流式细胞技术检测肾脏移植受者pp65抗原血症的意义

背景:临床对pp65 抗原的检测主要采用免疫荧光技术,但是该方法步骤繁琐,需要对标本进行人工计数,在检测过程中受人为的影响因素较多。目的:探讨使用简便的流式细胞技术检测人巨细胞病毒 pp65 抗原血症的可行性及其特点。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-09/2008-03 在解放军总医院附属二院器官移植中心完成。材料:肾脏移植受者外周血标本145份。方法:分离人外周血白细胞,分别采用免疫荧光技术与流式细胞技术对人巨细胞病毒 pp65 抗原检测。主要观察指标:流式细胞仪在激发波长为 488 nm 处的吸收峰判断阳性检出。结果:对肾脏移植受者进行免疫荧光技术检测,在 15 例受者的 25 份标本中检出阳性,检出的特异性为 76.0%;对肾脏移植受者进行流式细胞技术检测,在 5 例受者的 11 份标本中检出阳性,检出的特异性为 54.5%。使用 Fisher 确切概率法对两种不同检测方法检出的效果进行检验,结果两种检测方法的检出效果差异无显著性意义(P > 0.05)。结论:免疫荧光技术和流式细胞技术两种 pp65 抗原检测方法的检出效果无差异,因此可以通过流式细胞技术对 pp65 抗原进行检测,并且结果更加客观。     

两种酶联免疫法检测SARS病毒特异性抗体的比较

严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome,SARS)是由新型冠状病毒引起的以呼吸道传播为主的急性传染病。目前用于检测SARS病原抗体的酶联免疫吸附 (ELISA)法是世界卫生组织 (WHO)推荐的临床检测抗体的主要方法。ELISA法测抗体又分为间接法和双抗原夹心法 ,本文就这两种方法的检测情况进行了比较。1　材料与方法1 1　血清标本　按常法分别抽取 2 0例健康人 ,2 0例发热非SARS患者和 87例住院不同时期的SARS患者静脉血 ,2h内离心分离血清 ,— 2 0℃冻存 ,1周内检测抗SARS病毒特异性抗体。1 2　试剂　间接ELISA法使…     

器官移植术后人巨细胞病毒感染的实验室诊断研究进展

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）属疱疹病毒8科，是一种有包膜的双链线性DNA病毒，直径大约200纳米，基因组长约220～245kb。同其他的疱疹病毒一样，HCMV对免疫力正常的个体不具有明显毒力，而在各种原因引起的免疫功能受到抑制的宿主中却可以被激活而发生感染。接受器官移植的患者因在术前和术后使用免疫抑制剂，所以容易发生HCMV感染。     

可溶性CD30和Th1/Th2检测在慢性移植肾功能不全患者免疫状态评估中的应用

目的探讨将血清可溶性CD30(sCD30)和外周血CD3 CD8-T淋巴细胞Th1/Th2检测用于评估慢性移植肾功能不全(CRAD)患者免疫状态的价值。方法通过分析临床资料,结合移植肾穿刺活检,选取移植术后远期(>6个月)免疫损伤为主的慢性移植肾功能不全患者(A组)、非免疫损伤为主的慢性移植肾功能不全患者(B组)和移植肾功能正常患者(C组)各15例,采用流式细胞术检测每例患者外周血CD3 CD8-T淋巴细胞IFN-γ和IL-4表达率,以IFN-γ和IL-4表达率之比作为Th1/Th2比例,同时留取标本以ELISA法行血清sCD30水平测定。结果A、B、C组患者外周血CD3 CD8-T细胞IFN-γ表达率(11.2%±6.2%、10.9%±6.4%、12.3%±6.9%)无统计学差异(P>0.05)。A组患者外周血CD3 CD8-T细胞IL-4表达率(4.0%±2.8%)明显低于B、C组(7.9%±5.5%、10.2%±7.5%,P<0.01),且其Th1/Th2比例(3.1±1.1)明显高于B、C组(1.5±0.5、1.4±0.5,P<0.01)。B、C组患者外周血CD3 CD8-T细胞IL-4表达率和Th1/Th2比例无统计学差异(P>0.05)。A组患者血清sCD30水平(20.2±12.4ng/ml)明显高于B、C组(7.8±3.1ng/ml、7.6±3.0ng/ml,P<0.01),而B、C组患者血清sCD30水平无统计学差异(P>0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,当Th1/Th2比例取1.95时,鉴别以免疫损伤为主的CRAD的敏感度为80%,特异度为90%;血清sCD30水平取10.0ng/ml时,鉴别以免疫损伤为主的CRAD的敏感度为93.3%,特异度为86.7%。结论以免疫损伤为主的CRAD患者大都存在Th1/Th2平衡失调(向Th1方向偏移),且血清sCD30水平相对较高。根据外周血CD3 CD8-T细胞Th1/Th2比例和血清sCD30水平鉴别以免疫损伤为主的CRAD具有较高的敏感性和特异性。     

肺结核患者血清中ADA、TBA以及HS-CRP等指标水平的调查分析

肺结核是由结核杆菌引起的一种慢性肺部传染病.异烟肼、利福平和吡嗪酰胺是治疗结核病的三种主要药物.肝损害是这些药物最常见的严重不良反应之一.本文通过对63例肺结核患者血清中的ADA、总胆汁酸.TBA等指标的检测以调查肝功能的损伤情况.     

肾移植术后受者人巨细胞病毒巢式PCR检测

目的探讨巢式PCR检测肾移植术后受者人巨细胞病毒（HCMV）DNA的方法，并与ELISA法进行比较。方法针对HCMVAD169株IEA基因设计两对巢式PCR引物，对50例肾移植术后受体血、尿标本进行HCMVDNA检测。分离血清作ELISA检测IgG、IgM。结果血液巢式PCR阳性率56％，尿液阳性率46％；ELISA法阳性率：IgG82％，IgM28％，IgG＋IgM28％。两种方法的阳性率进行统计学分析，P〈0．05，存在统计学差异。结论巢式PCR是一种敏感、快速诊断HCMV感染的方法，灵敏度及特异性均高于传统ELISA法，并能弥补ELISA的假阴性。不仅为临床HCMV疾病的诊断与治疗，同时也为选择普遍性预防抑或症状发生前的预先治疗提供可靠的实验室依据。     

地奥司明对肾缺血再灌注大鼠肾组织MPO和中性粒细胞CD11b、CD54及CD62L水平的影响

 目的：观察地奥司明（DOSM）对肾缺血/再灌注（I/R）大鼠肾组织髓过氧化物酶（MPO）和中性粒细胞CD11b、CD54及CD62L表达水平的影响。方法: 180只SD大鼠随机分成3组:假手术组(SO)、肾缺血/再灌注模型组(I/R)和地奥司明+肾缺血/再灌注模型组(DOSM+I/R)。采用ELISA方法测定肾脏组织中MPO的水平,流式细胞分析法检测中性粒细胞表面CD11b、CD54和CD62L的表达水平。结果: 在1h、3h、6h、12h、24h和48h不同时间点的肾组织中,I/R和DOSM＋I/R两组MPO活性均随时间逐渐升高,于6h达最高,后逐渐下降,两组相比有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。中性粒细胞CD11b、CD54及CD62L的表达在相同时段I/R组显著高于SO组（P＜0.05或P＜0.01);而在DOSM+I/R组显著低于I/R组（P＜0.05或P＜0.01)。结论：DOSM可显著降低肾I/R病理过程中MPO活性,显著降低中性粒细胞CD11b、CD54及CD62L的表达,有助于减轻I/R时炎性细胞的浸润。     

肾移植急性排斥反应时Bcl-2/Bax及Fas/FasL蛋白表达的变化

背景：在器官移植急性排斥反应过程中，靶细胞的凋亡被认为是移植物功能丧失的主要作用途径之一。细胞凋亡受一系列分子调控，其中Bcl-2家族起着决定性作用；Fas系统介导的细胞凋亡亦在移植免疫中起十分重要的作用。 目的：分析移植肾发生急性排斥反应时Bcl-2／Bax，Fas／FasL蛋白表达规律与急性排斥反应预后的关联。 设计、时间及地点：观察对比实验，于2002／2005在解放军总医院第二附属医院器官移植中心完成。 对象：收集肾移植术后发生急性排斥反应的移植肾穿刺活检蜡块标本30例；另选同期20例无明显排斥反应表现肾移植患者的移植肾穿刺活检蜡块标本作为对照组。 方法：应用免疫组织化学方法检测移植肾急性排斥反应穿刺活检标本中Bcl-2／Bax，Fas／FasL蛋白的表达水平，并与对照组进行对比。 主要观察指标：急性排斥组和对照组移植肾穿刺活检标本中Bcl-2／Bax，Fas／FasL蛋白的表达水平。结果：①Bcl-2／Bax，Fas／FasL蛋白主要在肾小管上皮细胞中表达。②两组肾小管上皮细胞中Bcl-2表达水平差异无显著性意义（P〉0．05），急性排斥反应组肾小管上皮细胞中Bax，Fas及FasL蛋白表达水平均高于对照组（P〈0．05）。结论：在肾移植急性排斥反应中Bcl-2家族可能参与调控细胞凋亡，引起移植肾免疫损伤；Fas及FasL可能直接参与移植肾急性排斥反应，造成肾小管上皮细胞凋亡，引起移植肾免疫损伤。     

可溶型LAIR分子与肾移植术后巨细胞病毒肺炎的关系

目的 探讨可溶型LAIR分子(sCD305,CD306)与肾移植术后巨细胞病毒(CMV)肺炎的关系. 方法肾移植受者血清19份,分为肺炎组(10份)和对照组(9份);以夹心ELISA方法定量检测血清中sCD305和CD306的浓度;用CHISS软件进行:检验. 结果 2组sCD305浓度均不符合正态分布,肺炎组波动于0.000～3.039 μg/L,对照组波动于0.000～8.375μg/L;肺炎组CD306浓度不符合正态分布,波动于0.000～0.017 μg/L,对照组符合正态分布.浓度为(0.046±0.035)μg/L;CD306在CMV肺炎患者血清内的表达降低,与对照组相比差异有统计学意义(P=0.000),而sCD305在2组的表达差异无统计学意义(P=0.316). 结论 CD306在肾移植术后发生CMV肺炎的患者血清内表达明显降低,CMV-PP65抗原检测联合CD306检测,有助于临床准确早期诊断CMV肺炎.     

SARS患者住院时特种蛋白检测的临床意义

1　对象和方法1.1　对象 30例已确诊的非典型肺炎患者中男 15例 ,女15例 ,年龄 19～ 5 1岁 ,平均年龄 (36 .4± 10 .1)岁。1.2　正常对照组 30例体检的正常人中男 15例 ,女 15例 ,年龄 2 1～ 5 1岁 ,平均年龄 (33.8± 9.2 )岁。1.3　血清标本SARS患者和正常人 ,按常规留取血标本 ,2h内分离血清 ,- 2 0℃冻存 ,1～ 3d内完成相关测试。SARS住院后第 1天留血标本。1.4检测方法速率散射免疫比浊法 ,由德灵公司的BN Ⅱ特种免疫蛋白分析仪检测血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM ,补体C3、C4及CRP。1.5统计学方法检测数据用均数±标准差 (x±s)…