中药辨证论治联合介入及索拉非尼对H22肝癌荷瘤小鼠疗效的实验研究

目的:比较与评价H22肝癌小鼠单纯西医及中西医联合治疗方案的疗效。方法:采用H22腋下实体瘤昆明种雄性小鼠,应用小鼠标准化、计量化辨证方法,观察复合化疗制剂肿瘤局部注射联合索拉非尼口服、单纯西医治疗方案,及其西医治疗方案联合中药辨证论治方案对小鼠带瘤生存时间、抑瘤率和证候的疗效。结果:3种治疗方案均有一定的抑瘤作用,而中西医结合辨证论治方案较单纯西医方案在小鼠带瘤生存时间、对气血阴阳证候的影响,以及胸腺和脾脏重量等方面,具有一定的优势。结论:中西医结合辨证论治原发性肝癌的治疗方案较单纯西医治疗方案具有一定的优势。     

阳气虚和气阴阳虚证荷瘤小鼠肾上腺基因表达的差异性

目的：揭示H22荷瘤小鼠阳气虚证和气阴阳虚证肾上腺基因表达的特征。方法：采用小鼠标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠中期阳气虚证及中晚期气阴阳虚证肾上腺基因表达的差异。结果：①筛选阳气虚证独特上调基因52条、独特下调基因11条：气阴阳虚证独特上调和下调基因分别为23条和4条。②阳气虚证肾上腺独特上调的基因涉及到蛋白水解类,如Klkl家族、Ctrc、Ctrbl、Renl、Ela3、Cpal、Prss2、Cpbl;脂类代谢基因,如Clps、Pnlip、Pnliprpl、Cel：精子发生类基因,如Tnp2、Tnpl、Crispl、Prml、Prm2、Smcp等：激素相关蛋白,如Pip、Abpg等。阳气虚证独特下调的基因涉及脂代谢类,如scdl、Fasn,Acaca、Acss2、Pnpla3。③气阴阳虚证独特上调基因,包括参与炎症应答类基因,如S100a8、S100a9、Alox5ap、Orml、Kngl、Mpo：参与血凝聚与正调控细胞增殖基因,如Fga、Fgb、Fgg、Prtn3、Fgll等;参与离子运输,如Lcn2、Hpxn、Ltf等。气阴阳虚证独特下调基因仅4条。结论：H22荷瘤小鼠阳气虚证和气阴阳虚证肾上腺存在大量的基因表达改变,构成了这两个证候内在的特征。     

H22荷瘤小鼠肿瘤发生后睾丸表达改变显著的基因

目的:探讨H22荷瘤小鼠肿瘤发生后睾丸基因表达谱改变的特征。方法:采用荷瘤小鼠标准化四诊及辨证方法,以及Gene Chip Mouse Exon1.0 STArray等技术,检测H22荷瘤小鼠睾丸组织早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证3个阶段4个证候睾丸基因表达谱的差异,重点关注肿瘤发生后一致上调或下调明显且表达量大的基因。结果:肿瘤发生后三个阶段一致上调的基因5个;一致下调的基因12个,其中7个与性激素和生殖有关;早期上调、中期和中晚期下调的基因1个;早期和中期上调、中晚期下调的基因3个。在这些基因中,Saa3在晚期气阴阳虚证表达上调了近60倍,Abpg、Pip、Car6在早期邪毒壅盛证表达上调了40~80倍,值得关注。结论:肿瘤发生后荷瘤小鼠睾丸基因表达的改变以下调为主,性激素合成与生殖受到影响;一些表达显著改变的基因值得进一步研究。     

早期气虚证H_(22)荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征

目的:揭示H22荷瘤小鼠早期气虚证肿瘤组织基因表达的特征。方法:利用实验中获得的外显子芯片数据分析H22荷瘤小鼠早期气虚证与邪毒壅盛、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证等3个证候肿瘤组织基因表达的差异。结果:与其它三种证候相比,在早期气虚证小鼠肿瘤组织中,1上调表达的基因有8个,其中包括H2-Eb2和Sla等4个TCR或BCR有关的基因,和P2ry1、Cobra1等4个其他功能类的基因。2下调表达的基因有18个,包括MMP8/9/10等3个MMPs家族基因,S100a8、S100a9等2个S100家族基因,Lcn2、Clec4d等5个细胞因子和粘附分子类基因,以及Slc6a9、Ddit4等其他功能类的基因8个。结论:早期气虚证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量差异性表达的基因,上调表达的数量少,下调表达的数量多,可能是该证候与其他证候区别的内在特征。     

常见证候荷瘤小鼠神经内分泌免疫组织基因转录的总体特征

目的揭示常见证候荷瘤小鼠神经-内分泌-免疫组织基因转录的总体特征。方法采用小鼠标准化四诊及辨证方法,及Gene Chip Mouse Exon1．0ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛（邪毒）和气虚、中期阳气虚、中晚期气阴阳虚等4个常见证候下丘脑、垂体、肾上腺、睾丸、脾脏、胸腺、肿瘤RNA的转录与剪接。结果正常昆明种雄性小鼠下丘脑、垂体、肾上腺RNA电泳的28S峰低于18S,而睾丸、脾脏、胸腺、肿瘤相反。肿瘤发生的早期,下丘脑、垂体、肾上腺基因表达模式发生显著改变,邪毒尤甚,出现了失代偿。下丘脑28SRNA迅速抬升并持续,气虚强于邪毒。垂体RNA总量降低,28S陡降,邪毒尤甚。肾上腺RNA电泳特征类似垂体,气虚与邪毒相近,中晚期气阴阳虚尤甚。睾丸变化不明显。随着病情发展,脾脏重量持续增加,而胸腺相反,重量持续下降,蛋白合成和糖代谢下降。肿瘤组织蛋白合成与糖代谢,邪毒大于气虚。以上7个组织与正常对照组相比,有9127个基因表达发生差异、51126个外显子剪接发生差异。结论神经-内分泌-免疫网络组织基因转录的差异是荷瘤小鼠不同证候内在重要的物质基础。     

荷瘤小鼠常见证候在神经-内分泌-免疫网络组织基因转录的特征

目的:揭示邪毒壅盛证、气虚证、阳气虚证、气阴阳虚证等4个同病异证荷瘤小鼠在神经-内分泌-免疫网络组织差异转录基因的总体特征。方法:对2006和2009年2批实验所检测以上4个证候及正常对照小鼠下丘脑、垂体、肾上腺、睾丸、胸腺、脾脏等60张芯片,近100万个核心基因进行分析,观察其一致性上调或下调的基因数与量的特征。结果:肿瘤发生后脾脏、胸腺、睾丸等组织基因一致性差异表达的数量大,其次是垂体和肾上腺,与疾病的关系密切;早期气虚证荷瘤小鼠突出表现为下丘脑基因表达趋于活跃;而同期的邪毒壅盛证荷瘤小鼠则突出表现为肾上腺基因表达趋于抑制,这可能与该证候荷瘤小鼠预后差有关。结论:荷瘤小鼠同病异证在神经-内分泌-免疫网络组织转录组方面有其特征性的物质基础。     

2型糖尿病大鼠胰岛素受体底物-2基因表达变化及中药的干预作用

目的:观察2型糖尿病大鼠血糖、血清胰岛素浓度和胰岛素受体底物-2(insulin receptor substrate 2,IRS-2)基因表达的变化及复方黄连降糖片对其变化的影响。方法:以小剂量链脲佐菌素(28mg/kg)腹腔注射合并高脂饮食诱导2型糖尿病大鼠模型,给予不同剂量复方黄连降糖片治疗8周。处死后分别测定其血糖、血清胰岛素浓度,肝脏、骨骼肌和脂肪组织的IRS-2的mRNA及蛋白表达。结果:2型糖尿病大鼠的血糖、血清胰岛素升高,各组织IRS-2的mRNA及蛋白表达下降;复方黄连降糖片能降低模型大鼠的血糖和血清胰岛素,并能显著升高各组织IRS-2的mRNA及蛋白表达。结论:复方黄连降糖片治疗2型糖尿病可能与其提高外周组织IRS-2的基因表达从而改善胰岛素的信号传导有关。     

常见胃溃疡模型小鼠胃组织病理变化及差异

目的观察常见胃溃疡模型小鼠胃的组织病理变化,评价和比较各模型.方法以昆明小鼠为实验对象,选取水浸拘束、乙酸、磷酸组胺、消炎痛、利血平、乙醇等6种方法,同步制作胃溃疡模型,并设置正常、禁食、假手术等对照组.在造模当天(第1天)及第8天取胃组织作病理组织学观察.结果禁食、水浸拘束、假手术等造模当日,小鼠胃出现明显的病理变化,第8天基本消失,持续时间短;消炎痛、利血平、乙醇造模当日,小鼠胃出现明显的病理变化,至第8天其病理改变仍未完全消失;磷酸组胺病变程度轻且易于恢复;乙酸造模对动物损伤重,易致死亡.以上病理变化,大多为黏膜局部或弥漫性炎症、水肿、出血,或黏膜萎缩、坏死和脱落,属急性胃炎或部分急性胃溃疡性质.结论水浸拘束、消炎痛、利血平、乙醇等造模成模率高,假手术、禁食次之,而磷酸组胺和乙酸造模似不宜作为小鼠常规胃溃疡模型.     

不同证候小鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴基因表达的特征

目的：观察不同证候小鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴（HPTA）相关主要已知基因表达的特征。方法：采用小鼠计量化四诊和辨证方法、及GeneChip Mouse Exon 1.0 STArray等技术,观察正常偏气虚证小鼠、早期邪毒壅盛证和早期气虚证荷瘤小鼠HPTA相关基因表达差异。结果：（1）正常小鼠气虚证者,甲状腺机能减退,Atp1a1、Atp1a2、Atp1a3、Atp1b1、Atp1b2、Pax8、Tg、Tpo、NIS等与甲状腺素合成有关基因的表达水平一致下降;而垂体、下丘脑处于积极的代偿之中,TRH、TSH等激素表达增加。（2）肿瘤发生后的早期,荷瘤小鼠亦出现甲状腺机能的减退,垂体、下丘脑亦处于积极的代偿之中,TRH、TSH等激素表达增加。但是,该阶段邪毒壅盛证小鼠,垂体已出现失代偿的征兆,TSHb的表达量已显著低于同期的气虚证以及正常气虚小鼠。结论：甲状腺机能减退可能是气虚证发生的重要基础,而非下丘脑和垂体。荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证垂体继发的失代偿表现,可能与该证候荷瘤小鼠带瘤生存期短、预后差有关。     

复方黄连降糖片对2型糖尿病模型大鼠肝脏低密度脂蛋白受体基因表达的影响

目的:探讨复方黄连降糖片治疗2型糖尿病高脂血症的作用机制。方法:对链脲佐菌素注射加高脂饮食诱导的2型糖尿病模型大鼠,给予复方黄连降糖片治疗,共8周。酶法测定血脂四项的浓度,RT-PCR法测定大鼠肝脏LDLRmRNA的表达及Western blot法检测肝脏LDLR蛋白的表达。结果:治疗8周时,复方黄连降糖片治疗组糖尿病大鼠的血清TC、TG和LDL-C浓度明显下降,肝脏LDLRmRNA水平比未治疗组有所升高,其蛋白表达明显高于未治疗组(中剂量组P<0.01,大剂量组P<0.05)。结论:复方黄连降糖片可增强2型糖尿病大鼠肝脏LDLR的基因表达,其防治糖尿病高脂血症的作用可能与增加LDLR的基因表达有关。