应用患者恢复期血清初步筛选猪链球菌体内诱导表达抗原

目的利用患者恢复期血清对中国猪链球菌2型05ZY/H33强毒株体内诱导表达抗原进行初步筛选,并对建立的05ZY/H33菌株基因组表达文库及体内诱导表达抗原筛选平台的可行性进行初步验证。方法提取05ZY/H33菌基因组DNA,由Sau3AⅠ不完全酶切后回收0.5～3kbDNA片段,插入经其同尾酶BamHⅠ酶切及去磷酸化处理的pET-30a/b/c表达载体系统,转化大肠埃希菌BL21(DE3),构建05ZY/H33菌株基因组表达文库。将收集的患者恢复期血清等体积混合,经体外培养的05ZY/H33和BL21(DE3)全细胞及细菌超声裂解物吸附处理后,获得吸收血清。用此血清采用免疫印迹法筛选IPTG诱导的基因组表达文库,寻找05ZY/H33强毒株的体内诱导表达抗原。结果 05ZY/H33强毒株的基因组文库构建共得到3.2×104个重组子,重组阳性率达95%。随机挑选文库中的2000个重组子运用吸附处理后的患者恢复期血清对其进行体内诱导抗原的初步筛选,共筛到5个阳性克隆,经测序鉴定和生物信息学分析显示5个克隆子包含了05ZY/H33基因组的7个开放阅读框(ORF),其编码产物均参与细菌新陈代谢、复制增殖及损伤修复等重要的生命活动,极有可能为05ZY/H33强致病株的体内诱导抗原。结论本实验成功建立了运用中国猪链球菌2型05ZY/H33强毒株患者恢复期血清进行菌株体内诱导表达抗原筛选的技术平台,为05ZY/H33菌株体内诱导抗原的系统筛选奠定了基础。     

摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素重组蛋白活性的初步鉴定

目的 初步鉴定摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素基因重组蛋白的生物学活性.方法 提取摩氏摩根菌细胞肽聚糖成分,采用酶谱电泳法、扩散法检测重组融合蛋白对细胞壁肽聚糖层的降解活性;采用纸片法检测重组蛋白对金黄色葡萄球的抑菌作用;测定重组蛋白与抗生素的协同抑菌作用.结果 成功提取了摩氏摩根菌细胞壁肽聚糖,酶谱法、扩散法结果表明重...     

培养学生创新能力的微生物实验教学体系实践

文章旨在探讨培养学生创新能力的微生物实验教学体系实践及效果;编写《医学微生物学实验教程》;实验课独立设置,建立了新的实验课程体系,实验内容分为基本操作技能训练、综合型、探索型和设计型实验;改革实验课教学的指导方法,建立了科学的实验教学考核方法;培养学生动手能力和科研创新能力。     

2-型猪链球菌分泌性保护性抗原RfeA的确认

目的确认RTX家族胞外蛋白A(RTX family exoprotein A,RfeA)为2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的分泌蛋白。方法通过生物信息学软件分析RfeA的氨基酸序列,预测RfeA在SS2中的分布;以纯化的RfeA重组蛋白为免疫原免疫小鼠,制备RfeA鼠多抗血清,间接ELISA检测抗血清效价;以制备的RfeA抗血清为一抗,利用ELISA方法分析RfeA在05ZYH33株培养上清中的分布,通过实验证实生物信息学预测的结果。结果生物信息学软件分析RfeA氨基酸序列,预测RfeA为SS2分泌性蛋白;ELISA方法分析发现RfeA存在于05ZYH33株培养上清中,是SS2分泌性蛋白。结论实验研究结果与生物信息学预测一致,RfeA为SS2分泌性蛋白的确定为进一步研究RfeA的功能以及在SS2致病过程中扮演的角色奠定了基础。