鼻咽拭子中鼻病毒三种检测方法比较分析

目的 比较三种检测方法(病毒分离培养鉴定法、核酸序列测定法和PCR-荧光探针法)检测鼻咽拭子标本中鼻病毒(HRV)的可靠性。方法 采用盲法、对比试验设计。根据纳入标准和排除标准入组220例鼻咽拭子标本,分别用病毒分离培养鉴定法、核酸序列测定法和PCR-荧光探针法进行盲法检测,以评价三种检测方法的临床应用性能。结果 本次试验入组的220例鼻咽拭子样本中,病毒分离培养鉴定法检测结果为阳性的样本20例,核酸序列测定法检测结果为阳性的样本32例,PCR-荧光探针法检测结果为阳性的样本35例。与病毒分离培养相比,PCR-荧光探针法检测阳性符合率为100.00%,阴性符合率为92.50%,总符合率为93.18%;PCR-荧光探针法与病毒分离培养鉴定法检测结果一致性一般(kappa=0.692),与核酸序列测定法检测结果一致性较好(kappa=0.947)。结论 PCR-荧光探针法检测鼻咽拭子标本中的HRV可靠、准确、安全、简便、稳定,具有较高的临床应用价值。     

养阴方对培养人脐静脉内皮细胞抗凝和纤溶功能的影响

目的：研究养阴方对培养人脐静脉内皮细胞抗凝和纤溶等功能的影响。方法：采用血清药理学方法观察养阴方对培养人脐静脉内皮细胞抗凝、 纤溶及肮自由基损伤的作用,并与丹参作比较。结果：养阴方具有显著增高6－酮－前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）含量;提高组织型纤溶酶原激活物（t－PA）的活性,抑制组织型纤溶酶原激活抑制物（PAI）活性;提高超氧化物歧化酶（SOD）活力及降低丙二醛（MDA）含量的作用。养阴方抗凝、纤溶及抗自由基损伤作用显著优于丹参。结论：养阴生津方药 抗栓溶栓的作用机制与活血化瘀类药不完全相同,其主要是通过细胞抗氧化和抑制脂质过氧化作用来保护细胞免受损伤;通过调节抗凝、纤溶作用达到化瘀功效。养阴生津药治疗血瘀证主要是通过增不行血、濡润脉道、消散瘀凝、滋养脏腑以调节血行等多种作用机制达到消除瘀血的目的。     

甲状腺结节细针穿刺标本中BRAFV600E突变的临床意义

目的探讨BRAFV600E突变率在甲状腺结节术前诊断中的意义及其可行性。方法选择2012-01-2013-01行细针穿刺术（FNA）的甲状腺结节患者337例,根据细胞学诊断分为Thy1、Thy2、Thy4和Thy5组,分别检测FNA标本的BRAFV600E突变。结果 Thy5组BRAFV600E突变率为22.2%;甲状腺结节的不同病理类型及BRAF突变率与桥本甲状腺炎（HT）无相关性（均P＞0.05）;与Thy2组比,Thy5组TSH水平较高[（2.83±2.11 vs 1.95±1.29）mU/L,t=2.251,P＜0.05]。结论检测甲状腺结节FNA标本的BRAFV600E突变简便、可行;对一部分因取材不满意标本可提供补充诊断;BRAF突变与HT可能无关。     

中风系列方对大鼠脑缺血再灌注损伤的研究

目的:探讨中风系列方活血汤、化痰汤、清热化痰汤、养阴汤、益气汤对脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法:制作SD大鼠脑缺血与再灌注损伤模型,随机分假手术对照组,脑缺血再灌注损伤组,活血汤、化痰汤、清热化痰汤、养阴汤及益气汤各治疗组,维脑路通对照治疗组.观察各组脑组织前列环素(PGI2)和血栓素B2(TXB2)含量,血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)活性及组织型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)活性.结果:益气汤及养阴汤能显著提高脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质6-酮-前列腺素F1α的含量;活血汤、清热化痰汤、养阴汤、益气汤能显著降低脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质TXB2的含量;活血汤、养阴汤、益气汤具有调节血浆t-PA与PAI活性的作用.结论:活血汤、清热化痰汤、养阴汤及益气汤具有抗凝和溶栓的作用,对脑缺血再灌注损伤具有保护作用.     

氧气湿化瓶细菌学调查

目的探讨氧气湿化瓶导致医院感染的途径和预防措施. 方法采集10个氧气湿化瓶使用前、中、后各部位样品进行细菌培养检查,同时对湿化水、室内空气和医护人员的手进行细菌培养检测,并采集患者痰液进行培养检查. 结果 10个氧气湿化瓶使用前各部位、室内空气和医护人员的手未检到患者感染细菌,患者使用后40%的氧气湿化瓶的内芯、内壁、出气口及管道检到与患者痰液培养结果相同的致病菌. 结论氧气湿化瓶易被患者污染,其内芯是导致医院感染的最危险因素,应对其各部位进行彻底消毒.     

杭州地区乙型肝炎病毒基因型分析

目的:建立多重荧光PCR技术检测乙肝病毒(HBV)基因型,并了解杭州地区乙型肝炎病毒感染者基因型分布特点。方法:首先优化TaqM an探针多重荧光PCR的反应体系,然后采用该法检测杭州地区150例慢性乙肝患者的HBV基因型,并用测序方法进行确认。结果:B基因型65例(43.3%),C基因型53例(35.3%),B+C混合型24例(16%),未分型8例(5.3%)。结论:杭州地区乙型肝炎病毒感染者基因型以B、C型为主,B、C混合型感染比例较其他地区高,TaqM an探针多重荧光PCR简单经济,可以应用于大规模HBV基因型研究。     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌小鼠肺部感染模型建立

目的 建立亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌小鼠肺部模型,为泛耐药鲍曼不动杆菌抗感染研究提供实验动物模型.方法 随机选取120只约4周大雄性BALB/C小鼠,平均分成3组:微量气管注射法组、超声雾化法组和滴鼻法组.每组小鼠用甲氨蝶呤化疗降低BALB/C小鼠的免疫力,然后将亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌分别用微量气管注射法、超声雾化法、滴鼻法感染免疫力低下和正常的BALB/C小鼠,检测微量气管注射法、超声雾化法、滴鼻法感染的小鼠感染率、死亡率、细菌清除率、肺部病理变化.结果 微量气管注射法、超声雾化法感染免疫力低下的BALB/C小鼠的肺部感染率均为100%(30/30),死亡率分别为100%(10/10),33%(3/10),2组小鼠肺部细菌感染12～24 h后支气管周及肺泡间质内见中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞为主的炎症细胞浸润,微量气管注射法感染的小鼠部分肺泡组织结构崩解,肺泡腔内可见脓肿形成及较多细菌集落,超声雾化法感染的小鼠24 h见肺部部分区域存在细胞变性,但支气管及肺泡组织结构基本正常,肺泡壁血管轻度扩张伴淤血,24～48 h后可见支气管和支气管周围变性,部分肺组织血管高度扩张,伴有水肿,48 h后炎症逐渐恢复.滴鼻法感染免疫力低下的BALB/C小鼠的肺部感染不明显,未见小鼠死亡(0/10),肺部无明显病理变化.结论 免疫力低下BALB/C小鼠可以通过微量气管注射法和超声雾化法建立亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌肺部感染模型,超声雾化法可以大批量同时操作,简单经济快速,实用性强.亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌难以感染免疫力正常小鼠.     

产ESBLs肺炎克雷伯菌的致病性及头孢他啶疗效分析

目的 探讨产ESBLs肺炎克雷伯菌不同感染途径的致病性差异及头孢他啶对产ESBLs肺炎克雷伯菌腹腔感染小鼠的保护作用.方法 分别采用滴鼻途径建立小鼠呼吸道感染模型和腹腔注射途径建立小鼠腹腔感染模型,将小鼠分成6组,检测产ESBLs肺炎克雷伯菌对小鼠的半数致死量.另将头孢他啶体外药敏试验敏感的产ESBLs肺炎克雷伯菌腹腔感染小鼠分成3组,采用不同治疗方法考察头孢他啶的体内治疗作用,同时与亚胺培南/西司他丁钠疗效做对比分析.结果 产ESBLs肺炎克雷伯菌经过滴鼻途径感染小鼠未见死亡,经腹腔感染途径的半数致死量为105;头孢他啶预防给药组小鼠的死亡率为10%,同时给药与感染4h后给药组小鼠的死亡率为30%,头孢他啶对产ESBLs肺炎克雷伯菌腹腔感染小鼠的保护作用与亚胺培南/西司他丁钠作用一致.结论 产ESBLs肺炎克雷伯菌经呼吸道感染途径的致病性比腹腔感染途径弱,头孢他啶体外药敏试验敏感的产ESBLs肺炎克雷伯菌感染可以采用头孢他啶治疗,但应尽早使用.     

不同液化处理及核酸共提取方法对痰样本中病毒核酸的提取效果比较

目的 比较不同痰液液化方法及不同核酸提取方法共提取痰液中病毒RNA和DNA的效果,并比较其优劣.方法 将痰液样本分为二硫苏糖醇(DTT)、氢氧化钠(NaOH)液化痰液组,以生理盐水为对照,分别使用TTIANamp Virus DNA/RNA Kit(方法1)、KBW酶法(方法2)、KBW通用法(方法3)和单一核酸提取试剂盒(方法4)提取核酸,微量核酸分析仪检测核酸纯度,多重定量PCR方法检测核酸的浓度.结果 核酸纯度测定结果:生理盐水组中方法2和方法3,DTT处理组中方法1和方法2,NaOH处理组中方法3所提DNA纯度略大于1.8;各组中采用方法1所提RNA纯度均明显超过2,方法4及NaOH处理组中方法3所提RNA纯度均低于1.8,其余纯度均在正常范围内.PCR浓度测定结果:腺病毒(DNA)Ct值:生理盐水组＜NaOH处理组(q=35.09,P＜0.05),生理盐水组和DTT处理组间差异无统计学意义(q=2.54,P＞0.05);提取方法1＜方法3(q=12.68,P＜0.05),方法1、方法2与方法4之间差异无统计学意义(q=0.84、1.69、2.53,P＞0.05);呼吸道合胞病毒(RNA)Ct值:生理盐水组＜DTT组＜NaOH组(F=152.76,P＜0.01);提取方法1＜方法2＜方法3(q=6.98、3.75,P＜0.05),方法2与方法4之间差异无统计学意义(q=1.28,P＞0.05).结论 痰液液化前处理会影响病毒RNA和DNA的共提取,TIANamp Virus DNMRNA Kit和KBW酶法对痰样本中病毒核酸共提取效果较好.     

荧光PCR技术在粪便幽门螺杆菌ureA基因检测中的应用

目的 评价荧光PCR技术检测粪便幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,HP）urea基因的价值.方法 采用荧光PCR技术检测50例消化内科住院患者的粪便样本,其中23例通过胃黏膜活检组织尿素酶及病理组织染色确诊为HP感染.同时进行HP培养和血清HP尿素酶抗体检测.四格表x2检验比较3种方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值.结果 荧光PCR技术检测粪便HP感染的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为1.00、0.96、96%和100%,而HP培养检测的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为0.78、1.00、100%和84%,其中敏感性和阴性预测值与荧光PCR法相比,差异具有统计学意义（X2=5.60和4.44,P值均〈0.05）.血清HP尿素酶抗体检测的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为0.96、0.74、76%和95%,其特异性和阳性预测值与荧光PCR法比较,差异具有统计学意义（X2=5.28和4.08,P值均〈0.05）.结论 粪便HPureA基因检测对诊断HP感染具有较高的临床价值.