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目的 原核表达牡蛎类FUT10(Fucosyl-transferase 10)蛋白并探究与人FUT10的免疫相似性。方法 本研究基于课题组前期克隆完整的类FUT10基因cDNA, 依照大肠杆菌表达蛋白的密码子偏爱性, 利用DNAMAN软件对类FUT10基因开放阅读框序列进行优化并合成, 亚克隆至载体pET-28a(+), 得到重构质粒pET-OFu3, 转入大肠杆菌BL21(DE3), 通过异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获取目的蛋白, 进行蛋白质印迹法(Western blot)鉴定。结果 在37 ℃、IPTG终浓度为1.0 mmol/L诱导4 h后, 出现蛋白分子量大小约为55 kDa的条带。该蛋白条带与抗6×His(组氨酸)标签抗体、抗人FUT10抗体均能发生特异性结合。结论 优化后的类FUT10蛋白与人体转移酶FUT10具有相似的免疫原性, 类FUT10蛋白的可溶性表达为探究太平洋牡蛎体内Ⅱ型血型抗原合成路径提供研究基础, 进一步探索了牡蛎体内特异性结合诺如病毒的分子机理。 相似文献
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