多重耐药铜绿假单胞菌同源性分析及Ⅰ型整合子研究

目的 研究临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌的同源性,分析整合子在多重耐药铜绿假单胞菌中的分布情况及所携带耐药基因盒的信息.方法 收集广东省3家三甲医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌,采用ERIC-PCR法分析菌株的同源性;PCR扩增整合子及其可变区并测序分析.结果 80株多重耐药铜绿假单胞菌分为19个型别,主要的型别为S型(n=24)、P型(n=18)和R型(n=6);Ⅰ类整合子的检出率为43.75％(35/80),所检出的整合子可变区有8种类型,分别为aacA4、aadA4a、aac(6')-Ⅱ-aadA13-cmlA 8-oxa-10a、aadB-PSE-1、aadB-cmlA1、aacA 4-aadA2、aadA 6-orfD和aacA 4-catB8-aadA1.结论 某医院存在两个克隆群的多重耐药铜绿假单胞菌的院内传播和扩散.Ⅰ类整合子是介导铜绿假单胞菌多重耐药性的因素之一.     

HMME-PDT对CNE-2细胞增殖的抑制作用

目的探讨血卟啉单甲醚介导的光动力学疗法(HMME-PDT)对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制作用。方法以血卟啉单甲醚为光敏剂,532nm激光为激发光源的光动力学疗法作用于鼻咽癌CNE-2细胞。细胞用5、10、20!g/ml浓度的光敏剂孵育2h后,用0.6、1.2、2.4、4.8、9.6J/cm2剂量的激光照射;激光功率密度为10mW/cm2。MTT法检测在HMME和激光两种变量下PDT对细胞活性的抑制作用;光镜观察PDT作用后细胞形态的变化;免疫组化法检测PCNA的表达。结果在HMME剂量为5!g/ml、10!g/ml及20!g/ml时,细胞的抑制率随着激光剂量从0.6J/cm2增加至9.6J/cm2而逐渐增加;并且和HMME及激光剂量密切相关;光镜观察结果表明PDT组与对照组相比细胞密度明显减少,细胞核浓聚、碎裂。免疫组化结果显示PDT作用后PCNA表达减少。结论HMME-PDT对CNE-2细胞的增殖有明显的抑制作用。     

新生大鼠海马区及室管膜下区神经干细胞的诱导分化：无血清培养条件下观察

背景:神经干细胞作为修复损伤神经组织的细胞源已引起学者的关注,如何有效的获取更多的神经干细胞逐渐成为重点解决的课题之一。目的:观察大鼠室管膜下区和海马回神经干细胞体外培养、传代和分化情况。设计:单一样本实验。单位:中山大学附属第三医院神经外科。材料:取出生后3dSD大鼠10只,雌雄不拘,由中山大学实验动物中心提供。巢蛋白抗体(兔抗大鼠)、神经微丝蛋白(NF-200)抗体(兔抗大鼠)、胶质纤维酸性蛋白抗体(小鼠抗大鼠)均购自Sigma公司。方法:实验于2006-09/12在中山大学基础医学院组织胚胎学实验室完成。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学要求。从新生大鼠海马、室管膜下区分离神经干细胞,采用DMEM/F12无血清悬浮的条件培养,同时在培养基中加入碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子代替血清中含有的分裂原,进行体外扩增培养、传代观察。主要观察指标:采用免疫荧光检测技术,通过检测神经干细胞表达的nestin、神经元细胞表达的神经微丝蛋白和星形胶质细胞表达的胶质纤维酸性蛋白,鉴定神经干细胞及其分化结果。结果:分离获取的细胞具有自我更新和增殖能力,原代及传代培养20代后,在倒置显微镜下仍保留典型的"细胞克隆球"特征,神经克隆球通过nestin免疫荧光染色,呈阳性反应。经诱导后,细胞克隆球细胞外迁贴壁生长,可分化为神经微丝蛋白阳性的神经元细胞和胶质纤维酸性蛋白阳性的星形胶质细胞。结论:实验分离培养出具有自我更新和增殖能力的神经干细胞,其可诱导分化为神经元样细胞和星形胶质细胞。     

急诊护理工作易引起护患纠纷的原因分析与对策

随着人们健康观念、自我保护意识、法律意识的增强，就医需求越来越高，如果需求得不到满足就易产生医患护患纠纷。通过对护患纠纷的原因(护士的自身因素；病人家属的因素)分析而作出对策，从根本上杜绝护理纠纷的发生。     

维持性血液透析患者焦虑和抑郁状态与营养状况临床分析

目的：调查血液透析患者焦虑和抑郁症状的发生情况以及与营养状况的相关关系。方法：对来自五家医院的331例维持性血液透析患者进行综合主观性营养评估（ SGA）、Hamilton 抑郁量表及 Hamilton 焦虑量表测定,采用问卷调查、临床晤谈和病史查阅的形式,用 t 检验、χ2检验、秩和检验及描述性分析等对资料进行统计分析。结果：（1）调查对象中有222例（67．07%）有不同程度的焦虑,169例（51．06%）有不同程度的抑郁。（2）有30．82%的调查对象有不同程度的营养状况不良。（3）不同程度营养不良患者的焦虑、抑郁得分差异有统计学意义。结论：维持性血液透析患者焦虑和抑郁发病率高于国外水平,与国内研究的水平接近,患者的焦虑和抑郁状态与营养不良有直接的关联。     

脑皮质微血管内皮细胞刺激神经干细胞增殖并增强向神经元分化的潜能

目的体外观察脑皮质微血管内皮细胞(CMECs)对来自大鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响响。方法采用Transwell建立神经干细胞与脑微血管内皮细胞共培养模型,通过相差显微镜形态学观察及共培养早期nestin和NF,及后期NF免疫组化检测鉴定,计算各阳性细胞数、总细胞数和阳性细胞率。结果在共培养第7天,共培养组NSCs的nestin阳性率为(64.04±9.40)%,对照组仅(9.41±4.80)%(P<0.01);NF阳性细胞率为(13.72±3.92)%,对照组仅(39.79±5.20)%(P<0.01);撤除CMECs后第4天,共培养组NSCs分化成神经元的比例为(55.42±4.75)%,对照组仅(27.18±2.62)%(P<0.01)。结论本结果提示CMECs能促进NSCs的自我更新,抑制其分化,并有增强其向神经元方向分化的潜能。     

激光治疗下肢静脉曲张围手术期护理体会

目的：探讨激光治疗下肢静脉曲张的围手术期护理措施。方法：选择我院应用静脉曲张激光（EVLT）联合手术治疗下肢静脉曲张患者408例，术前术后给予精心护理。结果：患者均一期愈合，无下肢静脉血栓等并发症发生。结论：EVLT技术具有安全、有效、微创、操作简便和不遗留手术疤痕等优点，做好手术前后的护理是保证手术成功的关键。     

自动染色仪在组织标本苏木精-伊红染色技术中的应用

自动化染色技术在组织标本制作中的应用,突破了传统操作制片的局限性,减轻了劳动强度,提高了制片的质量和数量,满足日益增长的形态学实验教学需要,为实现形态学实验教学全面开放奠定坚实基础。     

褪黑激素对新生大鼠神经干细胞向神经元样细胞分化的影响

目的 探索褪黑激素对体外培养新生大鼠神经干细胞分化的影响。方法 从新生SD大鼠室管膜下区分离依赖碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和表皮细胞生长因子（EGF）生存的神经干细胞进行培养，原代及子代细胞鉴定后用于实验。实验细胞均在无生长因子而含10mL/L胎牛血清条件下培养，经褪黑激素或Luzindole作用1周后做免疫组织化学染色，比较Map2阳性细胞出现率。结果 （1) 依赖bFGF和EGF生长的神经干细胞体外呈集落样生长，表达抗原蛋白巢蛋白（Nestin) ,无生长因子培养基中可分化形成胶质原纤维酸性蛋白（GFAP），S100蛋白，微管相关蛋白（Map2)阳性细胞。（2）褪黑激素能够提高Map2阳性细胞生成率（23．45％，21．82％）（P＜0．01）。（3）褪黑激素膜受体竞争性阻断剂Luzindole可阻断高浓度（100μmol/L）褪黑激素促神经干细胞分化作用，但不能抑制低浓度褪黑激素（10nmol/L )的作用。结论 褪黑激素能促进神经干细胞向神经元样细胞分化，不同浓度褪黑激素可能存在不同的作用机制。     

颈总动脉压诱导的小鼠移植静脉血管重构

【目的】 研究血压升高引起血管重构的机制。【方法】 手术取出麻醉后的11 ~ 12周供体C57BL/6J小鼠的下腔静脉,连接到同窝出生的受体小鼠颈总动脉,构建“静脉桥”。继而,收获受颈总动脉压作用不同时间(0,2,4,8周)后的移植静脉,经石蜡包埋HE染色。丽春红-维多利亚蓝染色以及平滑肌特异性抗体免疫组化染色后观察其血管构筑。【结果】术后各时间点均可见移植静脉血管壁增厚及新生内膜的形成,呈时间依赖性。与正常静脉[(11.10 ± 0.9)μm)]相比,术后8周血管壁[(88.97 ± 16)μm)]增厚了8倍(P < 0.01)。术后2周移植静脉新生内膜中即可见血管平滑肌细胞大量增生,4周最多,8周后数量减少,但细胞外基质明显增多。移植静脉在动脉压作用下,其弹性膜历经了断裂、合成和重建过程。【结论】 血压升高产生的机械力可直接导诱导移植的小鼠静脉粥样硬化以及弹力膜的重构。本研究可望为深一步探索高血压引起血管重构的机制及防治新策略提供有用的动物模型及实验依据。