造血干细胞移植前后外周血红细胞参数的近期动态观察

目的:观察血液病患者造血干细胞移植后外周血细胞参数的近期动态变化,了解骨髓恢复情况.方法:使用SE-9500血细胞分析仪对28例血液病患者造血干细胞移植前后血液进行检测,观察移植后一个月内各参数的变化.结果:28例外周血干细胞移植前后各细胞参数的观察发现,红细胞平均容积(MCV)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)和红细胞体积发布宽度(RDW-CV%)等参数其结果在干细胞移植前后进行比较,虽然有变化,但无显著性差异(P>0.05);红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、网织红细胞绝对数(RET#)、低荧光强度网织红细胞百分率(LFR%)、高荧光强度网织红细胞百分率(HFR%)和中荧光强度网织红细胞百分率(MFR%)等参数变化较大,有显著性差异(P<0.05).RBC、HGB和HCT在移植后第14天降至最低,以后逐渐升高;在干细胞移植后第7天RET#、MFR%和HFR%降至最低,LFR%相对增高,随着干细胞移植后骨髓功能逐渐恢复,RET#也随之升高,HFR在第14天升至最高,MFR在第21天升至最高.结论:观察干细胞移植后外周血细胞参数的变化,对了解干细胞移植后骨髓的恢复有一定的临床价值,本次结果表明HFR可作为了解骨髓恢复的早期指标.     

体外诱导K562细胞伊马替尼耐药及其机理的初步探讨

目的 体外诱导K562细胞伊马替尼(imatinib)耐药并对其耐药性进行检测.方法 以浓度递增的方法诱导K562对伊马替尼产生耐药, MTT法确定其耐药性.RT-PCR方法半定量测定耐药细胞中BCR/ABL基因水平,并进行BCR/ABL基因序列测定.流式细胞术测定P-gp表达.高效液相色谱仪(HPLC)测定耐药细胞内药物浓度.结论 ①浓度递增法成功诱导K562细胞伊马替尼耐药(K562R),K562R细胞能长期在含5.0 μmol/L的伊马替尼的培养液中生长.②细胞生长曲线显示5.0 μmol/L伊马替尼作用于K562R细胞120 h,其活细胞数量与0 h无明显差别.6个浓度梯度的伊马替尼(0、0.25、0.50、0.75、1.00、2.00 μmol/L)作用于K562细胞24 h,发现所有浓度(除0 μmol/L外)伊马替尼均可抑制K562细胞的生长,24 h细胞活力几乎为零.③MTT法抑制率测定K562细胞半数抑制浓度约为0.75 μmol/L,K562R细胞约为7.5 μmol/L,耐药倍数约为10倍.④HPLC细胞内药物浓度测定显示K562R胞内伊马替尼药物浓度低于K562细胞(P＜0.01),流式细胞检测未发现P-gp表达.⑤374 bp的BCR/ABL基因序列分析未发现常规热点区域基因突变.结论 体外成功诱导出伊马替尼耐药细胞--K562R细胞.K562R耐药主要环节为胞内药物浓度降低,而胞内药物浓度降低与P-gp无关.耐药机理需要进一步研究.     

两种巢式PCR检测慢性粒细胞白血病患者骨髓移植后微小残留病的比较

目的比较2种巢式聚合酶链反应(PCR)检测骨髓移植后慢性粒细胞白血病(CML)患者微小残留病。方法分别用一步法逆转录-PCR(RT-PCR)和两步法RT-PCR2种巢式PCR检测骨髓移植后CML患者BCR-ABL融合基因，并做2种方法的灵敏度实验。结果2种巢式PCR灵敏度实验中，一步法RT-PCR和两步法RT-PCR的巢式PCR可分别检测出0．1和1PgK562细胞总RNA中的BCR-ABL融合基因；同时对19份来自12例骨髓移植后CML患者标本检测，一步法RT-PCR的巢式PCR检测出阳性的最长移植时间为690d；两步法RT-PCR的巢式PCR为415d。结论一步法RT-PCR的巢式PCR检测骨髓移植后CML微小残留病具有较高灵敏度．操作简便快速．特别适用于临床检测。     

STA R全自动血凝仪检测凝血因子Ⅷ抗原水平的评价及其临床应用

目的评价STAR全自动血凝仪检测凝血因子Ⅷ(vWF)抗原水平的效能并探讨其临床应用。方法评价该仪器的重复性、敏感度、线性以及与酶联免疫吸附试验(ELISA)的相关性,并对146名健康人、27例1型遗传性假血友病(vWD)组、30例2型糖尿病患者进行检测。结果该方法的敏感度为3%,正常质控的批内变异为2.32%,异常质控的批内变异为2.51%,混合血浆的批内变异为2.02%;在2%~95.0%的检测范围内,线性较好(r=0.999),与ELISA的相关性较好(r=0.983);146名健康人中4例超过厂商给定参考范围上限,证实该参考范围可用于本室;健康人vWF抗原(vWF:Ag)水平随年龄的增长而升高,1型vWD患者组vWF:Ag水平明显低于相应年龄段的健康人(P<0.05),2型糖尿病患者组则明显高于相应年龄段的健康人(P<0.05)。结论该方法重复性、敏感度和线性均较好,全自动化检测,快速、简便,尤其适用于少量样本的及时测定。     

浅谈环氧乙烷灭菌参数放行

本文依据ANSI/AAMI/ISO11135-1/-2 的要求,介绍了参数放行的优势,参数放行过程确认步骤以及额外需考虑的因素,参数放行的常规过程控制以及过程有效性维护.     

熊去氧胆酸治疗异基因造血干细胞移植术后早期胆汁淤滞性肝病观察

目的 探讨熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)治疗异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)术后早期胆汁淤滞性肝病的价值. 方法 选取2003-2007年本院行allo-HSCT术后诊断早期胆汁淤滞性肝病患者26例,序贯入组,分为观察组(12例)和对照组(14例).观察组应用UDCA口服14 mg·kg-1·d-1,治疗14 d;对照组S-腺苷蛋氨酸静脉点滴,1 g/d,治疗14 d.治疗前后分别检测2组患者总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)及血清碱性磷酸酶(ALP)的含量,并观察治疗效果.结果观察组显效7例,有效3例,无效2例;对照组显效3例,有效3例,无效8例. 结论 UDCA治疗allo-HSCT术后早期胆汁淤滞性肝病安全有效,患者耐受良好.     

光学法血小板计数作为低血小板标本复检方法的可行性研究

目的探讨Sysm ex-2100光学法血小板计数作为低血小板标本复检方法的可行性。方法对60例Sysm ex-2100血细胞全自动分析仪阻抗法检测PLT值在(0~1100)×109/L的标本进行流式仪计数法、光学法、阻抗法、手工法的检测,以流式仪计数法作为参考方法进行比较。对100例阻抗法检测PLT<60×109/L的标本进行光学法、阻抗法、手工法的检测并比较。结果对60例标本PLT检测的流式仪计数法和光学法、阻抗法、手工法3种方法的结果进行回归分析,3种方法跟流式仪计数法的相关系数分别为0.992,0.989和0.985,均高度相关(P<0.001)。分组(PLT<100、100~300、>300×109/L)进行两样本配对t检验,在低PLT组阻抗法和流式仪计数法有统计学差异(P<0.05),在高PLT组阻抗法和手工法同流式仪计数法均有统计学差异(P<0.05)。对100例PLT<60×109/L标本的光学法、阻抗法、手工法结果进行回归分析,阻抗法和手工法对光学法结果相关系数分别为0.752和0.882。t检验结果是阻抗法同光学法有统计学差异(P<0.01),而手工法同光学法没有统计学差异(P>0.05)。结论阻抗法同流式仪计数法检测结果在血小板值低的时候有统计学差异,该误差可能影响临床诊治。而光学法在很大PLT值范围内同流式仪计数法相关性很好,且比阻抗法和手工法准确。因此光学法的准确性和重复性都较好,并且成为简便快捷的血小板复查方法,在标本量较大的实验室值得采用。     

硼替佐米治疗初治多发性骨髓瘤成功病例报告(附文献复习)

目的:探讨蛋白酶体抑制剂——硼替佐米对初治多发性骨髓瘤的疗效及对移植造血干细胞采集的影响。方法:对一例初发的中年男性多发性骨髓瘤患者使用硼替佐米 地塞米松 反应停(VTD)的方案进行化疗,获得缓解后采集外周血造血干细胞。结果:应用以硼替佐米为基础的方案治疗3个疗程后,患者即获得完全缓解;完成4个疗程化疗后成功采集足够数量的外周血造血干细胞;完成6个疗程化疗后,进入维持治疗,至今已完全缓解17个月。治疗过程中除恶心、呕吐外无其他明显不良反应。结论:硼替佐米用于初治多发性骨髓瘤有良好的治疗效果,不良反应少,不影响造血干细胞采集。     

急性白血病患者八色流式免疫表型分析起始管方案的建立

目的建立急性白血病(AL)患者八色流式免疫表型分析起始管方案。方法用胞膜CD3(CD3)、CD19、CD10、CD34、CD45、胞浆CD79a(cCD79a)、髓过氧化物酶(MPO)和胞浆CD3(cCD3)等8种抗体建立八色流式染色方案。膜表面抗体直接染色;膜内抗体经固定破膜,再染色后上机检测。将3个血小板减少患者骨髓标本分别进行抗体的单色染色和缺一色染色;最后对17例确诊的AL初发患者标本进行检测。结果用单色染色来确定染色方案中各抗体的检测电压及荧光补偿;缺一色染色中,阳性细胞群较单色染色变化均<10%,表明方案中的各抗体相互作用小。17例AL初发患者中,6例急性B淋巴细胞白血病原始细胞均为CD34和CD19阳性,5例cCD79a阳性和4例CD10阳性;4例急性T淋巴细胞白血病患者均为cCD3阳性;6例急性髓细胞白血病均为CD34和MPO阳性;1例B+T混合表型AL患者CD34、cCD3、CD19、cCD79a及CD10均为阳性,MPO和CD3为阴性,此检测方案能够确定各类AL的细胞类型。结论建立了AL患者八色流式免疫表型分析起始管方案,操作简便快速,适用于临床检测。     

初发急性髓系白血病诱导化疗后外周血MRD早期检测与临床疗效的关系

本研究旨在检测初发急性髓系白血病(AML)患者诱导化疗第8天外周血残存的白血病细胞数量,探索其与诱导缓解及生存时间之间的关系。收集华西医院血液科2009年9月至2010年6月的29例初发AML患者的临床和实验室资料,其中男13例,女16例,中位年龄41(16-75)岁。根据初诊时白血病相关免疫表型特征(LAIP),采用流式细胞术检测患者诱导化疗第8天外周血微小残留病(MRD)细胞数量;应用Kaplan-Meier法计算生存曲线,对数秩检验进行单因素生存分析,观察患者外周血化疗第8天MRD水平与治疗后完全缓解率(CR)及总体生存率之间的关系。结果表明,29例AML患者经第1疗程化疗后,7例外周血MRD水平低于0.01%(阴性组),其余22例外周血MRD水平高于0.01%(0.08%-55%,阳性组);两组患者在性别、年龄、WBC、乳酸脱氢酶水平、骨髓原始细胞比例等均无统计学差异。7例MRD阴性组中6例达CR(86%),22例MRD阳性组中6例达CR(27%),CR率差异有统计学意义(P<0.05)。随访时间1-28个月(中位时间15个月),MRD阴性组患者中位生存期为19个月,MRD阳性组患者中位生存期为9个月(P<0.05),MRD阴性组1年生存率(100%)明显高于阳性组(39.4%,P<0.01)。结论:采用流式细胞术检测AML患者诱导化疗后第8天外周血MRD水平能较好的预测患者的CR率与长期生存率,MRD阴性患者有更高的CR率和更长的生存期。