湖北省HIV-1分子流行病学研究

目的了解湖北省HIV-1基因型分布特征。方法对湖北省HIV-1主要流行区域进行流行病学调查，应用巢式聚合酶链反应对其中102例HIV-1感染者的env基因V3～V4区、gag基因P17/P24区和tat基因第一外显子区进行扩增，对各基因区阳性扩增样本进行序列测定，并对各基因区核苷酸进行序列分析。结果所有目标人群中共存在B^＋、C2种亚型以及CRF08-BC和CRF01-AE2种重组毒株，B^＋亚型在人群和地域上分布最广，涉及献血员、受血者以及二者的配偶和性乱人群，主要分布既往有偿献血员集中的地区。CRF08-BC、CRF01-AE重组主要涉及性乱人群，分布于经济发达的城市或地理位置偏南方的地区。C亚型为离散病例，主要涉及静脉毒品注射者。结论湖北省已由既往单一HIv-1 B^＋亚型转变为多种亚型、重组亚型流行的复杂局面，各亚型在省内高危人群和地域分布不平衡，各有特点，从总的亚型流行特征来看，HIV-1在湖北省有加快流行和进一步复杂化的趋势。     

中药复方金三莪对肝硬化患者肠通透性的影响

目的观察中药复方金三莪抗肝硬化的疗效及对肠通透性的影响。方法选取85例乙型肝炎肝硬化患者,随机分为2组。对照组采用护肝、支持和防治并发症等综合处理,中药组在综合治疗基础上加用中药金三莪复方煎剂。观察治疗前后2组患者肝功能指标、Child-Pugh积分、血浆D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)及内毒素水平的变化。结果2组患者治疗后肝功能各项指标、Child-Pugh积分、血浆D-乳酸、DAO及内毒素水平均较治疗前有明显的好转(P<0.05),但中药组患者治疗后TBil及PTA 2项指标的好转、Child-Pugh积分、血浆D-乳酸、DAO及内毒素水平的下降均较对照组更为显著(P<0.05)。结论中药复方金三莪有明显的抗肝硬化疗效,同时阻止了肠通透性的增加,减少了肠源性内毒素血症的发生。     

甜菜碱对非酒精性脂肪性肝炎大鼠氧化应激及炎症因子的影响

目的:研究甜菜碱对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝脏组织氧化应激、炎症因子的影响,探讨其作用机制。方法:将32只Wistar大鼠随机分成4组:正常组、模型组、低剂量甜菜碱干预组和高剂量甜菜碱干预组。除正常组外,其余3组给予高脂肪饲料加入诱导脂肪肝药物丙基硫氧嘧啶饲养,构建NASH大鼠模型,同时对低剂量(200 mg/kg)、高剂量(400 mg/kg)甜菜碱干预组大鼠以甜菜碱溶液灌胃。第12周末处死全部大鼠。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠肝组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)、细胞色素相关因子(CYP3A2、CYP2E1)的mRNA水平,常规生化方法检测肝组织一氧化氮(NO)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平,并进行肝脏病理组织学检查。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝组织损伤严重,该组织中的TNF-α、IFN-γ、CYP2E1 mRNA表达明显增强,IL-10 mRNA的表达明显减弱(P<0.01),MDA、NO水平显著升高(P<0.05或P<0.01),CYP3A2升高无统计学差异(P>0.05);与模型组相比,低、高剂量甜菜碱组肝组织损伤减轻,该组织中的TNF-α、IFN-γ、CYP2E1 mRNA表达明显减弱,IL-10 mRNA的表达显著增强(P<0.05或P<0.01),MDA、NO水平显著降低(P<0.05或P<0.01);且低、高剂量甜菜碱组之间有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。结论:甜菜碱可减轻非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏的炎症和坏死,其机制可能为改善丙基硫氧嘧啶对大鼠肝组织的氧化应激状态、抑制肝细胞炎症因子与iNOS mRNA的表达等。     

培哚普利对实验性肝纤维化大鼠TGF-β1及其Smad3、7的影响

目的：探讨培哚普利抗大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。方法：用培哚普利治疗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型。免疫组化技术检测TGF-β1、Smad3及Smad7在肝内的表达及定位，常规生化方法检测肝功能，放射免疫方法检测透明质酸（HA），肝组织VanGiseonr染色、HE染色。结果：经培哚普利治疗后大鼠肝组织内TGF-β1及Smad3表达降低，而Smad7的表达增加。TGF-β1及Smad3的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆，Smad7则主要在肝细胞浆表达。血清谷氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、HA显著减低，肝小叶结构趋于正常，纤维间隔明显变薄。结论：培哚普利能有效地减轻肝纤维化大鼠的肝脏损伤及纤维化程度，与其抑制肝内TGF-β1及Smad3．促进Smad7表达有关。     

乙型肝炎病毒mRNA的选择性检测

目的：检测HBV mRNA的活性，了解HBV的复制状态，评价抗病毒药物的疗效。方法：应用选择性扩增HBV mRNA的方法，以特异性检测HBVmRNA活性。结果：HBVmRNA仅能在有活动性复制的HBV DNA阳性的肝癌活检组织及HBV DNA转染的人肝癌HepG22.2.15细胞中测出,而不能在无HBV复制的正常人肝组织内、人肝癌PLC／PRF／5细胞及HBV DNA阳性血清中测出。结论：该方法具有快速、灵敏及相对特异等特点,可作为监测HBV活动性复制，评价抗病毒药物疗效的实验手段之一。     

核酶在2.2.15细胞内抗乙肝病毒作用

目的:研究针对乙型肝炎病毒前基因组RNA双靶位自剪切核酶在细胞内对HBV复制和表达的抑制作用,进一步探讨如何提高核酶在细胞内的催化效率。方法:人工合成核酶基因片段,利用分子克隆技术,定向克隆到pGEM3ZF(-)质粒的EcoR I、HindⅢ位点中,构建出核酶的自剪切转录载体,再切下核酶基因片段,克隆到pBBS212质粒上构建核酶的真核表达载体。通过脂质体介导的基因转染方法将其导入2.2.15细胞中,观察核酶在细胞内对HBsAg、HBeAg表达的抑制作用。结果:核酶对HBsAg、HBeAg表达的抑制率分别达55％、28％。结论:研究结果表明该双靶位核酶可以在2.2.15细胞内对HBV的复制和表达有明显的抑制作用。     

长效干扰素与普通干扰素治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者疗效的meta分析

目的 评价长效干扰素与普通干扰素治疗HBeAg+慢性乙型肝炎患者的疗效.方法 检索Medline、Embase、EBSCO、中国生物医学文献数据库(CBM)、中文科技期刊数据库(VIP)、中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数字化期刊全文数据库,纳入长效干扰素(PEG-IFN-ɑ-2a或者PEG-IFN-ɑ-2b)与普通干扰素比较治疗HBeAg+慢性乙型肝炎的随机对照研究,并追查了所有纳入文献的参考文献,检索年限均为建库至2016年7月1日.由2位研究者独立进行文献筛选、资料提取及纳入研究的偏倚风险评价后,采用RevMan 5.2软件进行Meta分析.结果 最终纳入13项研究1263例,其中长效干扰素组616例,普通干扰素组647例.Mate分析结果显示,长效干扰素组在治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎24周和48周时观察ALT复常率、HBV-DNA转阴率、HBeAg转阴率三个指标均优于普通干扰素组(P<0.05),在12周时长效干扰素组HBV-DNA转阴率较普通干扰素组高(Z=2.19,P=0.03),而ALT复常率、HBeAg转阴率方面与普通干扰素组比较差异无统计学意义(P>0.05);在治疗12周和24周时,两组所检测的HBsAg阴转率差异无统计学意义(P>0.05),而疗程延长至48周时,长效干扰素组HBsAg阴转率高于普通干扰素组(Z=2.34,P=0.02);在HBeAg血清转换率方面,疗程12周和48周差异均无统计学意义(P<0.05),而在24周时,长效干扰素组优于普通干扰素组(Z=2.90,P=0.004).结论 在治疗24周、48周时,长效干扰素(PEG-IFN-ɑ-2a或者PEG-IFN-ɑ-2b)治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者在ALT复常率、HBV-DNA转阴率和HBeAg转阴率三个指标均优于普通干扰素;仅48周疗程时长效干扰素HBsAg阴转率较普通干扰素组高;仅24周疗程时长效干扰素HBeAg血清转换率较高.受纳入研究数量和质量限制,上述结论仍需开展高质量研究加以验证.     

急性肝衰竭小鼠血脑屏障结构和水通道蛋白4变化的研究

目的观察急性肝衰竭小鼠脑水肿时血脑屏障结构和脑组织水通道蛋白4(AQP4)的改变。方法本实验于2016年1—12月在武汉大学人民医院中心实验室进行实验,共纳入SPF级C57BL/6小鼠30只,随机数字表法分为模型组和对照组各15只,模型组采用脂多糖及D-氨基半乳糖联合诱导小鼠急性肝衰竭模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。24 h后观察小鼠肝组织变化检测血清ALT、AST、血氨水平,血脑屏障结构和脑组织水通道蛋白4的表达水平。结果模型组出现明显病理性肝组织损害,对照组无显著变化;与对照组比较,模型组血清ALT、AST和血氨水平显著升高(t=5.075、6.338、5.718,P<0.05)。模型组脑组织血脑屏障结构轻度异常,电镜下可观察到微血管周围星形胶质细胞足突明显肿胀、内皮细胞出现大量囊泡和液泡,内皮细胞紧密连接打开。脑组织AQP4蛋白表达水平与对照组比较差异无统计学意义(t=-0.961,P=0.397)。结论急性肝衰竭脑水肿时血脑屏障结构存在轻微改变,血管源性水肿机制参与急性肝衰竭脑水肿,但脑组织中AQP4蛋白水平未出现明显改变。