白血病细胞核基质蛋白的研究

目的 研究白血病细胞核基质蛋白与正常骨髓细胞核基质蛋白的差异。方法 应用高盐抽提法抽提细胞核基质蛋白，SDS-PAGE技术分析白血病细胞与正常骨髓细胞核基质蛋白的变化。结果 与正常骨髓细胞相比，急性白血病细胞核基质蛋白成分明显增加，且出现多种正常骨髓细胞所没有的蛋白带；不同类型白血病细胞核基质蛋白存在差异。结论 白血病细胞与正常骨髓细胞的核基质蛋白成分有明显差异，新出现的核基质蛋白改变可能与白血病的发生发展有关。     

mdr1基因在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系的表达

目的探讨mdr1在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系中的转录、翻译、P-gp功能变动趋势.方法培养SGC7901/VCR(人胃癌多药耐药细胞亚系)、SGC7901和BGC823(人胃腺癌细胞系)于RPMI1640,用RT-PCR和原位杂交检测mdr1mRNA的表达,用免疫印迹和免疫组化检测P-gp的表达,用流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积.结果半定量RT-PCR显示,SGC7901/VCR mdr1和β-actin吸收峰面积之比为5.63,SGC7901为0.61,BGC823为0.85.杂交信号呈紫蓝色颗粒,分布于胞质.免疫印迹显示SGC7901/VCRP-gp的表达最强,SGC7901最弱.P-gp阳性呈棕黄色颗粒,位于细胞膜上.SGC7901中,少数细胞P-gp表达极强.SGC7901/VCR平均光密度为(1.8310±0.8401),SGC7901为(0.3590±0.2512),BGC823为(0.6260±0.4996)(P＜0.05).SGC7901/VCR阿霉素特异荧光强度为(6.59±50.30),SGC7901为(35.88±14.55),BGC823为(27.44±7.06)(P＜0.001).结论在多药耐药相关的人胃癌细胞系SGC7901/VCR、SGC7901和BGC823中,mdr1基因均表达,P-gp具有药物外排功能,SGC7901/VCR的mdr1表达最强,SGC7901最弱,BGC823居中.     

中国人群组织因子途径抑制物基因外显子Ⅸ1006G→A突变与冠心病的关系

目的 :探讨中国人群冠心病患者和正常人组织因子途径抑制物 (TFPI)基因Ⅸ外显子 10 0 6位G→A突变的发生率及该突变与中国人群冠心病的关系。方法 :采用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性(PCR RFLP)方法分析 ,对 5 3例冠心病患者和 5 3例对照者进行TFPI基因外显子Ⅸ 10 0 6G→A突变分析。结果 :5 3例患者和 5 3例对照者中均未发现该突变。结论 :TFPI基因外显子Ⅸ 10 0 6G→A突变不是中国人群冠心病的危险因素 ,中国人群TFPI基因外显子Ⅸ 10 0 6A等位基因频率极低。     

小鼠乳腺组织中组织型纤溶酶原激活剂乳腺特异性表达载体的瞬时表达

目的：验证所构建的组织型纤溶酶原激活剂(tPA)乳腺特异性表达载体pWTA能否在小鼠乳腺组织中瞬时表达。方法：采用直接注射法将pWTA DNA、pWTA DNA／脂质转染胺试剂Lipofectamine^TM2000复合物及PBS分别注射入妊娠末期小鼠乳腺组织。应用原位杂交技术,以地高辛标记的tPA cDNA为探针,观察pWTA在小鼠乳腺组织中的瞬时表达。结果：tPA表达阳性细胞散在分布于pWTA DNA及pWTA DNA／Lipofectamine^TM2000复合物注射小鼠部分乳腺腺泡,PBS注射组无阳性细胞。结论：载体pWTA能够在小鼠乳腺组织中特异性表达tPA。     

羊心室心肌细胞动力学观察

目的:探讨成体羊心室心肌细胞增殖与死亡的方式及规律.方法:12只山羊取心脏后,常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜观察.结果:正常成体羊心室心肌细胞,包括工作心肌细胞和传导心肌细胞,均可见明显的无丝分裂相和细胞死亡特征.结论:正常成体羊心室心肌细胞存在增生和死亡的动力学过程,且羊心室心肌细胞增殖的主要方式是无丝分裂.     

聚丙烯酰胺凝胶银染技术改良

目的：对变性及非变性聚丙烯酰胺凝胶银染方法最适条件进行探讨和改良。方法：采用PCR－聚丙烯酰胺电泳、硝酸银染色检测159－196bp及336bpDNA片段，并对不同显影液浓度与显色温度下的结果进行比较。结果：DNA分子经改良银染法检测均清晰可见，对比良好。结论：聚丙烯酰胺凝胶电泳后采用银染技术分析，方便快捷，易长期保存，并减小了对人及环境的毒害作用。     

hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞致瘤性的影响及其诱导凋亡作用

目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸(ASODN)对 HL-60细胞致瘤性的影响及其诱导凋亡作用。方法用流式细胞术检测 hTERT ASODN 转染 HL-60细胞72 h 后细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞 DNA 梯带;将转染及未转染寡核苷酸的 HL-60细胞分别接种BALB/c 裸鼠,观察成瘤情况,切片观察移植瘤组织形态;另取10只 BALB/c 裸鼠,改进成瘤方法使其均匀成瘤后分成两组,在瘤体局部分别注射 ASODN、磷酸盐缓冲液(PBS),经7d 治疗后测量瘤体并切片观察其细胞形态变化,采用 TUNEL 方法检测细胞凋亡。结果 hTERT ASODN 作用于 HL-60细胞72 h 后,流式细胞术检测出早期凋亡峰,琼脂糖凝胶电泳显示 DNA 梯形条带,SODN 组及空白对照组未检测出凋亡峰及 DNA 梯形条带 ASODN 转染的 HL-60细胞组 BALB/c 裸鼠接种后第16～17天成瘤,5只中2只成瘤,未转染组在第12～13天成瘤,5只中4只成瘤,成瘤后 ASODN 治疗组瘤组织间质及血管较少,PBS 治疗对照组瘤组织间质发达,血管丰富。成瘤后 ASODN 治疗前肿瘤体积为(100.9±24.6)mm~3,治疗后肿瘤与 PBS 对照组比较,生长明显减缓[瘤体积分别为(422.7±326.4)mm~3和(786.4±357.6)mm~3](P<0.05) 组织切片显示,ASODN 治疗组瘤组织中可见大量细胞呈现凋亡形态,PBS 治疗组则少见凋亡细胞 TUNEL 检测显示,ASODN 治疗组瘤组织中阳性细胞数较 PBS 治疗组明显增多(P<0.05)。结论 hTERT 基因 ASODN 能够诱导 HL-60细胞凋亡并降低其在 BALB/c 裸鼠体内的致瘤性,抑制移植瘤增长速度。     

人胃癌细胞系BGC—823的遗传不稳定性

目的：研究人胃癌BGC－823细胞系的遗传不稳定性。方法：应用染色体G－分带、核型分析和PCR及银染技术。结果：BGC－823细胞系染色体众数为亚三倍体。规律性出现3个标记染色体，1号染色体短臂部分缺失。部分核型出现双微小体。微卫星位点D9s171为纯合性缺失，D9s1604为杂合性缺失。结论：BGC－823细胞系在染色体水平和DNA水平均表现遗传不稳定性。     

hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞凋亡及细胞周期的影响

目的：研究hTERT基因反义寡核苷酸（ASODN）对HL-60细胞诱导凋亡作用及细胞周期的影响.方法：应用hTERT ASODN封闭HL-60细胞hTERT基因,RT-PCR方法检测目的基因的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分析,TUNEL方法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA梯带.结果：hTERT ASODN作用细胞72h后,hTERT基因表达明显受到抑制（P＜0.01）.流式细胞仪检测显示：ASODN组细胞阻滞于G0/G1期,S、G2/M期细胞减少（P＜0.05）;细胞增殖指数（PI）明显降低（P＜0.05）;检测出早期凋亡峰.Annexin V/PI检测及TUNEL检测均显示：ASODN组凋亡细胞阳性率明显高于SODN组（P＜0.01）.琼脂糖凝胶电泳显示：ASODN组出现凋亡DNA梯带.结论：hTERT ASODN能够封闭目的基因表达,阻滞HL-60细胞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,对治疗白血病具有潜在应用价值.     

不同分化程度胃癌组织中hMSH2 mRNA的表达

目的 :研究正常胃粘膜和不同分化程度胃癌胃粘膜组织中hMSH2mRNA的表达。方法 :应用原位杂交技术 ,对 2 7例胃癌 (高、中、低分化分别为 5例 ,9例与 13例 )和 19例正常胃粘膜组织中hMSH2mRNA表达进行检测。结果 :癌组织中杂交信号阳性细胞数与正常组织相比显著减少 (P <0 0 5 )。低分化胃癌 (2 1.8± 10 .6 )与中分化胃癌 (5 0 .9± 19.3)及高分化胃癌 (72 .5± 2 3.3)相比差异显著 (P <0 .0 1)。结论 :hMSH2mRNA表达与胃癌分化程度有关 ,胃癌细胞的分化程度愈低 ,其hMSH2mRNA表达愈低。hMSH2可能对胃癌细胞存在分化诱导或转录水平调控