大鼠、小鼠常见证候计量化辨证方法的建立及其评价

1材料与方法1·1四诊设备和方法1·1·1主要仪器设备MP200B型电子天平用于动物和饲料称重,数字WMY-01型温度计用于检测腋温,SQF-EA体视显微镜用于显微爪、尾、舌的显微拍摄,口颌定位器用于舌的显微拍摄,3200K(色温)500W摄像专用光源显微和普通照明,NIKONCoolpix 4500数码相机显微和普通拍照,底部划有6·5cm×5·5cm方格的实验笼用于旷场检测,YLS-13A型大、小鼠抓力测定仪用于抓力检测,个人电脑用于图像和数据处理。1·1·2四诊计量化所观察的指标体重(g),摄食量(g),饮水量(ml),抓力(g),旷场水平跨格(跨格数)和垂直站立(前肢离地站…     

不同高脂饲料致高脂血症大鼠模型的比较及评价

目的:比较两种不同配方高脂饲料致高脂血症大鼠模型的异同点,并对其优劣进行初步评价。方法:根据喂饲高脂饲料配方不同,将大鼠分为高脂血症1组(B1),喂饲纯高脂饲料,以及高脂血症2组(C1),喂饲高脂加高蛋白饲料,造成高脂血症模型;6周后,检测体重、体长、Lee’s指数、空腹血糖(FBG)、2h血糖、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肝体比等指标。结果:1两种不同饲料喂养6周后大鼠的胆固醇均升高,即模型成功。2B1组大鼠胆固醇、Lee’s指数、空腹血糖、肝体比均高于C1组大鼠。结论:纯高脂饲料较之高脂加高蛋白饲料能在更短的时间内形成高脂血症,高脂同时摄入高蛋白初期有助脂肪代谢,但不能防止高脂血症的发生。     

糖尿病模型大鼠证候的特征及演变

目的:观察糖尿病(diabetes mellitus,DM)模型大鼠证候的发生与演变。方法:采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射,或结合高脂饲料喂养形成糖尿病模型,根据血糖诊断为隐性DM大鼠、2型DM大鼠、1型DM大鼠;同步检测体重、饮水、摄食、腋温、心率、爪、尾显微放大拍照及图像处理得到γ值、旷场水平跨格数和垂直站立数、抓力,求出正常对照组各指标均数,及各组的各动物实测值与正常对照组均数的比值,制定阴虚程度、阳气程度及胃热程度等计量辨证方法,对各组四诊进行比较。结果:1型DM大鼠成模后证候迅速发展为胃热、阴虚证候,并持续加剧、严重,早期见有阳气旺盛,以后逐渐发展至阳虚、气虚证,出现阴虚胃热兼气虚、阳虚证。2型DM成模后逐渐发展为胃热、阴虚证候,并持续加剧,程度轻于1型DM;成模早期有阳气旺盛倾向,以后逐渐向阳虚、气虚证过渡,但程度轻,不典型。隐性DM有轻度的胃热证候,且主要表现为饮水增加,其余证候不明显。结论:糖尿病大鼠存在特殊的证候、兼证,及其演变规律,其证候的严重程度是可以定量的,因而本研究对于糖尿病模型大鼠辨证论治治法的确定和评价奠定了基础。     

黄连-大黄-肉桂复方及其最佳组分配伍对肝癌小鼠肿瘤增殖及证候的影响

目的研究黄连-大黄-肉桂复方及其最佳组分配伍对肝癌小鼠肿瘤增殖及证候的影响。方法通过右腋下皮下注射人肝癌细胞建立移植瘤裸鼠肝癌模型,成模小鼠分为模型对照组(模型组)、黄连-大黄-肉桂复方组(复方组)、小檗碱-大黄素-桂皮醛组方组(组方组),各组给予相应的药物治疗,共2周。给药期间观察小鼠的状态,给药前后分别测定各组小鼠的瘤径并计算瘤体积,测定体质量、腋温、抓力、旷场水平移动格数及垂直站立次数、爪尾显微拍照,据此计算各组的阴盛衰度、血盛衰度、气盛衰度和阳盛衰度,以各四诊指标治疗后/治疗前的比值用于分析证候的变化。最后取瘤体称重,计算抑瘤率。结果①小鼠状态:实验过程中,各组小鼠状态尚可,活动较灵敏,大小便正常。②抑瘤作用:各组小鼠瘤体积随时间增大,其中模型组复方组组方组,瘤重结果与瘤体积一致。③证候变化:两用药组小鼠的气盛衰度均有所提升,组方组优于复方组;两用药组小鼠的血盛衰度均有所升高,复方组优于组方组;两用药组小鼠的阴盛衰度、阳盛衰度均变化不大。结论黄连-大黄-肉桂复方及其最佳组分配伍均能一定程度抑制肝癌小鼠肿瘤的增殖,且具有益气血的趋势。     

不同程度邪毒证H22荷瘤小鼠肾上腺皮质酮合成酶及其转录因子表达的差异

目的：探讨小鼠荷瘤状态下不同程度邪毒证肾上腺皮质酮合成与分泌的差异。方法：在220只昆明种小鼠右腋下接种H22肝癌腹水细胞,复制肝癌荷瘤小鼠模型,于接种肿瘤后第9天进行小鼠四诊检测,依据邪毒程度将各荷瘤小鼠排序,并排除气血阴阳虚证小鼠,筛选邪毒壅盛证组18只、邪毒微弱证组18只,并以18只正常小鼠为对照组。第11天处死各组小鼠,剥离肿瘤称瘤重,用ELISA方法检测血浆激素含量;应用实时荧光定量PCR检测各组小鼠肾上腺组织Cyp11b1、Cyp11a1、Star、Fdx1、Fdxr、Mc2r、Nr4a1、Nr5a1、Nr0b1、Gata6基因mRNA表达,并以Gapdh和β-actin两个基因作内参照;应用Western blot方法检测St AR和CYP11A1蛋白表达。结果：邪毒壅盛证小鼠肿瘤质量明显大于邪毒微弱证组（P〈0.05）;不同程度邪毒证肝癌小鼠血浆促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质酮（CORT）均高于正常组（P〈0.05）;皮质酮合成最后一步关键酶Cyp11b1、促肾上腺皮质激素受体（Mc2r）及铁氧还蛋白还原酶（Fdxr）基因表达在邪毒壅盛证组显著升高（P〈0.05）;转录抑制因子Nr0b1在邪毒壅盛证组明显低于邪毒微弱证组（P〈0.05）;转录因子Nr4a1、Nr5a1和Gata6基因表达在不同程度邪毒证肝癌小鼠均高于正常组（P〈0.05）;St AR蛋白表达在不同程度邪毒证肝癌小鼠均显著升高（P〈0.05）、且邪毒壅盛证组显著高于邪毒微弱证组（P〈0.05）。结论：小鼠肿瘤形成后,邪毒程度越重者,为适应机体慢性应激反应,其肾上腺皮质功能呈现失代偿性增加,导致垂体与肾上腺皮质激素储备功能减少,可能与邪毒壅盛证荷瘤小鼠带瘤生存期缩短有关,提示肿瘤早期治疗也需注意扶助正气。     

复方黄连降糖片与二甲双胍调节糖脂代谢的药效学对比研究

目的 比较中药复方黄连降糖片与二甲双胍调节糖脂代谢的药效学作用.方法 以小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射加高脂饮食诱导的2型糖尿病大鼠为模型,除正常组外,根据血糖分为模型组、复方黄连降糖片组和二甲双胍组,药物组分别给予干预治疗8周,治疗期间每周常规称量体重1次,8周时测定大鼠的空腹血糖(FBG)、糖负荷2 h血糖(PBG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),并观察大鼠的肝脏大体形态.结果 复方黄连降糖片对大鼠的体重、TG、PBG、HbAlc的调节作用优于二甲双胍;二甲双胍对FBG、TC、LDI,-C、HDL-C的作用好于复方黄连降糖片:对大鼠肝脏大体形态的影响两药基本一致.结论 复方黄连降糖片和二甲双胍均能有效改善糖尿病大鼠的糖脂代谢紊乱,但复方黄连降糖片对作为糖尿病长期控制标准的HbAlc及糖尿病最常出现的TC升高具有更好的调节作用,提示复方黄连降糖片对糖尿病的长期控制和调节脂代谢异常比二甲双胍更具有意义.     

糖尿病大鼠的同病异证与异病同证的研究

目的：观察不同糖尿病（Diabetes mellitus，DM）模型大鼠的同病异证与异病同证情况。方法：采用链脲佐茵素（STZ）腹腔注射，或结合高脂饲料喂养造模，根据血糖诊断为隐性DM大鼠、2型DM大鼠、1型DM大鼠；同步检测体重、饮水、摄食、腋温、心率、爪、尾显微放大拍照及图像处理得到r值、旷场水平跨格数和垂直站立数、抓力，求出正常对照组各指标均数及各组的实测值与正常对照组均数的比值，制定阴虚程度、气虚程度、阳虚程度及胃热程度等计量辨证方法，对各组四诊进行比较。结果：①糖尿病大鼠出现了典型的同病异证。例如1型糖尿病同一大鼠，在不同阶段其阴虚程度和阳虚程度相差较大；1型糖尿病不同大鼠，不同阶段和同一阶段的证候均相差较大；2型糖尿病大鼠也有类似现象。②糖尿病大鼠出现了典型的异病同证。例如1型、2型糖尿病大鼠在同一阶段可以见到阴虚、阳虚和气虚程度非常接近的现象；不同阶段的不同糖尿病大鼠也有相同的证候类型。结论：糖尿病大鼠存在典型的同病异证、异病同证，其证候及其严重程度是可以通过非创伤性四诊定量采集和辨证的，这样的定量辨证结果有助于糖尿病大鼠的辨证论治及其疗效评价。     

调脂降糖片对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的干预作用

目的观察调脂降糖片对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的干预作用。方法采用一次性腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)30mg/kg体重配合高脂饲料喂养建立2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型。用调脂降糖片干预治疗,以二甲双胍片作为阳性对照。8周后采用血糖钳技术检测大鼠葡萄糖输注率(GIR),测定大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、血清游离脂肪酸(FFAs)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),并计算高密度脂蛋白胆固醇/总胆固醇比值(HDL-C/ TC)、胰岛素敏感指数(ISI)。对大鼠的胰岛素敏感性和脂代谢情况进行评估。结果与模型对照组相比,调脂降糖片治疗后大鼠TC、TG、HDL-C/TC、FINS、FFAs显著下降,而ISI、GIR明显增加,其作用与二甲双胍片基本相似。结论调脂降糖片能够增加2型糖尿病大鼠胰岛素敏感性,并改善糖、脂代谢异常。