产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的耐药性研究

目的了解我院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌对临床常用抗生素的耐药情况，为临床治疗和控制ESBLs菌感染提供依据。方法从2003．1-2005．3我院住院部各科室患者送检的标本中分离出肺炎克雷伯菌和太肠埃希氏菌共229份（同一患者同一菌株只入选一次），其中肺炎克雷伯菌59例，大肠杆菌170例，采用Microscan-walkaway96全自动微生物分析仪NC21板进行细菌鉴定及12种抗菌药物的药敏测定，抑酶剂增强纸片法进行ESBL检测。结果产ESBLs菌56株，非产ESBLs菌173株，总检出率为28．14％（56／229），其中产ESBLs肺炎克雷伯杆菌12株，检出率为20．34％（12／59），产ESBLs大肠杆菌44株，检出率为25．88％（44／170）。产ESBLs菌与非产ESBLs菌对亚胺培南100％敏感。除亚胺培南、哌拉西林／他巴唑坦、阿米卡星外，产ESBLs菌对其他9种抗菌药物的耐药率均高于非产ESBL菌，其中，对阿莫西林、氨曲南、头孢曲松、头孢他啶均100％耐药。产ESBLs菌对喹诺酮类抗生素环丙沙星的耐药率为69．6％，作为产ESBL菌感染用药应慎重考虑。结论产ESBLs菌对常用抗生素耐药率较高．碳烯青霉素类抗生素亚胺培南是治疗产ESBL细菌感染的首选药物。     

外泌体在肺移植中的研究进展

外泌体是一种由绝大多数细胞分泌的微小囊泡,在体内生理以及病理过程中发挥重要作用.发生排斥反应的肺移植受者(LTxR)循环外泌体中含有不匹配的人类白细胞抗原(HLA)和肺相关自身抗原(如K-α1微管蛋白和胶原蛋白V)等,外泌体可能是由自身抗体诱导产生的,循环中的外泌体引发免疫反应,导致肺移植受者发生排斥反应.本文从3个方...     

HLA-G~+调节性T细胞在肾移植受者外周血中的比例及其功能研究

目的 确定人类白细胞抗原-G(HLA-G)区别于CD4~+ CD25~+ FoxP3~+ 调节性T细胞的细胞表型特征,观察HLA-G~+ T细胞在混合淋巴细胞培养中的免疫调节作用及其在移植免疫调节中的活性和意义.方法采用流式细胞术检测肾移植受者外周血CD4~+ HLA-G~+ GD8~+ HLA-G~+ T淋巴细胞的含量,分选HLA-G~+ T淋巴细胞,分析细胞表型,采用RT-PCR检测调节性T细胞的特异性标志FoxP3在HLA-G~+ T淋巴细胞的表达情况,以淋巴细胞分离液分离的PBMC、CD4~+ CD25~(high)、CD4~+ CD25~-细胞作为对照.取5对活体肾移植供受者的淋巴细胞进行混合培养,分别加入流式细胞术分选纯化后的HLA-G~+ 、HLA-G~- T淋巴细胞,对照组只加入供、受者淋巴细胞,MTT法观察细胞增殖和抑制情况.结果 肾移植受者外周血CD4~+ HLA-G~+ 、CD8~+HLA-G~+ T淋巴细胞表达率分别为1.95%±0.34%、3.13%±0.56%.流式细胞术分选HLA-G~+ T淋巴细胞后纯度可达55.0%～75.1%.RT-PCR 结果证明上述细胞CD25、FoxP3均为阴性表达.与HLA-G~- 组、对照组比较,混合淋巴培养3d后HLA-G~+ 组细胞增殖率明显受到抑制(P<0.05).结论 在肾移植受者外周血中存在CD4~+ HLA-G~+ 、CD8~+HLA-G~+ T淋巴细胞,这类细胞不同于CD4~+ CD25~+ FoxP3~+调节性T细胞,它们不表达CD25和FoxP3而表达免疫耐受分子HLA-G,在混合淋巴培养体系中,能显著抑制反应性细胞增殖,具有免疫调节功能.     

大鼠脐带源间充质干细胞的分离及生物学性状

背景:关于大鼠骨髓来源的间充质干细胞用于移植免疫耐受及进行组织修复的研究很多,但尚无脐带来源间充质干细胞的相关研究.目的:建立从大鼠脐带分离间充质干细胞的方法,并观察其生物学性状.方法:大鼠脐带经酶消化和组织块培养两种方法进行分离培养,于DMEM-LG培养基中培养,倒置显微镜观察细胞形态,细胞计数绘制生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期及细胞表型,免疫组织化学染色检测其体外诱导成脂肪和成骨分化的能力.结果与结论:两种方法均能成功地从大鼠脐带中获得大量的间充质干细胞:原代培养显示,胶原酶消化法比组织块培养法的效率更高,大约10 d就可以进行传代,而组织块培养法要14 d才能传代:传代扩增两者之间没有差别.免疫表型分析显示,大鼠脐带源细胞表达黏附分子和基质细胞标记CD90、CD106,不表达造血细胞标记CD34、CD45.体外诱导实验证实,大鼠脐带间充质干细胞具有成脂肪和成骨分化的能力.     

内皮抑制素抑制RhoA/ROCK信号通路减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤实验研究

背景 急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是一种由多种诱因引发的急性肺部炎症性疾病,目前无有效防治手段。内皮抑制素(endostatin,ES)可特异性抑制血管内皮细胞的增殖和迁移,广泛应用于肿瘤治疗中,但其在急性肺损伤中的作用尚不明确。目的 探讨内皮抑制素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的影响及可能机制。方法 将36只雄性C57BL/6小鼠随机分为6组,分别为对照组、LPS组(模型组)、ES干预组A(LPS+1 mg/kg ES 6 h)、ES干预组B(LPS+1 mg/kg ES 12 h)、ES干预组C(LPS+5 mg/kg ES 6 h)、ES干预组D(LPS+5 mg/kg ES 12 h),每组6只。LPS组：将LPS溶液(15 mg/kg)通过肺部液体定量雾化器装置递送至小鼠肺,作用24 h,建立小鼠急性肺损伤模型;对照组：在相同时间点以同样的方式递送等体积0.9%氯化钠注射液,作用24 h;ES干预组：LPS刺激小鼠24 h后,腹腔注射不同剂量(1 mg/kg或5 mg/kg)的ES注射液,分别作用6 h...     

环保脱蜡液替代二甲苯在肝肾标本病理制片中的应用

目的 探讨环保脱蜡液替代二甲苯作透明脱蜡剂在肝肾标本病理制片过程中的应用.方法 取解放军第309医院器官移植中心肝、肾穿刺标本,经固定、水洗、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色等步骤制成病理切片,其中二甲苯均用环保脱蜡液替代,进行常规HE染色、免疫组织化学染色、Masson三色染色,观察染色结果,进行病理诊断.结果 用环保脱蜡液替代二甲苯作透明脱蜡剂,切片过程顺利,组织无变脆、变硬现象;染色后,背景清晰、颜色鲜明,易于观察.结论 环保脱蜡液可替代二甲苯在肝肾标本病理制片中发挥作用,值得在病理诊断科室及基础研究科室推广.     

BK病毒感染实验室诊断与研究进展

BK病毒是人类多瘤病毒中的一种,约80%的正常人既往有BK病毒感染史,感染的病毒多以潜伏状态存在于肾小管上皮细胞中.BK病毒大部分由于免疫功能缺陷或大量使用免疫抑制剂后被激活.肾移植受者中BK病毒复制可以进一步发展成为BK病毒相关性肾病(BK virus associated nephropathy,BKVAN),此类疾病患者中60%～70%会发生远期的移植肾失功,所以越来越受到人们的广泛关注.     

联合检测巨细胞病毒感染在原位肝移植术后诊断的应用

目的比较外周血巨细胞病毒（CMV）定量PCR检测,CMV-pp65抗原检测及组织病理学检查对原位肝移植术后CMV感染诊断的价值。方法回顾分析45例肝移植患者临床资料,统计三种检查结果,并结合文献进行讨论。结果三种方法检查均显示,有18例患者发生巨细胞病毒感染,18例均为无临床症状的巨细胞病毒感染。经更昔洛韦治疗,18例全部治愈。结论外周血CMV定量PCR,CMV-pp65抗原检测及组织病理学检查均能作为肝移植术后CMV感染早期诊断的有效手段,CMV定量PCR更敏感,CMV-pp65抗原检测更特异,组织病理学检查则具有创伤性,三者的共同应用能够对CMV感染患者做出早期诊断并且指导治疗。更昔洛韦能够有效治疗CMV感染。     

HLA-G与肾移植术后巨细胞病毒活动性感染的相关性研究

目的 研究HLA-G与肾移植术后巨细胞病毒(CMV)活动性感染的相关性,分析其作用机制及意义。方法 初次肾移植受者215例,按照术后是否发生CMV活动性感染将受者分为CMV阳性组和CMV阴性组,采用流式细胞术检测膜结合型HLA-G1 (mHLA-G1)的表达,采用酶联免疫吸附试验检测可溶性HLA-G5 (sHLA-G5)的表达,采用逆转录聚合酶链法检测HLA-G mRNA的表达,采用蛋白质印迹法验证sHLA-G5的表达,采用免疫组织化学法和HE染色观察移植肾组织中HLA-G的表达,采用ROC曲线分析sHLA-G5水平预测CMV活动性感染的Cutoff值。结果 术前两组间HLA-G表达的差异无统计学意义(P＞0.05)。术后两组间外周血淋巴细胞表面mHLA-G1均呈低表达,CMV pp65阳性时亦无明显变化。CMV阳性组外周血中CD14+ mHLA-G1+细胞显著升高(P＜0.05),达到(45.53±17.32)％,转阴后下降至(10.22±5.78)％。CMV阳性组外周血中sHLA-G5表达水平明显升高(P＜0.05),其预测CMV活动性感染的最适Cutoff值为202.9μg/L,具有很高的诊断准确性。CMV阳性组受者外周血中HLA-G mRNA的表达水平均显著高于CMV阴性组(P＜0.05)。12例CMV活动性感染受者移植肾活检样本中,10例肾小管上皮细胞HLA-G表达呈阳性。结论 HLA-G在外周血中的表达显著升高和移植肾肾小管上皮细胞的阳性表达可能是保护移植肾功能的机制之一。以sHLA-G5表达水平202.9μg/L作为Cutoff阈值,具有很好的判断CMV活动性感染的价值。