激活转录因子5在肾癌细胞系中的表达及意义

目的　探讨新基因激活转录因子 5 (ATF5 )在不同肾癌细胞系中的表达及意义。　方法　采用RT PCR及Northernblot方法检测ATF5基因在肾癌细胞系A498、786 O、GRC I和胚肾细胞系2 93及正常肾小管上皮细胞系HK 2中的表达 ,计算机辅助图像分析结果。　结果　RT PCR检测ATF5在肾癌细胞系A498、786 O、GRC I和胚肾细胞系 2 93中呈强表达 ,其灰度面积吸光度A值分别为35 195 .2± 2 8.2、35 70 9.3± 18.3、370 38.5± 2 4.2、33 318.8± 34.2 ,而在正常肾小管上皮细胞系HK 2中表达较弱 ,灰度面积吸光度A值为 2 42 3.6± 3 .3,肾颗粒细胞癌细胞系GRC I中的表达是HK 2的 15倍 ,两者差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。Northernblot检测ATF5在不同肾癌细胞系的表达结果与RT PCR方法检测结果一致。　结论　ATF5在肾癌发生和发展中具有一定作用 ,其致病机理可能与协同Wnt信号通路相关。     

雄激素受体相关蛋白267-α酵母双杂交诱饵重组质粒的构建及转化

目的 构建和转化雄激素受体相关蛋白267—α(ARA267—α)的酵母诱饵重组质粒，为通过酵母双杂交研究ARA267—α的功能奠定基础。方法 用PCR扩增ARA267—α全长cDNA中编码PWWP和PHD-SET蛋白结构域的两个基因片段；将基因片段与pGBKT7载体定向重组；用酶切和测序鉴定重组质粒；将核苷酸序列正确的重组质粒转化入AH109酵母菌株。结果 成功构建pGBKT7-PWWP和pGBKT7—PHDSET重组质粒。分别转化有2种重组质粒和pGBKT7空载体的3种AH109酵母都能在SD／-Trp／X—α—gal培养基中长成白色菌落，但都不能在SD／-HiS／-Trp／2．5mmol／L 3-AT／X—α—gal和SD／-Ade／-Trp／X—α—gal培养基中生长，在SD／-Trp液中培养16h后，A600均值分别为0．8、0．9、0．9。这表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活HIS3、ADE2和MEL1酵母报告基因表达的活性，也没有酵母毒性作用。结论 构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的cDNA文库筛选。     

转化生长因子β不敏感的树突状细胞疫苗对肾癌的免疫治疗作用

目的观察转化生长因子β（TGF-β）不敏感、肿瘤细胞裂解物负载的树突状细胞（DC）疫苗对小鼠肾癌的治疗作用。方法利用修饰的TβRII粒构建逆转录病毒载体，转染肾癌Renca细胞裂解物负载的DC，获得表达显性负相TpRII（TpRIIDN）的DC，流式细胞仪测定细胞表型变化，观察TGF-β体外增殖抑制效果，Western blot检测SMAD-2的磷酸化水平。Renea细胞皮下荷瘤BALB／C鼠40只，随机分TβRIIN—DC组、DC-抗原组、DC组和对照组4组，每组10只，分别给予不同的皮下接种，观察肿瘤体积改变和小鼠生存期。结果经方差分析，TβRIIDN—DC组与DC-抗原组，DC、组的DC细胞CD86、CD80，CD40、CD11c及MHC-Ⅱ表型差异无统计学意义（P＞0．05），TGF-β对TβRIIDN—DC细胞的增殖无抑制作用。在TβRIIDN—DC组未检测到磷酸化SMAD-2。TβRIIDN—DC组、DC抗原组、DC组和对照组的小鼠肿瘤体积分别为（36．27±13．09）、（115．51±20．75）、（218．10±18．93）和（239．21±21．82）mm^3，4组荷瘤小鼠生存期分别为（75．6±10．2）、（44．3±8．5）、（19．0±5．4）和（21．2±6．7）d，其中TβRIIDN—DC组2只小鼠肿瘤完全消失，TβRIIDN-DC组肿瘤体积及荷瘤小鼠生存期与其他各组比较差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论TGF-β不敏感的DC疫苗对肾癌荷瘤BALB／C小鼠有明显的免疫治疗作用。     

伐地那非的药效学和药代动力学

伐地那非是一种强效、高选择性的5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂，对PDE5的抑制作用约为西地那非的10倍：该药能显著增强阴茎勃起功能；而且起效迅速，患者口服后最早10min即可充分勃起完成性交，是迄今为止起效最快的PDE5抑制剂。伐地那非口服绝对生物利用度为15％，可被迅速吸收，血浆清除半衰期约为4～5h：药效学、药代动力学、安全性及耐受性研究表明，伐地那非是一个治疗ED的安全、有效的口服药物。     

腹腔镜根治性膀胱切除加原位膀胱重建术治疗肌层浸润性膀胱癌的疗效观察(附26例报告)

目的:总结26例腹腔镜根治性膀胱切除、标准淋巴结清扫加尿流改道术的临床经验,评价此术式肿瘤学结果与功能性结果。方法:2005年8月～2011年5月对26例肌层浸润性膀胱肿瘤患者实施腹腔镜根治性膀胱切除、标准淋巴结清扫加原位膀胱重建术,包括13例T型原位回肠膀胱、11例Studer原位回肠膀胱与2例乙状结肠原位回肠膀胱,对手术时间、清扫淋巴结数量、围手术期并发症、术中出血量、输血量、上尿路形态与功能、术后原位膀胱控尿情况进行分析。结果:平均手术时间为6.24(4～8)h,平均出血量为397(100～800)ml,平均输血量为109(0～800)ml,平均清扫淋巴结数15(5～30)个,1例淋巴结阳性,无围手术期死亡。围手术期并发症发生率为16.7%(4/26),其中1例术后血肌酐上升至214.9μmol/L,6天后下降至正常范围;2例新膀胱尿道吻合口漏,经引流治愈;1例输尿管新膀胱吻合口漏行手术修补。随访19.9(1～67)个月,生存率为92.3%(24/26);1例鳞癌死于广泛转移,1例于术后55个月因急性心肌梗塞死亡。原位膀胱重建患者日间完全控尿率达88%(22/25);夜间完全控尿率60%(15/25),小于1块尿垫24%(8/25)。上尿路检查提示19.2%(5/26)术后45天内出现双侧肾盂及输尿管轻度暂时性扩张,其中2例有暂时性血肌酐升高,但均在3个月之内恢复到正常范围。结论:腹腔镜根治性膀胱切除、标准淋巴结清扫加下腹壁小切口行尿流改道术取得了满意的肿瘤学与功能性结果;其长期疗效需要进一步随访。     

ELL慢病毒表达载体的构建及其感染前列腺癌PC3细胞的研究

目的构建ELL基因的慢病毒表达质粒,探讨其感染人前列腺癌PC3细胞的可行性。方法将含有全长ELL的质粒和慢病毒表达载体经双酶切后连接,构建成重组慢病毒载体质粒pCDH1-MCS1-EF1-copGFP—ELL。对慢病毒载体质粒进行双酶切和测序鉴定后,制备包装病毒并转染人前列腺癌细胞系PC3。结果慢病毒载体质粒pCDH1-MCS--EF1-copGFP—ELL的酶切和测序结果与预计的序列一致。慢病毒感染人前列腺癌PC3细胞后能稳定高表达ELL。结论成功构建了ELL的慢病毒表达载体,ELL可被成功转染人人前列腺癌细胞。     

提高射频治疗温度治疗前列腺增生症55例报告

提高射频治疗温度治疗前列腺增生症５５例报告杨学辉，郭应禄，杨景波，苏莉萍，孙凤岭，杜瑞涛，杨文尉目前，射频治疗良性前列腺增生症温度多控制在５０℃以下，其近远期疗效难以肯定。我们在动物实验基础上，采用７０℃射频治疗，收到较好效果，报告如下。实验研究选择...