蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用

目的探讨hSav1（human salvador1）和Mst1（MammalianSTE20-like 1）存在的相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制奠定基础。方法以Mst1 cDNA全长构建诱饵蛋白载体pGBKT7-Mst1,并对其自身转录活性进行鉴定,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝文库,挑选单克隆,从而初步筛选出与Mst1相互作用的蛋白。然后构建初步筛选出的蛋白hSav1的载体pCMV-HAhSav1,与蛋白Mst1的载体pcDNA／4TO-Flag-Mst1共转染HEK293T细胞,利用相应抗体做二者的免疫共沉淀,以验证蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用。其次构建pEGFP-hSav1质粒转染HEK293T,利用免疫荧光观察二者在细胞内的定位。结果以Mst1为诱饵蛋白在人胎肝文库筛选到包括hSav1在内的与之存在相互作用的蛋白。免疫共沉淀结果显示,hSav1蛋白可以在FLAG抗体的免疫沉淀物中检测出来,同样在hSav1抗体的免疫沉淀物中也能检测到蛋白Mst1。免疫荧光的结果显示二者荧光在细胞内存在共定位,二者的荧光可充分融合。结论蛋白hSav1与Mst1在哺乳细胞内存在某种相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制提供了线索。     

上皮膜蛋白-1作为胃肠道间质瘤耐药标志物的研究

目的 寻找胃肠道间质瘤(GIST)患者格列卫耐药的标记物,指导格列卫的临床用药.方法 采用免疫组织化学方法比较格列卫规范治疗后,耐药的患者耐药前后上皮膜蛋白-1( EMP-1)蛋白的表达水平.将GIST882细胞种植于裸鼠皮下形成移植瘤,裸鼠持续口服伊马替尼3周后传代,直至移植瘤耐药.比较耐药移植瘤与敏感移植瘤中EMP-1基因和蛋白表达水平的差异.结果 伊马替尼耐药后,患者及移植瘤肿瘤组织中EMP-1表达较耐药前显著增加,伊马替尼耐药移植瘤中EMP-1的RNA水平较敏感移植瘤增加约11倍.结论 EMP-1可以作为GIST耐药的标志物.