子Srb1、Ldlr 、Apoa1基因表达显著升高（P＜0.05）,且SRB1蛋白表达显著升高（P＜0.05）、而ApoA1蛋白表达在肿瘤大组明显高于肿瘤小组（P＜0.05）;胆固醇酯化及其分解酶Acat1与Lipe基因表达在瘤体大组显著低于肿瘤小组（P＜0.05）;胆固醇逆向流出胞外的Abca1和Abcg1基因表达在瘤体大组也显著下降（P＜0.05）;而调控细胞胆固醇稳态的核受体Srebp-1c、Lxrα与Rxrα基因表达无明显变化,但肿瘤小组Srebp-1c、Lxrβ与Rxrα基因表达显著升高（P＜0.05）。内质网合成胆固醇的酶Hmgcr与载脂蛋白Apoe在各组间均无显著差异。结论：在肝癌状态下,小鼠为适应肿瘤慢性反复的应激,肾上腺皮质细胞能有效利用胆固醇合成皮质激素。     

大鼠/小鼠证候及辨证论治方法学的探索与发展

从大鼠/小鼠四诊和辨证方法的提出与创建,大鼠/小鼠计量化辨证方法的建立,荷瘤小鼠证候发生和演变的揭示,大鼠/小鼠异病同证、同病异证的研究,荷瘤小鼠个体化辨证论治及计量化疗效评价,以及不同证候荷瘤小鼠神经—内分泌—免疫网络基因转录与剪接的特征等方面,总结项目组长期以来所提出的系列假说及开展的大量研发工作,对所解决的学术问题,以及该领域存在问题、前沿和发展趋势做了评述。     

任务驱动教学法在大学生“科创中阶训练”课程中的应用

在上海新型冠状病毒肺炎严重时期,我校全部课程转为在线授课。据此,我们在中医学九年制屠呦呦班大二学生中尝试采用任务驱动教学法开展“科创中阶训练”课程的在线教学,即教师提出问题(任务)——学生完成任务——师生交流讨论——教师总结的教学形式,取得了较好的效果。调查问卷显示,86.67%的学生认可这种教学形式,66.67%的学生觉得教学内容和进度安排合理;几乎所有的学生认为该课程对激发科研兴趣、形成科研思维、提升科研相关能力、形成创新和开拓精神、促进团队协作等方面具有较大帮助。针对部分学生反映课程安排比较紧、自主探索学习时间偏长的问题,后期将进行相应的优化和改进。     

《中医学综合实验》PBL教学中文献研读路径的探索和评价

目的　针对中医学综合实验课程开展以问题为基础的学习（problem-based learning,PBL）过程中,学生自主收集的文献缺少代表性问题,尝试探索文献研读路径。方法　以本校2009级七年制医学本科生41人为研究对象,随机分为A、B两个PBL班,A班20人,B班21人。在3个PBL教学单元中,A、B两班并行开课,教师交错提供或不提供引导性参考文献。课程结束后,分别进行学生和教师评价。采用SPSS 19.0进行数据分析,组间比较行t检验。结果　学生评价结果显示：A班75.0％（15/20）、B班80.9％（17/21）的学生对该教学措施给出良好评价。两班均有80.0％以上的学生认为教师所提供的文献具有代表性、引导性;两班均有60.0％以上学生认为该教学措施可提高课堂及课后学习效率。教师评价结果显示：在第二、三教学单元,A班与B班学生汇报用PPT中引用的参考文献均数差异无统计学意义（P >0.05）;但是,在教师提供引导性文献后,学生汇报用PPT引用文献数量确实存在上升趋势。A、B两班学生在课堂上的讨论均集中和切题,基本达到教学目标。结论　中医学综合实验PBL教学中,由教师提供少量引导性文献是有积极意义的;但今后需进一步完善教学设计,在引导性文献的提供方式、数量、质量、甚至内在关联性上进一步优化。