HBV前C/C基因与绿色荧光蛋白基因融合表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

目的 :构建含HBV前C C基因与绿色荧光蛋白基因的融合表达载体 ,并在真核细胞中表达。方法 :用PCR法扩增含 1.3倍HBVayw型全基因组真核表达载体pHBV1.3的前C C基因片断 ,应用含绿色荧光蛋白基因的真核表达质粒构建融合表达载体 ,采用脂质体介导方法将其转染到HEK2 93细胞 ,并用荧光显微镜及ELISA法检测融合蛋白的表达。结果 :经PCR及酶切鉴定 ,证实成功构建了含HBV前C C基因的真核表达重组体pEGFP -HB VC ,显微镜下观察及ELISA法证实在HEK2 93细胞中表达了相应融合蛋白。结论 :构建的重组表达载体能在真核细胞中表达目的蛋白与GFP的双功能融合蛋白 ,适合于针对HBV前C C区的相关研究。     

心脏保护性药物治疗与外周动脉疾病患者生存率改善相关

目的:研究心脏药物治疗对外周动脉疾病(PAD)患者远期死亡率的影响。背景:PAD与心血管疾病的患病率和死亡率升高相关。治疗指南推荐积极控制危险因素和改善生活方式。然而PAD患者接受心脏药物治疗的潜在获益尚未明确。方法:在此前瞻性队列研究中,入选2420例连续的PAD(踝臂指数≤     

持续吸入不同浓度氧气对新生大鼠肺血管内皮生长因子及其受体tuRNA表达的影响

目的 探讨持续吸入不同浓度氧气对新生大鼠肺血管内皮生长因子(VEGF)及其受体1(VEGFRl)和受体2(VEGFR2)mRNA表达的影响.方法 新生足月SD大鼠32只,随机分为对照组和实验组.实验组生后12 h开始持续吸入氧气,按不同的吸入氧浓度,将实验组又分为30%O2组、50%O2组和75%O2组.对照组吸入空气.每组8只.于实验开始后21 d处死实验大鼠,取出右肺下叶,RT-PCR技术检测VEGF、VEGFR1和VEGFR2 mRNA表达,根据2-△△CT的计算方法,实验组基因表达差异用实验组相对于对照组基因表达量的倍数表示.结果 与对照组相比,30%O2对新生大鼠肺VEGF及其受体mRNA表达无影响.75%O2组VEGF mRNA表达是对照组的0.48倍;50%O2组、75%O2组VEGFR1 mRNA分别为对照组的0.18倍和0.06倍;VEGFR2 mRNA分别为对照组的0.22倍和0.10倍,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 长时间吸入低浓度氧对新生大鼠肺VEGF及其受体mRNA影响不明届,而持续吸入中等浓度及较高浓度氧可降低VEGF及其受体mRNA的表达.     

颅内破裂动脉瘤手术时机的探讨(附237例分析)

目的探讨颅内破裂动脉瘤手术时机与临床预后的关系。方法回顾性分析2005年我院收治的237例颅内破裂动脉瘤，其中196例行手术治疗。按入院时Hunt—Hess分级将手术病人分为A组（Ⅰ～Ⅲ级）162例，B组（Ⅳ、Ⅴ级）34例；根据手术时间分为早期手术组（SAH3d内手术）19例，延期手术组（SAH4～10d手术）82例，晚期手术组（SAH11d之后手术）95例。比较不同手术期别动脉瘤术中破裂率、术后1个月GOS评分及术后主要并发症（脑血管痉挛、脑积水）发生率，并进行统计学分析。结果24例（10．1％）因再出血丧失治疗机会。术中动脉瘤破裂早期手术组3例（15，8％），延期手术组8例（9．8％），晚期手术组6例（613％）。术后脑血管痉挛发生率早期手术组为15，8％，延期手术组为19，5％，晚期手术组为17，9％。脑积水发生率以晚期手术组最高（14，7％）。对术后1个月GOS评分Ridit分析结果显示：A、B两组中均以早期手术组治疗效果最佳．延期手术次之．晚期手术最差。结论早期手术可规避颅内破裂动脉瘤再出血的风险，降低主要并发症发生率。对于各个级别（包括Ⅳ、Ⅴ级）的SAH病人，均应根据治疗者的手术经验与技巧和所在医院的条件，及早诊断，尽早手术。     

重睑成形术结合眉埋线固定法治疗上睑皮肤松弛

目的介绍一种埋线法固定眉,结合重睑成形术治疗中青年上睑皮肤松弛的手术方案。方法应用3-0无损伤线皮内缝合,固定眉于眉骨骨膜上,再结合重睑成形术,去除上睑多余的皮肤,共治疗29例上睑皮肤松弛的患者。结果本组29例患者,术后Ⅰ期愈合。21例患者术后随访6个月至2年,均获得满意效果,上睑明显年轻化,无并发症。结论重睑成形术结合眉埋线固定法治疗上睑皮肤松弛,是一种简单有效的上睑年轻化治疗方案。     

恐惧应激对大鼠睾丸中Annexin5表达的影响

目的观察大鼠应激条件下睾丸组织中Annexin5表达的变化。方法建立SD大鼠的恐惧应激模型，分别取急性应激、急性对照、慢性应激、慢性对照SD大鼠睾丸，免疫组织化学和Western blotting分析Annexin5免疫定位和蛋白表达。结果急性应激组与对照组相比，免疫组化显示Annexin5都定位在间质细胞、支持细胞和成熟的精子头部，Western blotting分析发现Annexin5的表达降低了10．8％；慢性应激组与对照组相比，免疫组化结果显示Annexin5在精子头部的定位逐渐减少，应激1w和2w组，未见到Annexin5定位于精子头部，到了应激的3w和4w，发现Annexin5重新定位于精子的头部，而在间质细胞和支持细胞上的定位模式没有显著变化。Western blotting分析发现Annexin5的表达降低了17．4％。结论大鼠睾丸Annexin5参与了应激过程，急性应激条件下Annexin5表达降低。随着应激时间的延长，在慢性应激条件下，Annexin5的表达由减少之后而开始有缓慢增加。     

Ga67显像评估纵隔大B细胞淋巴瘤治疗预后的研究

目的:本研究旨在评价纵隔大B细胞淋巴瘤Ga67显像预测疗效的临床价值。方法:39例病人中女24例,男15例,平均年龄(48±5.6)岁,临床病史及组织病理学诊断为纵隔大B细胞淋巴瘤。分别在化疗前、化疗结束后1个月和放疗结束后3个月进行常规的Ga67 SPECT和CT显像,图像分析采用常规的定性方法。结果:Ga67显像结果:在39例病人治疗结束后,有32例病人肿瘤Ga67显像结果为阴性,提示治疗完全有效,随访证实阴性预测率为94%(30/32);7例病人治疗后Ga67显像阳性,表示治疗部分有效或治疗无效。随访证实阳性预测率为86%(6/7),提示Ga67显像阴性的病人预后很好,而治疗后Ga67显像阳性预后很差。CT扫描结果:39例病人进行了治疗前后的胸、腹和盆腔CT扫描,其阴性预测率为83%;而阳性预测率只有25%。结果提示与Ga67显像相比,CT预测疗效的结果难于区分治疗有效、部分有效或无效。结论:Ga67显像在评价纵隔大B细胞淋巴瘤病人治疗反应中明显优于CT扫描。     

镁离子对大鼠弥漫性轴索损伤超微结构的影响

目的探讨镁离子(Mg^2 )对脑弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury，DAI)脑干超微结构的影响。方法选健康成年雄性SD大鼠36只，体重350～450g，将其随机分为实验组、对照组、空白组，每组为12只。采用改良Marmarou模型制作DAI模型，伤后30min分别给予MgSO4 250μmol／kg、等渗盐水0．2ml，伤后24h处死。用透射电镜分别检测脑干超微结构，并行综合组织损伤评分。结果伤后24h，对照组髓鞘分离，线粒体嵴明显肿胀；实验组未见髓鞘分离，线粒体轻度肿胀。实验组脑干综合组织损伤程度评分明显轻于对照组。结论Mg^2 可在超微结构水平阻止DAI轴索的继发性损害，对DAI具有一定的保护作用。     

健康青年急进高原后凝血纤溶系统改变的研究

目的探讨高原环境下,急进高原人群不同时相凝血及纤溶系统变化的基本规律.方法对从平原地区急进3 650 m高原前、急进高原后第3 d、第7 d第15 d及第30 d的30名健康青年血浆凝血酶时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、组织纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活抑制物活性(PAI)、纤溶酶原(PLG)、D-二聚体含量(DD)进行检测,并与30名世居者作对照.结果健康青年急进高原3 d后其PT、APTT出现延长,t-PA活性增高,而PAI、Fg含量降低,与平原组相比有显著差异(P＜0.05).急进高原后7～30 d,其PT、APTT随移居时间延长而逐渐缩短,t-PA活性则逐渐降低,PAI、Fg逐渐增高,血液处于高凝状态.且急进高原30 d后,与平原人及世居组比较均有显著差异(P＜0.05).结论 高原环境下,急进高原青年凝血系统出现紊乱,表现为早期凝血与纤溶被激活,而后出现继发性纤溶受抑,凝血及纤溶的平衡被破坏,而使血液呈现高凝和继发纤溶状态.     

人髓核软骨样细胞的生物学特性观察

目的:探讨人髓核软骨样细胞的生物学特性,为组织工程椎间盘种子细胞的选取提供依据.方法:髓核组织取材于3例脊柱侧凸行前路矫形手术者(年龄11～13岁),依次用0.25%胰蛋白酶和0.2%Ⅱ型胶原酶分离髓核细胞,用含10%胎牛血清(FBS)的F12培养液培养细胞,取传1～7代次细胞进行光镜、电镜检查,观察细胞形态学改变,对细胞计数、二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)摄取进行比较,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞的聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅰ型和Ⅱ型胶原蛋白信使RNA(mRNA)的表达情况.结果:体外培养条件下,传3代之前的细胞形态正常,胞浆丰富;传4代起.部分细胞的形态逐渐向长梭形演化.与传1代细胞相比,传2、3代细胞数量增殖无明显减缓(P>0.05),传4代细胞第4天开始生长减慢(P<0.05),传5Ⅰ7代细胞第2天即较转1代细胞数量明显减少(P<0.05).传1Ⅰ3代细胞的MTT摄取吸光度值差异无统计学意义(P>0.05),和传1代相比,传4代具有统计学差异(P<0.05),传5Ⅰ7代的差异更显著(P<0.01).聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原在传3代之前各代次的mRNA表达量间无统计学差异(P>0.05),和传1代相比,Ⅱ型胶原从第4代起表达量显著下降(P<0.05),聚集蛋白聚糖从第5代起表达量显著下降(P<0.05),而从传5代起髓核软骨样细胞开始表达Ⅰ型胶原:结论:髓核细胞传代后前3代细胞形态良好,增殖能力强,聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原mRNA表达良好,适合作为组织工程椎间盘的种子细胞.