转基因动物在毒理学中的应用

转基因动物作为研究代谢调节、分化、发育中有关基因功能的工具已在各领域发挥了巨大的作用.在新药开发和研究中,因转基因动物的准确、经济、实验次数少和显著缩短实验时间等优点,现已成为一种进行“快速筛选”和药物非临床前安全评价的的手段.本文将对毒理学研究方面常用的转基因小鼠和大鼠进行阐述,旨在更全面的了解其在毒理学研究中的重要作用,为利用转基因技术技术培育应用于毒理学研究方面的转基因小鼠和大鼠的制备提供参考性的依据.     

C亚型SHIVCHN19P4强毒株在中国恒河猴体内的传代研究

目的研究C亚型SHIVCHN19P4强毒株在中国恒河猴体内传代中病毒学和免疫学等反应的变化特点,分离制备SHIVCHN19P4中国恒河猴传代适应株病毒。方法选择4只健康成年恒河猴,其中两只经后肢静脉感染SHIVCHN19P4病毒,60 d后,分别采集EDTA抗凝全血静脉途径传代至另两只猴,使用流式细胞术、PCR、结合抗体检测和序列分析等方法研究传代动物病毒学、免疫学和序列变异特点。选择性从传代动物感染急性期外周血中分离PBMC,CD8+T细胞敲除后与正常PBMC共培养分离病毒。结果 4只传代动物均获得系统性感染,且传代后病毒毒力明显增强,序列分析发现SHIVCHN19P4病毒序列在传代过程中发生适应性改变;同时,成功分离制备SHIVCHN19P4传代适应性病毒株。结论 SHIVCHN19P4在中国恒河猴体内适应性传代研究为进一步建立C亚型SHIV强毒株/SAIDS模型奠定了良好的实验基础,为研究C亚型HIV-1流行株致病特点以及预防性黏膜疫苗和杀微生物的有效性评价提供了数据支持。     

小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型标准化血清制备及ELISA检测方法的建立

目的制备标准化小鼠呼肠孤病毒III型（reovirus 3,Reo-3）免疫血清,建立小鼠Reo-3抗体ELISA检测方法。方法使用动物来源的Reo-3病毒感染BALB/c小鼠,获得高效价免疫血清;以BHK-21细胞制备Reo-3病毒抗原,同时制备做正常对照抗原。滴定抗原和标准化小鼠Reo-3血清的最佳工作浓度,进行特异性、敏感性、重复性、稳定性等实验。结果制备18 mL抗Reo-3血清,经检测,IFA效价达1∶640,IEA效价达1∶160;Reo-3抗原和标准化小鼠Reo-3免疫血清最佳工作浓度分别为5μg/mL和1∶2400;该ELISA检测体系Reo-3特异抗原批内变异系数为3.8%,批间变异系数为4.0%;检测灵敏度〉1∶4400;与仙台病毒（SV）、小鼠肝炎病毒（MHV）、小鼠腺病毒（Mad）、小鼠脑脊髓炎病毒（TMEV）、小鼠多瘤病毒（POLY）均无交叉反应。经37℃破坏性试验,2 d稳定性试验相对偏差〈27%。结论本研究制备的Reo-3抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为检测实验小鼠Reo-3病原的标准化质控血清。本研究建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强。该体系可用于大、小鼠等实验动物Reo-3抗体的检测。     

痘苗病毒毒力测定及其免疫血清的制备

目的 测试痘苗病毒毒力,制备痘苗病毒免疫血清,为药物评价和病毒检测奠定基础.方法 鸡胚绒毛尿囊膜培养痘苗病毒,测定病毒的TCID50和小鼠毒力.将痘苗病毒悬液稀释成100TCID50,0.2%福尔马林灭活,分别在0、7、14 d以腹腔注射的方式免疫BALB/c小鼠,用IFA、IEA、ELISA方法评价血清的敏感性和特异性.结果 痘苗病毒TCID50/0.0 5 mL=1.8×104,小鼠LD50/0.2 mL=106,8;制备的免疫血清经IFA法测定效价为1:320,IEA法测血清效价为1:160,ELISA测血清效价1:6400.结论 确定的细胞和小鼠毒力将为药物测定提供基础比对数据;制备的痘苗病毒免疫血清具有高度的敏感性和特异性,可作为测试对照血清使用.     

100Hz电针对帕金森病肌僵直的影响

目的 通过与单纯口服多巴丝肼对照来评价100 Hz电针治疗帕金森病肌僵直的疗效。方法 将60例帕金森病患者随机分为治疗组和对照组,每组30例。对照组口服多巴丝肼片治疗,治疗组在对照组治疗基础上配合100 Hz电针治疗。分别记录两组治疗前后及治疗后6个月随访时的统一帕金森病评分量表（UPDRS）评分和肌张力评定量表（TAS）评分,评价患者肌僵直症状改善情况。结果 对照组治疗1、3个月后及治疗后6个月随访时UPDRS、TAS评分与同组治疗前比较,差异均具有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）。治疗组治疗3个月后及治疗后6个月随访时UPDRS评分与同组治疗前比较,差异均具有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）。治疗组治疗后6个月随访时TAS评分与同组治疗前比较,差异具有统计学意义（P＜0.01）。治疗组治疗1、3个月后及治疗后6个月随访时UPDRS评分、TAS评分与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）。结论 100 Hz电针配合口服多巴丝肼片治疗可明显延缓帕金森病肌僵直的发展,具有积极的治疗作用。     

无创正压通气在慢性阻塞性肺疾病所致呼吸衰竭中的临床护理观察

目的探讨无创正压通气在慢性阻塞性肺疾病(COPD)所致呼吸衰竭中的临床护理效果。方法 60例慢性阻塞性肺疾病所致呼吸衰竭患者,随机分成研究组与对照组,各30例。两组患者均采取无创正压通气治疗,对照组治疗时应用常规护理方法 ,研究组在此基础上予以护理干预,分析对比两组患者护理效果。结果两组患者在治疗前后血气分析有明显改善,且两组对比差异有统计学意义(P<0.05);研究组好症状治疗依从性、护理满意度方面与对照组对比明显提高,并发症发生率减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论无创正压通气在慢性阻塞性肺疾病所致呼吸衰竭中实施护理干预可以加强治疗效果,避免大量并发症产生,值得临床应用推广。     

小鼠对结核分枝杆菌Ag85B-Esat6-HspX融合基因的免疫反应

目的研究结核分枝杆菌Ag85B-Esat6-HspX融合基因的免疫原性。方法将40只BALB/c小鼠随机分成4组,NS组、BCG组、pcDNA-HspX组和pcDNA-Ag85B-Esat6-HspX组,每组10只。BCG组只在0周时皮内注射卡介苗1次。NS组、pcDNA-HspX组及融合基因组分别于0、2、4周肌肉注射生理盐水和重组质粒DNA,共免疫3次。在免疫的第2周,4周及最后一次免疫后2周检测体血清中的总IgG水平。同时,最后一次免疫后2周,取脾细胞检测细胞免疫反应。结果构建的融合基因重组质粒DNA免疫动物后能产生针对结核杆菌特定抗原的特异性细胞免疫和体液免疫应答,具有较强的免疫原性。结论结核分枝杆菌Ag85B-Esat6-HspX融合基因可作为DNA疫苗进行保护作用的研究。     

SARS-CoV细胞空斑试验

目的 建立适用于生物安全三级实验室操作的SARS-CoV空斑试验方法.方法 SARS-CoV10倍系列稀释接种Vero-E6细胞,用0.6%琼脂糖覆盖中性红着色(琼脂糖-中性红法)或覆盖1%甲基纤维素,4%甲醛固定,结晶紫染色(甲基纤维素-结晶紫法),空斑计数.结果 琼脂糖-中性红法病毒滴度为6.14 Lg pfu/mL,甲基纤维素-结晶紫法病毒滴度为6.57 Lg pfu/mL.结论 二种空斑试验方法相比,病毒滴度无明显差异.甲基纤维素-结晶紫空斑试验法形成的空斑比琼脂糖-中性红法清晰、操作简单安全、结果可长期保存.     

两种HSV-1及猴B病毒相关抗体测定方法的比较

目的以人单纯疱疹病毒(HSV-1)做为抗原,利用空斑法和IFA法比较猴BV和人HSV-1阳性血清两种不同血清的中和能力的差异,建立一种实用、准确、可靠的病毒毒力的检测方法。方法首先,将HSV-1病毒悬液作连续的10倍稀释,取1 mL接种于已经长成单层的Vero-E6细胞上,用1%甲基纤维素覆盖,待其出现蚀斑后计数,算出病毒悬液中每毫升所含蚀斑单位,即滴定出HSV-1的TC ID50。同时,用免疫荧光方法(IFA)对猴和人疱疹阳性血清进行滴定,得到其血清的效价。其次,用滴定出的病毒液分别与两种阳性血清体外中和后,接种到单层的Vero-E6细胞上,用1%甲基纤维素覆盖,待其出现蚀斑后计数。最后,计算出其蚀斑减少率。结果用1%甲基纤维素作覆盖层的蚀斑数量平均为10-5PFU,能形成115~116个/mL蚀斑,形状呈黍米大小的规则圆形,其蚀斑边缘清晰。IFA滴定的人HSV-1阳性血清与猴BV阳性血清的中和抗体均为1∶80。人HSV-1和猴BV两种阳性血清的空斑减少率均为100%。结论确定了利用1%甲基纤维素做为覆盖层可得到清晰可靠的蚀斑,由此方法检测到用人HSV-1可以代替猴B病毒,筛查猴B病毒抗体。且为将来进行药物筛选和中和实验中利用病毒空斑法建立方便、可靠的方法。     

选择性支气管动脉栓塞术治疗支气管扩张所致大咯血的护理观察

目的：探讨选择性支气管动脉栓塞术治疗支气管扩张所致大咯血的护理效果。方法40例支气管扩张所致大咯血患者,应用选择性支气管动脉栓塞术治疗并予以合理护理,分析其临床治疗效果及并发症情况。结果经选择性支气管动脉栓塞术治疗后,治愈16例(40.0%),显效20例(50.0%),有效4例(10.0%),无严重并发症发生。结论选择性支气管动脉栓塞术治疗支气管扩张所致大咯血并应用合理护理方法具有较为明显效果,安全性高,临床应用价值较高。