先天性输尿管瓣膜症二例报告

先天性输尿管瓣膜症较为罕见,我们自1986年以来收治2例,报告如下。例1 女,18岁。左上腹肿块10年。B 超检查:左肾巨大积水。经膀胱镜左输尿管逆行插管,于16cm 处受阻。逆行造影:左输尿管显影与插入的导管同     

Ki67基因RNA干扰腺病毒表达载体的构建及其抗结肠肿瘤作用研究

目的:构建针对肿瘤增殖基因Ki67的小干扰RNA(Ki67-siRNA)腺病毒表达载体,体外研究其对人结肠癌细胞株SW620细胞生长影响,为结肠癌的基因治疗提供参考。方法:设计可形成小发夹结构的Ki67-siRNA对应模板DNA序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pCA13,构建Ki67-siRNA表达质粒pCA13-Ki67。鉴定正确后,将pCA13-Ki67与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染至293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒Ad-Ki67。大量扩增Ad-Ki67,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。Ad-Ki67感染人结肠癌细胞,结晶紫染色法检测细胞病理作用,MTT法检测细胞存活,Western印迹法检测Ki67表达。结果:酶切分析、测序鉴定表明pCA13-Ki67构建成功,PCR分析表明Ad-Ki67含有Ki67-siRNA序列。Ad-Ki67可显著抑制Ki67蛋白表达及结肠癌细胞生长。结论:含有Ki67-siRNA的重组腺病毒构建成功,其能抑制人结肠癌细胞Ki67基因表达和生长。     

Ki67基因RNA干扰增殖型腺病毒对肺癌细胞增殖的抑制作用

 目的 探讨Ki67基因小干扰RNA（Ki67．siRNA）增殖型腺病毒对肺癌细胞的示伤作用及IXlD／的表达情况。方法 提取重组腺病毒的DNA，PCR鉴定正确后，大量扩增，氯化铯梯度离心纯化，测病毒滴度。ZD-Ki67感染人肺癌细胞系（A549），通过荧光显微镜下观察和结晶紫染色法检测细胞病作用、IVITT法检测细胞存活、Western印迹法检测E1A、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Ki67表达。结果 PCR鉴定表明ZD55-Ki67包含目的基因且无野生型腺病毒的污染；ZD55-Ki67滴度为4．5×1010PFU／ml免疫印迹法证实ZD55-Ki67在肿瘤细胞中表达E1A；ZD55-Ki67抑制Ki67表达及肺癌细胞生长的作用显著优于Ad-Ki67。结论 ZD55-Ki67能够有效抑制Ki67基因的表达，降低肺癌细胞的增殖能力，为肺癌研究和抗肿瘤基因治疗提供新的策略。     

转录hTERT基因shRNA的溶瘤腺病毒的构建及抗肿瘤效应

目的构建转录端粒酶逆转录酶(hTERT)基因小发夹RNA(hTERT-shRNA)的条件增殖腺病毒。方法设计能转录hTERT-shRNA的模板DNA序列,煺火后克隆至pCA13质粒,构建重组质粒pCA13-hTERT。用Bg1Ⅱ从pCA13-hTERT酶切出包含CMV启动子及hTERT-shRNA模板的表达框,将表达框克隆入条件增殖腺病毒质粒pZD55,构建重组质粒pZD55-hTERT。将pZD55-hTERT与腺病毒右臂质粒pBHGE3共转染293细胞,9~12天后出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA,PCR鉴定正确者即为条件增殖腺病毒ZD55-hTERT。大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,测滴度。感染人肝癌细胞株(BEL-7404),通过荧光显微镜、结晶紫染色法观察细胞病作用,MTT法检测细胞存活情况。结果酶切分析、测序鉴定表明pCA13-hTERT构建成功;PCR、酶切分析、测序鉴定表明pZD55-hTERT构建成功;PCR鉴定表明ZD55-hTERT包含目的基因且无野生型腺病毒的污染;ZD55-hTERT滴度为1×1011PFU/m l;ZD55-hTERT在肝癌细胞株BEL-7404中可导致明显细胞病变效应。结论成功构建的ZD55-hTERT为利用hTERT-shRNA靶向肿瘤治疗奠定了基础。     

(125)~I标记Ki67反义多肽核酸对裸鼠人肾癌移植瘤的抑制作用

放射性核素反义治疗是近年来提出的一种新的肿瘤治疗策略,它将反义技术阻抑癌基因表达与放射性核素基因靶向照射有机结合,从而提高治疗效果。我们既往研究发现125I标记肿瘤增殖基因Ki67反义多肽核酸(125I-PNAs)具有较强的体外抑制肾癌细胞增殖、促进凋亡作用。本研究通过建立裸鼠人肾癌移植瘤模型,进一步观察其在体内对靶基因表     

巴洛沙星片治疗泌尿系统细菌性感染的多中心随机双盲对照临床试验

目的评价巴洛沙星片治疗泌尿系统急性细菌性感染的安全性和有效性。方法采用多中心、双盲双模拟、随机、阳性药物平行对照试验设计。共入选221例,其中可评价疗效病例209例,巴洛沙星组102例,左氧氟沙星组107例。巴洛沙星组予巴洛沙星片200 mg,hid,左氧氟沙星组予左氧氟沙星片200 mg,bid,2组疗程均为7～14 d。结果巴洛沙星组临床总有效率和痊愈率分别为98.0%和87.2%,细菌清除率为100%;左氧氟沙星组临床总有效率和痊愈率分别为100.0%和87.9%,细菌清除率为100%。巴洛沙星组和左氧氟沙星组药物不良反应发生率分别为4.8%和0.9%。2组比较均无显著差异(P>0.05)。结论巴洛沙星治疗急性细菌性泌尿系统感染安全、有效。     

肾癌G250抗原蛋白多糖(PG)区蛋白cDNA的克隆和序列测定

目的 克隆肾癌G250抗原蛋白多糖（PG）区cDNA，为制备G250杂交瘤及抗G250的单克隆抗体奠定基础。方法 从肾癌细胞786-0中提取总RNA，以RT-PCR方法扩增出全长360bp的G250抗原PG区cDNA，将其与表达载体pCA13连接，转化大肠杆菌JM109，构建G250抗原PG区cDNA克隆。结果 酶切及序列分析表明，与GenBank报道的G250抗原PG区cDNA序列完全一致。结论 G250抗原PG区cDNA已成功地得到克隆。     

抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因的克隆及其原核表达载体的构建

目的 克隆抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因(VH),并构建其原核表达载体。方法从能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出VHcDNA。用HindⅢ和XhoⅠ酶切纯化的RT-PCR产物和原核表达载体pET28a( ),在T4DNA连接酶作用下室温连接。重组质粒经酶切鉴定,阳性克隆测序并进行序列分析。结果扩增出VHcDNA片段,大小约为370bp,重组质粒的酶切鉴定结果与预期一致。VH基因序列长度为366bp,编码122个氨基酸。VH基因属于鼠免疫球蛋白重链11亚类。结论成功克隆出抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因,并成功构建其原核表达载体。     

亚临床型右侧精索静脉曲张治疗临床意义研究

目的探讨左侧精索静脉曲张合并亚临床型右侧精索静脉曲张患者同时行双侧精索内静脉高位结扎术的价值。方法左侧精索静脉曲张（Ⅱ～Ⅲ度）合并右侧亚临床型精索静脉曲张患者47例，随机分为A、B2组。A组（n=23）行左侧精索内静脉高位结扎术，B组（n=24）行双侧精索内静脉高位结扎术。全部患者手术前后均进行精液分析和彩色多普勒超声测量精索内静脉内径及双侧睾丸体积，并随访其配偶的妊娠情况1—2年。结果47例患者中，A组患者术后活动精子总数（TMSC）平均值较术前明显增加（P〈0．05），而B组术后较术前增加更加明显（P〈0．05）；A组患者右侧睾丸手术前后改变不明显（P〉0．05），而B组患者双侧睾丸术后与术前相比均有显著性差异（P〈0．05）。配偶妊娠情况随访：A组自然妊娠率为34.8％（8／23），B组为62．5％（15／24），B组与A组相比有明混差异（P〈0．05）。结论对于左侧精索静脉曲张（Ⅱ～Ⅲ度）合并右侧亚临床型精索静脉曲张患者，亚临床型精索静脉曲张对睾丸生精功能有损害，应同时进行双侧精索内静脉高位结扎术。