异基因造血干细胞移植后细胞因子诱导的杀伤细胞治疗的研究进展

 异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）是许多恶性疾病的根治性疗法,但移植后复发仍是治疗失败和预后不良的主要原因,如何发挥移植物抗肿瘤/抗白血病效应(GVT/GVL)是保障造血干细胞移植（HSCT）成功和疗效的关键^［1］。移植后复发的治疗策略包括停用免疫抑制剂、化疗、供者淋巴细胞输注（DLI）和二次移植等。在多数情况下,采取化疗或减停免疫抑制剂的复发患者预后不良,DLI和二次移植能有效治疗复发或清除残留病灶,但存在引起严重的移植物抗宿主病(GVHD)、骨髓衰竭、治疗相关死亡等问题。目前,运用去除CD⁺₈细胞的DLI、抗原特异性细胞毒性T细胞和自然杀伤（NK）细胞等多种旨在降低急性GVHD（aGVHD）发病风险的过继性免疫治疗方法已成为研究热点^［2-4］,但限制这些过继性免疫疗法的一个重要因素是无法获得足量的免疫效应细胞^［5］。细     

内皮细胞及组织因子在GVHD中作用机制的初步研究

本研究检测人内皮细胞组织因子(TF)和IL-2的表达水平,以探讨使用免疫抑制剂后内皮细胞TF及IL-2表达水平的变化及内皮细胞损伤和TF异常表达在GVHD中的意义。体外混合人内皮细胞与异体人淋巴细胞及加入不同浓度的CsA共培养4-6小时后,用流式细胞术和RT-PCR检测内皮细胞中TF的表达水平,应用ELISA法检测上清中IL-2的水平。结果表明:体外混合人内皮细胞与异体人淋巴细胞共培养后,与未混合培养的相比内皮细胞表达TF增加(p0.01),并且在培养液中IL-2水平也相应增高(p0.01),在加入不同浓度的CsA之后,TFmRNA表达下降,相应的培养液中IL-2浓度也下降(p0.01)。结论:内皮细胞损伤与TF异常表达在骨髓移植后的GVHD中起关键的作用,其中受体的内皮细胞受到供体淋巴细胞刺激后高表达TF可能是GVHD发生、发展过程中的关键步骤。     

参芪扶正注射液对急性髓系白血病患者调节性T细胞作用的体外研究

目的研究参芪扶正注射液对完全缓解期急性髓系白血病患者调节性T细胞的影响,探讨其调节免疫功能的机制。方法免疫磁珠法分离18例急性白血病患者的CD4 CD25 T细胞,并在IL-2作用下与不同浓度参芪扶正注射液共同培养,倒置显微镜下计数细胞,AnnexinⅤ法检测其凋亡率,酶联免疫吸附法检测其分泌IL-10的水平,逆转录聚合酶链式反应法检测参芪扶正注射液对CD4 CD25 T细胞表达FOXP3的影响。结果参芪扶正注射液对急性白血病患者CD4 CD25 T细胞的生长和凋亡率无明显影响。加入参芪扶正注射液后CD4 CD25 T细胞分泌IL-10明显减少,表达FOXP3的水平亦减少,且具有剂量依赖关系。结论参芪扶正注射液能作用于化疗后完全缓解白血病患者的调节性T细胞,通过减少其分泌IL-10及表达FOXP3的水平,从而抑制调节性T细胞的功能,减弱它对机体免疫的抑制作用,增强患者的免疫功能。     

紫杉醇联合化疗治疗复发的晚期非小细胞肺癌40例临床研究

目的 初步探讨紫杉醇联合化疗治疗复发的晚期非小细胞肺癌的疗效。方法40例复治患者，每周紫杉醇方案4例，紫杉醇60mg／m^2静脉滴注3h，第1、8、15天，顺铂75mg／m^2第2天，每4周为一个周期；常规化疗36例，紫杉醇135mg／m^2静脉滴注311，第1大，顺铂75mg/m^2或卡铂300～350mg/m^2静脉输注第2天，每3～4周为一个周期，进行2～4周期。结果40例患者中3例死亡未评价疗效，1例因毒副反应术完成治疗,总有效率13．9％(5/36)。肿瘤相关症状改善率58．3％(21／36)。随访27例，中位生存期26．4周，1年生存率8％(4/36)。主要毒副反应为骨髓抑制和肌肉、关节疼痛。结论 紫杉醇用于二线治疗有一定疗效并能改善症状，但给药方式及剂量仍需研究，二线治疗的地位尚需明确。     

重度子痫前期患者胎盘绒毛外滋养细胞VCAM-1、E-selectin的表达及意义

目的探讨子宫胎盘界面绒毛外滋养细胞（EVCT）上血管细胞粘附分子（VCAM-1）及E-选择素（E—selectin）的表达特点以及与妊娠期高血压疾病的关系。方法采用免疫组织化学法观察20例重度子瘸前期胎盘（妊高征组）以及孕周相配的20例正常妊娠胎盘（对照组）子宫胎盘界面蜕膜中绒毛外滋养细胞VCAM-1、E-selectin的表达;光镜下计算EVCT阳性染色强度,并用医学图象分析软件测定EVCT阳性染色的平均光密度值（MOD）。结果与正常对照比较,子瘸前期患者子宫胎盘界面EVCT上VCAM-1、E-selectin的染色强度及MOD值均降低。差异有统计学意义（P〈0．05、P〈0．01）。结论子痫前期子宫胎盘界面EVCT上血管内皮细胞特性的粘附分子VCAM-1、E-selectin的表达减少。可能引起滋养细胞对子宫壁和血管的浸润性降低,导致子宫胎盘血管形成障碍。     

干细胞缺陷性疾病患者两种GPI-锚蛋白表达及临床意义

目的:观察阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、再生障碍性贫血(AA,再障)和骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血粒、红细胞表面两种GPI锚蛋白(GPI-AP)CD55、CD59的表达情况,探讨它们的临床意义。方法:152例患者,其中PNH组28例,再障组87例(其中重型再障25例,慢性再障62例),MDS组37例;健康对照组20名。以流式细胞术检测外周血粒、红细胞CD55、CD59的表达。结果:20名健康人外周血粒、红细胞两种GPI-AP阳性比例分别为98.9±1.2、99.2±0.8,稳定性最好;PNH组粒、红细胞两种GPI-AP的阳性比例均较正常组、再障组和MDS组显著下降(P均<0.01);其中频发组较不发作组粒细胞CD55、CD59的表达有显著差异(P<0.05),红细胞CD55、CD59的表达无显著差异(P>0.05);再障组和MDS组患者红细胞和粒细胞CD55、CD59的表达率与正常对照组差异无显著性(P均>0.05)。结论:以流式细胞术检测外周血粒、红细胞CD55、CD59有助于PNH、AA和MDS的诊断与鉴别诊断。     

黑色素瘤抗原基因3在K562细胞内质网应激反应性凋亡中的表达及意义

本研究旨在探讨黑色素瘤抗原基因-3（melanoma antigen gene-3,MAGE-3）在内质网应激反应性凋亡中的表达及意义.应用Ca^2＋荧光指示剂Fura-2/AM通过荧光分光光度计测定白血病细胞系K562及其多药耐药细胞株K562/A02经thapsigargin作用前后细胞内Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）变化;Western blot检测GRP78蛋白表达变化;荧光显微镜观察细胞凋亡形态变化;TUNEL法检测细胞凋亡率;RT-PCR检测MAGE-3基因mRNA水平表达变化.结果显示：①毒胡萝卜素（thapsigargin）诱导K562和K562/A02细胞[Ca^2＋]i出现不同程度的升高并呈一定的浓度依赖性,同时诱导GRP78蛋白表达增加以及K562和K562/A02细胞典型的凋亡改变,细胞凋亡率亦呈一定的浓度依赖性;在静息状态下K562/A02细胞[Ca^2＋]i较K562细胞明显增高;②毒胡萝卜素诱导K562和K562/A02细胞凋亡过程中,MAGE-3 mRNA表达明显下调;此外,与K562细胞比较,K562/A02细胞MAGE-3 mRNA表达明显上调.结论：①毒胡萝卜素在一定浓度范围内可诱导K562及其多药耐药细胞株K562/A02发生内质网应激反应性凋亡,并可能与MAGE-3表达下调有关或MAGE-3基因可能参与此凋亡途径的调控;②MAGE-3可能具有抗凋亡活性,K562/A02细胞多药耐药性可能与细胞[Ca^2＋]i增高和MAGE-3表达上调有关.     

Caspase抑制剂对冻存脐血造血干/祖细胞的保护效应

脐血因其独特的生物学特性、资源优势及临床移植适应证广泛，已成为造血干细胞移植（HSCT）的细胞来源之一。如何将脐血造血干／祖细胞进行有效的保存和复苏，降低其冻存损伤，是HSCT治疗的关键环节之一。随着对低温冻存理论的深入认识，人们发现细胞凋亡参与了细胞冷冻损伤的分子机制，造血干细胞凋亡严重损害其克隆形成能力和移植后的造血重建功能。     

内镜下球囊扩张治疗支气管结核气道狭窄的护理

支气管结核主要是侵犯主支气管,以左主支气管为多,由于结核的增殖结节病变以及病变修复中的瘢痕组织增生导致了气道重度狭窄[1]。患者主要表现为不同程度的咳嗽、高调喘鸣、呼吸困难,常以吸气性为主,伴有狭窄段远端段的肺部感染。过去我院以手术袖状切除治疗为主,因其并发症多,费用高,受到一定限制。2004年7月至2005年7月,我院开展了内下球囊扩张气道成形术治疗支气管结核气道狭窄患者10例,取得了较好效果,现将护理方面的体会总结如下。1临床资料1.1患者10例,男2例,女8例;年龄20~42岁。均为继发性肺结核合并支气管结核,其中涂阳加培阳2例,培…     

非亲缘异基因造血干细胞移植治疗白血病的临床研究

目的探讨非血缘关系异基因造血干细胞移植(URD-SCT)的疗效和相关并发症。方法22例白血病患者接受URD-SCT治疗。预处理方案:所有患者均采用马利兰联合环磷酰胺(BUCY2)或改良BUCY2预处理方案。移植物抗宿主病(GVHD)预防:22例均采用酶酚酸酯(MMF) 环孢素A(CsA) 短程甲氨蝶呤(MTX)方案,其中,4例用猪抗淋巴细胞球蛋白(ALG),16例于移植0 d和移植后4 d使用赛尼哌(CD25单抗),2例同时用ALG和CD25单抗。供者细胞回输:输注有核细胞中位数为4.5×108/kg,CD34 细胞中位数为4.3×106/kg。结果1例早期死亡不能评估,1例未植活,20例经血型、染色体及DNA多态性检测证实植活。急性Ⅱ~Ⅳ度GVHD 8例;慢性GVHD 8例:局限性3例,广泛性5例。感染:移植后100 d内感染者17例,病原学确诊为细菌感染3例,真菌感染2例,巨细胞病毒(CMV)感染6例。存活情况:100 d内死亡5例,100 d后死亡5例,其余患者无病存活。结论进一步降低移植相关并发症已成为URD-SCT需解决的首要问题。对无血缘供者的高危白血病患者,在严格控制移植适应证情况下,URD-SCT仍是治疗的重要手段之一。