双份HLA不全相合非血缘脐血移植成功治疗成人急性髓细胞白血病1例报告并文献复习

目的：探讨双份HLA不全相合非血缘脐血移植(UCBT)治疗成人急性髓细胞白血病的造血、免疫重建及植人状态。方法：l例急性单核细胞白血病，43岁，体重75kg，采用双份HLA不全相合非血缘脐血移植治疗急性髓细胞白血病患者1例。预处理方案由白消胺(BU)、环磷酰胺(CY)和抗胸腺细胞球蛋白(ATG)组成。应用环孢素A(CsA)和骁悉(MMF)预防移植物抗宿主病(GVHD)。结果：移植后19天造血重建，NK细胞和B细胞分别于术后30天和120天恢复正常，DNA短串联重复序列多态型(STR)和HLA差异分析显示移植后17天、30天、150天基因型表现为完全性双份供者的嵌合型，未发生GVHD。随访150天，血常规、骨髓象检查正常。结论：双份HLA配型不合的脐血用于成人脐血移植是可行的。     

29例原发纵隔大B细胞淋巴瘤临床特征及长期随访结果

本研究旨在探讨原发纵隔大B细胞淋巴瘤的临床特点、病理特征、治疗方法及预后因素。回顾性总结2000年1月至2013年11月我院收治的29例原发纵隔大B细胞淋巴瘤（PM LBCL）的临床资料并进行相关数据分析。结果表明,29例病理确诊为PMLBCL患者,中位年龄32岁,临床表现以纵隔巨块（72.4%）、上腔静脉综合征（51.7%）、呼吸困难（62.1%）、浆膜腔积液（48.3%）多见,其中62.1%存在结外侵犯,62.1%合并胸腔外受累。按照Ann-Arbor分期,16例（55.1%）为Ⅰ-Ⅱ期、13例（44.9%）为Ⅲ-Ⅳ期,12例（41.4%）合并B组症状。在本组29例患者中2例失访,中位随访29月,余27例患者中17例完全缓解,5例部分缓解,1例复发,4例死亡,死亡原因均为疾病进展,中位生存时间为29月,5年总生存率（OS）达85.2%,其中RCHOEP方案化疗组5年总生存率为94.4%,CHOEP方案化疗组5年总生存率为75%。8例行自体造血干细胞移植及1例行异基因造血干细胞移植患者随访至今均为持续CR。单因素分析显示,白蛋白和LDH水平升高,超过2倍正常上限,初治疗效、IPI评分具有预后参考意义,但多因素分析显示均非独立预后因素。结论：原发纵隔大B细胞淋巴瘤具有独特的临床特征,RCHOEP化疗方案初步效果肯定,值得进一步扩大病例探索。     

骨密质碎片法分离培养小鼠间充质干细胞及其生物学特性鉴定

目的:建立一种从小鼠骨密质中分离培养间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)的高效方法,并证实骨密质来源MSCs具有成骨、成脂肪和成软骨的多向分化能力.方法:采取骨片法从C57BL/6小鼠骨密质中分离和纯化MSCs,荧光倒置显微镜下直接观察不同生长时期MSCs形态学特征;流式细胞术(Flow cytometry,FCM)对其进行免疫表型鉴定;取第5代MSCs进行成骨、成脂肪和成软骨定向诱导并作组织化学染色鉴定,RT-PCR方法检测定向诱导后特异性基因表达:骨特异性的骨钙素(Osteocalcin,OCN)和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)基因,脂肪特异性的脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LP)和脂肪酶(Adipsin)基因,软骨特异性的Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)和蛋白聚糖(Aggrecan)基因.结果:接种骨密质碎片约24小时后即可见短梭状细胞从骨碎片向周围爬出,呈贴壁生长,经3次传代后即可获得细胞形态均一、贴壁能力强、易于消化的梭形MSCs.第5代C57BL/6小鼠MSCs阳性表达CD44 (99.81％)、CD29(99.77％)、Sca-1 (99.76％)和CD34(94.51％),阴性表达CD45(0.86％)和CD117(0.17％).第5代MSCs经诱导后可成功的分化为骨、脂肪和软骨细胞,相应茜素红、油红0和阿利辛蓝染色成阳性,并分别表达骨特异性骨钙素(Osteocalcin,OCN)和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)基因,脂肪特异性脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LP)和脂肪酶(Adipsin)基因,软骨特异性Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)和蛋白聚糖(Aggrecan)基因.结论:经骨密质碎片法培养可以在较短时间内分离出更高纯度的MSCs,该方法操作简单、经济,稳定性好,分离效率高,可重复性强.培养出的MSCs符合公认的标准(具有塑料粘附、特定的免疫表型和多向分化潜能).     

趋化因子受体CCR5与移植物抗宿主病

趋化因子受体CCR5(CC chemokine receptor 5)是G蛋白偶联受体超家族的一员,主要表达在机体多种免疫细胞表面。CCR5依赖与其特异性配体的结合而发挥生物学作用,在细胞的生长、活化、分化、粘附及定向迁移等方面起着重要作用。CCR5是人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type-1,HIV-1)入侵人体的重要辅助受体之一,参与病毒与T细胞结合的过程。靶向CCR5的治疗不仅具有抗病毒作用,还具有免疫调节作用。研究发现,CCR5不仅在AIDS、自身免疫病、动脉粥样硬化等疾病的致病机制中起作用,在异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,a GVHD)发生发展过程中,同样扮演着重要的角色。大量动物实验证实,CCR5及其配体介导了效应T细胞向GVHD靶器官的迁移与募集。因此,本文就CCR5的结构和功能、内化途径、信号转导通路及其与allo-HSCT后a GVHD的关系作一综述。     

急性白血病的治疗进展

在过去的几十年中,急性白血病的治疗取得了较大的进展,急性髓性白血病(AML)的完全缓解率和长期生存率均有了较大的提高,尤其是由于诱导分化剂维甲酸、凋亡诱导剂砷剂以及缓解后蒽环类化疗药物的应用,使急性早幼粒细胞白血病(APL)的缓解率和长期生存率均有很大程度的提高。     

造血干细胞移植供者TNF-α基因多态性在GVHD中的频率分析

探讨供肿瘤坏死因子α（TNF－α）基因多态性在重度急性移植物抗宿主病（aGVHD)和广泛型慢性移植物抗宿主病（cGVHD）中的作用。本研究应用变性高效液相色谱结合DNA测序检测了TNF－α－308和TNF－α－238基因在重度aGVHD和广泛型cGVHD的分布。结果表明，21例Ⅲ度Ⅳ度aGVHD病人中有8例呈现TNF－α－308（G／A）阳性，而28例0度／I度aGVHD病人中仅1例呈现TNF－α－308（G／A）阳性，提示TNF－α－308（G／A）在Ⅲ度／Ⅳ度aGVHD中的频率明显高于0度／I度aGVHD的病人（P＜0．01）。在23例广泛性cGVHD病人中有7例呈现TNF－α－308（G／A）阳性，而17例未发生cGVHD的病人中仅1例呈现TNF－α－308（G／A）阳性，提示TNF－α－208（G／A）在广泛性cGVHD中的频率高于未发生cGVHD的病人（P＜0．05）。在21例Ⅲ度／Ⅳ度aGVHD和28例0度／I度aGVHD及23例广泛性cGVHD及17例未发生cGVHD的病人中均有1例呈现NTF－α－238（G／A）阳性，提示TNF－α－238（G／A）在上述各组病人间的频率无明显差异。结论：TNF－α－308（G／A）阳性与Ⅲ度／Ⅳ度aGVHD和广泛型cGVHD的发生密切相关。     

砷剂治疗非急性早幼粒细胞白血病恶性血液病的临床观察

目的观察亚砷酸治疗非急性早幼粒细胞白血病(APL)恶性血液病的疗效和毒副反应.方法分析亚砷酸在治疗5例非霍奇金淋巴瘤(NHL)、1例多发性骨髓瘤(MM)、3例骨髓异常增生综合征(MDS)中的疗效和毒副反应.结果 NHL患者CR 2例,PR 1例;MM患者无效1例; MDS患者1例达到细胞遗传学缓解.毒副反应有骨髓抑制、发热、皮疹、胸腔积液、肾功能损害等.结论可以看到亚砷酸治疗非APL恶性血液病有效的趋势.     

活化性及抑制性免疫球蛋白样受体对非去T细胞异基因造血干细胞移植预后的影响

本研究探讨异源反应性NK细胞免疫球蛋白样受体（KIR）与HLA配体的关系对非去T细胞异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）预后的影响。应用序列特异性引物分型技术检测供受者的K／R及HM基因型,并对我院67例接受非去T细胞allo—HSCT的病例资料进行回顾性分析。根据供者KIR及受者H厶4关系及供者是否表达活化性KIR进行分组,通过单因素及多因素分析确定抑制性及活化性KIR基因对移植预后的影响。结果表明,抑制性KIR／配体相合组无事件生存率（EFS）略高于不合组,其中KIR2DL1／C2相合组3年EFS显著高于C=2不相合组（69．2％vs44．8％,P=0．043）,而抑制性K／R／配体相合组的复发率、急性GVHD发生率及移植相关死亡率（TRM）与不合组无显著差异。供者表达活化性KIR2DS2的患者,其3年EFS更高（81．3％vs52．6％,P=0．05）,且复发率显著减低（7．7％vs34．2％,P=0．05）。而受者不表达c2组配体时,供者表达活化性KIR2DSl的患者。即KIR2DS1阳性／HLA—C2阴性组,其3年EFS明显下降（P=0．028）,急性GVHD发生率明显上升（P=0．028）。多因素分析表明,疾病进展期、活化受体数目增多、供者不表达KIR2DS2表型是生存率下降的独立危险因素（HR=3．34、2．19、3．18;95％CI=1．43—7．82、0．99—4．83、0．93一11;P=0．005,0．053,0．066）。此外,疾病进展期、供者不表达KIR2DS2表型也是高复发率的独立危险因素（HR=6．72,9．43;95％CI为1．36—33．16,1．03—8．33;P=0．019,0．047）。而供者KIR2DSl阳性／受者HLA-C2阴性是移植相关死亡的唯一危险因素（HR=3．27,95％CI1．78—9．06,P=0．023）。结论：在非去T细胞allo-HSCT中,抑制性K／R／HLA不合对移植后患者生存率、疾病复发率及TRM的影响较小,但可能干扰移植早期抗病毒免疫。抑制性KIR2DL1／HLAC2不合组EFS显著低于相合组,这可能与该组患者TRM上升、急性GVHD发生率升高有关。而活化性K／R对患者EFS、复发及急性GVHD发生率都有影响。供者不表达KIR2DS2预示着生存期延长,这与复发率低有关,而供者KIR2DS1阳性／受者HLA-C2阴性组,预示着生存期缩短及急性GVHD发生率增高,TRM增高。因此,在非去Tallo—HSCT中,分析供受者KIR及其配体可以为供者优化选择提供分子生物学依据。     

热疗促进HSP70表达对免疫效应细胞杀伤肿瘤的影响

目的: 探讨热疗通过促进乳腺癌药物敏感细胞株与多药耐药细胞株表达热休克蛋白(HSP)70,提高免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性.为开展基于热疗的细胞免疫治疗提供实验依据.方法: 采用IFNγ、CD3单抗、IL-1和IL-2等细胞因子诱导并扩增免疫效应细胞.分别给予乳腺癌药物敏感株MCF7和耐受株MCF7/ADR非致死温度热冲击42 ℃ 1 h,继续培养4 h,24 h,48 h后收获细胞,用流式细胞术检测靶细胞上HSP70的表达.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定靶细胞增殖活性以及免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性.结果: HSP70在两种靶细胞上的表达有差异,加热前MCF7/ADR细胞HSP70表达明显高于MCF7,加热后4 h,HSP70在MCF7/ADR表达提高了6倍,在MCF7表达提高了22倍,超过了耐药株.药物敏感株MCF7增殖的热抑制率低于耐药株MCF7/ADR.热冲击前免疫效应细胞对MCF7细胞的杀伤活性低于MCF7/ADR细胞.热冲击后免疫效应细胞对MCF7的杀伤活性提高了86.23%,超过了对MCF7/ADR的杀伤活性(提高了30.32%).结论: 热疗明显提高HSP70在乳腺癌药物敏感与耐受细胞系上的表达,增加了免疫效应细胞对这两种靶细胞的杀伤活性.HSP70在乳腺癌药物敏感与耐受细胞系上的差异性表达对免疫效应细胞的杀伤活性有影响.     

慢性粒细胞白血病对STI571耐药机制的研究进展

STI571是近年开发的一种治疗慢性粒细胞白血病（CML）的有效药物。它以白血病细胞的bcr-abl为靶标,通过抑制其酪氨酸激酶活性,阻断信号传导机制,诱导细胞凋亡。但随着STI571在临床的广泛应用,对其耐药的病例报告日益增多。就多种机制引发的STI571耐药进行了阐述。