人胆囊上皮细胞优化培养及其炎症模型建立

本研究结合国内外文献报道,进行胆囊上皮细胞(human gallbladder epithelial cells,HGBEC)的优化培养并建立其炎症模型. 1材料与方法 1.1材料 正常胆囊2枚,DMEM培养基(Gibco),Ⅳ型胶原酶(Sigma),包被液(Ⅳ型胶原酶配成200g/L),200 ml/L小牛血清(成都哈里生物公司),人内皮细胞生长因子(hEGF)(Sigma),CK19抗体(DAKO),人白介素1β(hIL-1β)(Roche公司),TNF-α、IL-6放免测定药盒(北京放射免疫研究所).     

肝细胞癌Period1 表达与预后的关系

目的：探讨Period1在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及意义。 方法：用RT-PCR与Western blot法检测30例HCC组织与其癌旁肝组织及5例正常肝组织中Period1 mRNA与蛋白表达;甲基化特异性PCR检测HCC组织与癌旁肝组织中Period1启动子甲基化水平;免疫组化检测67例HCC组织及其癌旁肝组织石蜡切片中Period1蛋白的表达;分析Period1的表达与HCC患者临床病理特征及预后的关系。 结果：HCC组织Period1 mRNA和蛋白的表达水平均较癌旁肝组织与正常肝组织明显降低（均P<0.05）,而两者在癌旁肝组织与正常肝组织间差异无统计学意义（均P>0.05）;HCC组织Period1启动子甲基化水平较其癌旁肝组织明显增高（均P<0.05）。HCC组织石蜡切片中Period1阳性表达率为47.8%,而癌旁肝组织阳性表达率为83.6%,差异有统计学意义（P<0.05）;Period1表达与HCC分化程度、结节数目、有无静脉浸润有关（均P<0.05）;Period1阳性表达HCC患者中位复时间与中位生存时间均明显短于阳性者（均P<0.05）。 结论：Period1在肝癌中表达下调可能与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关;启动子甲基化可能是Period1表达下调的重要机制。     

干扰素-α对CCL13/HBx细胞生长及侵袭转移潜能的抑制作用

目的 观察干扰素-α对恶性转化的CCL13/HBx细胞的生长和侵袭转移潜能的抑制效应.方法 采脂质体法将pcDNA3.1-HBx质粒转入CCL13细胞,将CCL13/HBx细胞分别在普通条件下培养或与干扰素-α共培养,采用绘制生长曲线、平板集落形成实验、划痕愈合实验、体外侵袭力、体内裸鼠成瘤实验分别检测CCL13/HBx、INF-α-CCL13/HBx、CCL13/PcDNA3.1细胞在体内、体外的生长及运动迁移能力的差异.结果 pcDNA3.1-HBx质粒转染CCL13细胞后在该细胞中稳定表达,CCL13/HBx细胞生长明显快于INF-α-CCL13/HBx和CCL13/PcDNA3.1细胞,克隆生成率明显增高(31.2%比10.8%比12.4%,P<0.05),划痕愈合能力明显增强,穿过人工基底膜的细胞数明显增多[(41.6±3.1)/HP比(7.4±1.2)/HP比(9.2±1.6)/HP,P<0.05].干扰素-α治疗组CCL13/HBx细胞裸鼠皮下成瘤体积减小[(2.4±0.2)cm3比(4.2±0.3)cm3,P<0.05].结论 CCL13/HBx细胞较CCL13/pcDNA3.1细胞具有更强的生长和侵袭转移潜能,干扰素-α能明显抑制HBx蛋白所诱导的细胞恶性表型.     

成人间活体肝移植供肝的后台准备

目的 探讨成人活体肝移植供肝的灌注和管道重建的技术。方法 回顾性分析41例成人活体肝移植供肝的后台处理临床资料。结果 41个供肝,均为不包括肝中静脉的右半肝,供者男9例,女32例,年龄19～65岁。供肝切取后经门静脉灌注HTK液2～3L（平均2.45L）。只有一支门静脉右支者35例,右前支＋右后支门静脉6例。右肝管29例,右前叶肝管＋右后叶肝管10例,右后叶肝管＋右前上段支＋右前下段支2例。肝静脉：右肝下静脉＋V_5/V_814例,只有一支右肝静脉15例,2支肝中静脉分支8例,4例有3支肝中静脉分支。肝中静脉分支直径〉0.5cm者均重建,重建V_5/V_8和右肝下静脉28例次（70.0%）,右前叶肝管和右后叶肝管整形6例（14.6%）,右后叶肝管和右前叶下段肝管整形3例（7.3%）,门静脉整形2例（4.8%）,门静脉搭桥4例（9.7%）。结论 成人活体肝移植的供肝后台处理与尸体肝移植有明显的不同,其断面的管道处理直接影响移植肝的存活和预后。     

小儿巨大肝母细胞瘤成功切除一例

小儿肝母细胞瘤并不少见,但巨大肝母细胞瘤罕见,而且由于肿瘤巨大,往往邻近重要血管,或者占据大部分肝脏,正常肝组织过少,患儿对麻醉及失血的耐受力差,手术风险大,能手术切除者不多。现将我院成功切除的1例小儿巨大肝母细胞瘤报道如下。1病例介绍患儿,女,5岁。因“右上腹痛、发热1d”入院。患儿2d前自觉右肩背部不适,不影响正常生活而未予注意,1d前出现右上腹疼痛,呈持续性胀痛,向右肩背部放射,无阵发性加剧,伴发热,体温38~39℃,无寒战,无恶心、呕吐,无腹泻,无皮肤、巩膜黄染,自觉乏力、食欲减退,以“肝占位并感染”收入院。既往史及家族史…     

胆内瘘的诊断与治疗85例分析

目的:探讨胆内瘘的诊断与治疗.方法:对85例胆内瘘的病例资料进行回顾性分析.结果:本组术前诊断率为22.7%(18/79),其余均在术中发现的.胆囊内瘘67例,胆间瘘11例,胆管内瘘4例,混合瘘3例.术后十二指肠漏,切口感染,胆漏各1例,术后败血症3例,均痊愈.结论:胆内瘘术前诊断较为困难,对长期胆囊结石患者尤其发现胆囊萎缩,囊区内胆汁暗区消失或肝内胆管系统积气应高度怀疑.对胆道疾病的及时诊断与治疗是减少胆内瘘发生和改善其预后的关键.     

shRNA/mrp1表达载体构建及其体外表达研究

目的 构建shRNA/mrp1的质粒表达载体并验证其体外表达效率.方法 根据业已筛选出的mrp1基因RNAi靶序列,按照pSUPER的设计要求合成64 bp的寡核苷酸序列,将其退火后形成双链并用双酶切法克隆到pSUPER得到质粒pSUPER-shRNA/mrp1,转染感受态大肠杆菌,筛选阳性克隆,经测序证实后扩增培养并以去内毒素试剂盒提取,然后转染HepG2/mrp1细胞,阴性载体为对照组,Real-time PCR、流式细胞术检测mrp1基因mRNA、MRP1表达、细胞耐药性等功能变化.结果 成功构建质粒载体pSUPER-shRNA/mrp1,经基因测序证实靶序列插入正确;HepG_2/mrp1组Ct值较GAPDH增加5.61,HepG_2/mrp1-si组Ct值比GAPDH升高11.35,mrp1基因的表达水平是耐药株HepG_2/mrp1的179分之一;实验组HepG_2/mrp1细胞和阴性对照组HepG_2/mrp1细胞的MRP表达率分别为11.2%和97.6%,差别有统计学意义(P<0.05);药物敏感试验显示HepG_2/mrp1细胞耐药倍数从45.0下降到1.2,相对逆转效率99.62%;细胞内DNR累积量也明显增加,与对照组比较(78.58%vs 38.44%,P<0.05).结论 成功构建质粒载体pSUPER-shRNA/mrp1,在HepG2/mrp1内稳定表达,逆转其耐药性.