硼替佐米在肾脏移植抗体介导排斥反应中的临床应用(附1例报告)

目的高选择性蛋白酶体抑制剂硼替佐米,可特异性清除体内活化的浆细胞,对肾移植后抗体介导的排斥反应(antibody-mediated rejection,AMR)具有重要治疗作用。总结本院首例硼替佐米(bortezomib)治疗AMR的临床资料,为AMR治疗提供新的思路。方法 1例二次肾移植患者,移植后肌酐恢复到正常值,移植后20天出现急性排斥反应,恢复透析。活检病理证实为细胞性和抗体介导的混合性排斥反应。应用硼替佐米[第1天(1.3mg/m2)、第4天(1.0mg/m2)、第8天(1.0mg/m2)]同时联合甲泼尼龙250mg/次和双膜法血浆置换。观察T淋巴细胞亚群、CD139和CD19表达、二次病理活检,群体反应性抗体及血肌酐等变化。结果硼替佐米应用后随访31个月,各种指标变化:1血肌酐恢复并稳定在140umol/L左右;2PRA由最高66.7%,下降至0;3浆细胞表达在第1剂硼替佐米后先明显下降后反弹升高;4病理穿刺检测:C4D染色由强阳性变为阴性,细胞性排斥反应由ⅡA变为可疑;5出现血小板移抑制、低血压、3级周围神经病变等。结论硼替佐米可清除体内活化的浆细胞,对肾移植术后抗体介导的排斥反应的治疗具有良好的临床疗效。为肾脏移植后抗体介导的排斥反应的治疗提供一种新的治疗思路。     

外周血中性粒细胞CD64检测在肾移植受者肺部感染诊断中的应用价值

目的 探讨肾移植受者外周血中性粒细胞CD64指数在移植后细菌和巨细胞病毒(CMV)感染中的应用价值.方法 2007年1月至2010年7月间79例受者纳入研究,术后受者均采用以他克莫司为基础的免疫抑制方案.依据病原学诊断结果分为细菌感染组(42例)、CMV感染组(17例)以及无感染的功能稳定组(20例).CMV感染的诊断采用间接免疫荧光方法.采用流式细胞术检测移植前后受者外周血CD64指数和T淋巴细胞绝对值,用全自动血细胞分析仪检测白细胞数量和中性粒细胞的数量.结果 功能稳定组、细菌感染组和CMV感染组术前外周血白细胞、CD3+细胞和中性粒细胞绝对值的差异无统计学意义(P＞0.05).功能稳定组术后3个月、细菌感染组和CMV感染组感染时受者外周血的白细胞、CD3+细胞和中性粒细胞绝对值的变化趋势一致,即CMV感染组绝对值均低于功能稳定组和细菌感染组,而细菌感染组高于功能稳定组,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).术前以及术后1、3、7和14d时3组受者外周血中性粒细胞CD64指数的差异无统计学意义(P＞0.05).细菌感染组感染时中性粒细胞CD64指数为4.087±1.485,与功能稳定组术后3个月时的1.031±0.412相比较,差异有统计学意义(P＜0.05);细菌感染组与CMV感染组感染时的1.694±0.801相比较,差异也有统计学意义(P＜0.01);CMV感染组感染时与功能稳定组术后3个月相比较,差异无统计学意义(P＞0.05).CD64指数预测细菌感染的最适cut off值为1.51,其敏感性为95.3％,特异性为86.5％,曲线下面积(AUC)为0.91.CD64指数预测CMV感染的最适cut off值为1.48,其敏感性为52.9％,特异性为90.0％,AUC为0.76.结论 CD64指数可以作为诊断肾移植受者细菌感染的参考指标,具有较高的敏感性、特异性及准确性.     

受者同系骨髓间充质干细胞对心脏移植大鼠的免疫调节作用

目的 观察静脉注射受者同系骨髓间充质干细胞(MSC)对大鼠心脏移植免疫反应的影响.方法 以20只成年雄性Lewis大鼠作为心脏供体,20只成年雄性Wistar大鼠作为受体,将其随机分为2组,每组10只,行颈部心脏移植:对照组(A组)手术后24h,经尾静脉注射3ml 0.9％氯化钠注射液;MSC处理组(B组)手术后24h,经尾静脉注射2×106个MSC(悬浮于3ml 0.9％氯化钠注射液中).术后1周,每组随机取受体大鼠4只,检测静脉血及移植物CD4+、CD8+、CD4+CD25high、CD4+CD25highfoxp3+T细胞占总淋巴细胞的比例,计算CD4+/CD8+比值.其余6只大鼠用于继续观察移植物存活时间.结果 A组大鼠移植心脏存活7.2±1.3d,B组大鼠移植心脏存活14.8±2.9d,两组间差异有统计学意义(P＜0.01).B组静脉血中CD4+/CD8+值、CD4+CD25highT细胞占总淋巴细胞的比例、CD4+CD25highFoxp3+T细胞占总淋巴细胞的比例(分别为1.18±0.07、2.51％±0.56％、2.05％±0.62％)均明显高于A组(分别为0.49±0.05、0.96％±0.19％、0.82％±0.09％),差异有统计学意义(P＜0.01).移植心脏中CD4+/CD8+值在两组间无统计学差异(P＞0.05);B组移植心脏中CD4+CD25highT细胞及CD4+CD25highFoxp3+T细胞占总淋巴细胞的比例(分别为2.74％±0.28％、2.54％±0.31％)均明显高于A组(分别为0.61％±0.06％、0.53％±0.06％),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 静脉注射受者同系骨髓MSC可诱导大鼠心脏移植免疫耐受,延长移植心脏的存活时间.     

134例结核杆菌5种耐药基因的检测

应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）方法分析134例临床分离株的5种结核杆菌（MT）耐药基因突变情况。结果表明，耐吡嗪酰胺（PZA）pncA基因，耐链霉素（SM）rpsL基因，耐利福平（REP）rpoB基因，耐异烟肼（INH）katG基因，耐乙胺丁醇（EMB）embB基因的突变率分别为42．7％，71．7％，78．9％，68．6％，43．9％。证实MT存在多种耐药基因突变的情况。但MT药敏实验与5种耐药基因突变率并不一致，说明MT的耐药除基因突变外，尚有其他影响因素存在。     

肺结核和肺外结核患者外周血淋巴细胞亚群的表达及临床意义

目的 分析肺结核和肺外结核患者的免疫特点及差异,以指导临床治疗.方法 采用流式细胞术(FCM)检测40例肺结核(肺结核组),33例肺外结核(肺外结核组)及30例健康体检(对照组)外周血CD3+细胞、CD3+ CD4+细胞、CD3+ CD8+细胞、NK细胞、B细胞的表达及CD3+ CD4 +/CD3+ CD8+比值,并进行比较分析.结果 肺结核组、肺外结核组CD3+、CD4+表达率与对照组对比差异有统计学意义(P＜0.01);CD3+ CD4 +/CD3+ CD8+比值、CD8+表达率与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).肺外结核组NK细胞、B细胞表达率与肺结核组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肺结核和肺外结核患者均伴有细胞免疫功能紊乱,外周血淋巴细胞亚群水平评估有助于了解细胞免疫状态,可为临床免疫干预提供理论依据.     

地奥司明对肾缺血／再灌注大鼠肾组织PECAM-1表达的影响

摘要：目的观察地奥司明（diosmin,DOSM）对肾缺血／再灌注（ischemia／reperfusion,I／R）大鼠肾组织PECAM一1表达水平的影响,并探讨其对肾脏的保护机制。方法150只SD大鼠随机分成3组：假手术（shamoperation,SO）组、肾缺血／再灌注模型组（I／R）和地奥司明＋肾缺血／再灌注模型组（DOSM＋I／R）。在再灌注不同时间点分别采用免疫组化及Western免疫印迹方法测定肾脏组织中PECAM-1的表达水平。结果在1h、6h、12h、24h和48h不同时间点的肾组织中,I／R和DOSM＋I／R两组PECAM-1的表达水平均随时间逐渐上调,并于48h达最高。而在DOSM组显著低于I／R组俨〈0．05或P〈0．01）。Western免疫印迹与免疫组织化学检测结果基本一致。结论DOSM可显著降低肾I／R病理过程中PECAM-1的表达,有助于减轻I／R时炎性细胞的浸润,从而减轻缺血再灌注损伤,保护肾功能。     

肾移植排斥反应中细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4的作用

背景：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4是新近发现的共刺激分子,在肿瘤及自身免疫性疾病中研究较多,在肾移植领域缺少研究。目的：探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4在肾移植排斥反应中的作用。方法：纳入肾移植患者50例,根据移植后肾功能分为2组,急性排斥组20例,移植肾功能稳定组30例。同时选择30例健康查体者作为健康对照组。分别抽取外周静脉血,采用ELISA法及流式细胞术检测观察对象血清及外周血淋巴细胞中的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4水平。结果与结论：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4在肾移植后急性排斥组、肾功能稳定组及健康对照组血清中的表达水平差异有显著性意义(F=70.008 1,P=0.000 0)。肾功能稳定组显著低于健康对照组(P=0.000 0),急性排斥组显著低于健康对照组(P=0.000 0),急性排斥组显著低于肾功能稳定组(P=0.000 0)。细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4在肾移植后急性排斥组、肾功能稳定组及健康对照组淋巴细胞中的表达水平差异无显著性意义(F=1.865 6,P=0.161 7)。提示细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4在肾移植患者发生排斥反应时血清中表达减低,具有一定的相关性,可能参与了排斥反应的发生。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

人巨细胞病毒活动性感染与器官移植受者T淋巴细胞亚群分类的变化

目的 研究器官移植受者T淋巴细胞亚群分类与人巨细胞病毒活动性感染的关系.方法 使用免疫荧光技术对2006年9月-2008年1月采集的27例器官移植受者外周血的样本pp65抗原进行检测,同时使用流式细胞技术上述样本的T淋巴细胞亚群进行分析.结果 非活动性感染组与活动性感染组CD3+淋巴细胞含量分别为(75.96±8.18)%和(67.75±17.39)%,差异无统计学意义(P>0.05);非活动性感染组与活动性感染组CD4+淋巴细胞含量分别为(53.37±4.38)%和(29.25±9.38)%,非活动性感染组高于活动性感染组,差异有统计学意义(P<0.01);非活动性感染组与活动性感染组CD8+淋巴细胞含量分别为(20.73±4.45)%和(36.12±15.60)%,非活动性感染组低于活动性感染组,差异有统计学意义(P<0.01)}非活动性感染组与活动性感染CD4+/CD8+比值分别为2.64±0.53和1.07±0.45,非活动性感染组高于活动性感染组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 非活动性感染组与活动性感染组中CD3+淋巴细胞百分含量差异无统计学意义,即T淋巴细胞的含量差异无统计学意义,因此单纯检测CD3+淋巴细胞对鉴别诊断无使用价值;HCMV抗原在体外主要刺激CD8+淋巴细胞增殖,活动性感染组中外周血CD8+淋巴细胞高于非活动性感染组,致使CD4+淋巴细胞与CD8+淋巴细胞比值下降,甚至倒置.     

单中心肾移植受者HLA抗原分布频率分析

目的分析肾移植受者HLA-A、B、DR和DQ抗原分布频率。 方法收集2017年1月至2018年6月在解放军总医院第八医学中心接受肾移植的791例受者HLA抗原检测数据,分析HLA-A、B、DR和DQ抗原种类和分布频率。 结果HLA-A抗原共出现18种,其中A2、A11和A24(9)抗原分布频率较高,分别为30.59%、17.83%和15.68%;A2403、A34(10)和A66(10)抗原分布频率最低,均为0.06%。HLA-B抗原共出现42种,其中分布频率最高的是B13(12.64%),分布频率最低的是B44、B41和40∶40(均为0.06%)。HLA-DR抗原共出现16种,其中DR15(2)、DR4和DR12(5)分布频率较高,分别为14.60%、13.65%和13.40%;DR6分布频率最低(0.19%);DR15(2)与DQ6(1)具有强连锁反应(90.48%)。HLA-DQ抗原共出现7种,DQ7(3)抗原分布频率最高(24.91%),DQ8(3)分布频率最低(5.50%)。 结论肾移植受者HLA-A、B、DR和DQ抗原中,A2、B13、DR15(2)和DQ7(3)分别为分布频率最高的抗原。分析HLA抗原分布频率有利于寻找HLA匹配的供者。     

抗CD25单克隆抗体对CD4+CD25high调节性T细胞的影响

目的 评价抗CD25单克隆抗体对活体肾移植受者外周血CD4 CD25high调节性T细胞(Treg)的影响.方法 观察14例活体肾移植受者外周血CD4 CD25high T细胞百分比和FoxP3mRNA表达水平的变化,应用流式细胞仪FACS Calibur和CellQuest软件行双色流式细胞计数和结果分析,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对肾移植受者外周血单个核细胞(MNC)的FoxP3基因水平进行检测.结果 在移植术后3d、13d,CD4 CD25high T细胞占CD4 比例显著升高;在移植后1个月内,CD4 CD25high T细胞比例升高约至原来的3倍.移植术后13d、17d、27d时外周血FoxP3 mRNA表达明显高于移植术后3d.在肾移植术后的不同时间抗CD25单克隆抗体使用组受者的CD25 T细胞百分比明显低于对照组(未使用抗CD25单克隆抗体).抗CD25单克隆抗体使用组与对照组两组间比较,术后3d、13d,抗CD25单克隆抗体组CD4 CD25high T细胞占CD4 的比例明显降低,术后3d对照组、抗CD25单克隆抗体使用组分别为1.24%±0.15%、2.25%±0.24%,P=0.00;术后13d为3.75%±0.38%、7.28%±0.51%,P=0.00.然而,术后17d、27d后,抗CD25单克隆抗体使用组的CD4 CD25high T恢复到对照组水平,两组间CD4 CD25high T细胞占CD4 的比例无统计学差异,即第17d为3.72%、0.26%、4.43%、0.44%,P=0.17,27d为9.00%±0.30%、8.31%±0.33%,P=0.16.在肾移植术后不同时间,受者外周血FoxP3mRNA表达水平在两组之间相似,无统计学差异,说明FoxP3mRNA表达水平并没有受到体内注射抗CD25单克隆抗体影响.结论 抗CD25单克隆抗体的使用对活体肾移植受者外周血CD4 CD25high调节性T细胞在一定时间具有暂时性的影响,而FoxP3 mRNA表达水平没有受到影响.