siRNA沉默肝癌细胞报告基因瞬时表达效应的定量分析

目的研究小分子干扰RNA(siRNA)特异性抑制肝癌细胞基因瞬时表达的可行性和基因沉默效率。方法凝胶电泳成像观察siRNA体外孵育后的降解性,利用Cy3示踪观察其转染HepG2细胞后动力学变化。将报告基因(GFP)和siRNA共同瞬时转染至HepG2细胞,流式细胞仪、Western blot RT-PCR等分析特异性siRNA抑制报告基因瞬时表达的效应。结果siRNA在空白培养液中和转染细胞内可较长时间保持相对稳定。与空白和非特异siRNA相比,GFPsiR-NA明显抑制GFP蛋白产物和mRNA的表达(P<0·05)。结论特异性siRNA能高效沉默人肝癌细胞转染基因的瞬时表达,为基因治疗提供了一种新的治疗策略。     

用甲基噻唑蓝筛选抗铜绿假单胞菌药物方法的建立

目的:建立适合铜绿假单胞菌的定量、快速、体外高通量药物筛选方法。方法:优化甲基噻唑蓝法检测活细菌数量的实验条件,用MIC方法与MTT法比较2种已知抗生素的抗菌作用。结果:微量培养对细菌生长无影响,最佳MTT浓度和反应时间分别为5 mg·mL-1和1 h。在同一培养时间,菌浓度在1×107～1×1010CFU·mL-1范围内,甲臜的吸收度与菌浓度呈线性相关。用2种抗生素比较MIC方法与MTT法药敏测定的结果一致。结论:MTT微量法进行抗铜绿假单胞菌新药筛选操作简便,省时省力,成本较低,结果稳定,具有可重复性,适宜体外高通量药物筛选。     

冬凌草甲素诱导肝癌细胞凋亡中Bcl-2及端粒酶变化的研究

目的：探讨冬凌草甲素诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡中Bcl-2表达及端粒酶活性的变化。方法：以8,16,24,32 μmol·L^-1不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst 33258荧光染色法。Western blot 观察Bcl-2 ,Bax 表达变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERT mRNA表达水平的变化。结果：冬凌草甲素可诱导肝癌细胞BEL-7402发生细胞凋亡, 具有明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用60 h后,在Hoechst 33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征。凋亡过程中Bcl-2蛋白表达的降低和 Bax蛋白上调,同时端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论：冬凌草甲素在诱导肝癌细胞BEL-7402发生细胞凋亡过程中,能降低端粒酶hTERT mRNA的表达水平和端粒酶活性,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达的降低和促凋亡蛋白 Bax上调。     

胺碘酮与华法林的相互作用

胺碘酮增强华法林的抗凝作用,延长凝血酶原时间(PT)及国际标准化比值(INR),增加出血危险。本文综述了胺碘酮与华法林相互作用的机制,并提出了两药合用时的应对策略。     

紫癜汤治疗原发性血小板减少性紫癜100例

血小板减少性紫癜是出血性疾病中常见的一种,临床表现为皮肤的瘀点、瘀斑、黏膜及内脏出血,实验室特征除血小板减少,尚有出血时间延长、血块退缩不良及毛细血管脆性试验阳性,其中原因不明者称为原发性。本病多发生于儿童及青年,以青年女性为多,可分为急性和慢性两类,以慢性较为     

截短的食管癌相关基因ECRG4在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

目的本实验旨在构建ECRG4的原核表达载体，在大肠杆菌中表达并纯化ECRG4所编码的蛋白，为进一步研究奠定基础。方法将ECRG4基因序列前端编码疏水性跨膜区28个氨基酸的cDNA序列截去，再将截短的cDNA序列克隆到原核表达载体Pet30（＋）上，重组表达载体转化感受态表达菌株BL21（DE3），低浓度IPTG低温诱导融合蛋白的表达。采用Western blot鉴定目的蛋白的表达，使用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化。结果构建了截短的ECRG4．pET30a（＋）基因的原核表达载体，IPTG低温诱导得到大量可溶性蛋白，并且通过亲和层析纯化了重组融合蛋白。结论成功获得了高效表达的、具有一定的生物学活性的ECRG4原核表达产物，并为进一步研究ECRG4的结构和功能打下基础。     

肝脂消煎剂对脂肪肝大鼠血浆cAMP及DTD、LPO作用的研究

目的 :探讨肝脂消煎剂治疗脂肪肝药效学机制。方法 :采用高脂饮食加白酒灌胃建立大鼠脂肪肝模型 ,以东宝肝泰作对照 ,观察肝脂消煎剂对脂肪肝大鼠血浆cAMP及DTD、LPO的影响。结果 :肝脂消煎剂能提高脂肪肝大鼠血浆cAMP含量 ;降低肝脏sup中LPO含量 ,提高DTD活性 ;降低肝脏TC及肝功能酶活性 ,均明显优于东宝肝泰 (P <0 .0 5 )。其中降低肝脏TC方面尤为突出 (P <0 .0 1) ;同时病理结果显示 ,肝脂消煎剂改善大鼠肝细胞脂肪变性方面明显优于东宝肝泰 (P <0 .0 1)。结论 :肝脂消煎剂具有良好的降肝脂、防治脂肪性肝炎作用。     

基质金属蛋白酶诱导因子在先兆流产绒毛及蜕膜组织中的表达

目的探讨先兆流产时绒毛及蜕膜组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）的表达情况。方法选取30例妊娠早期发生先兆流产的妇女,30例自愿行负压吸引术终止妊娠的早期正常妊娠妇女,在获取绒毛及蜕膜组织后应用免疫组织化学技术对EMMPRIN进行检测。结果（1）先兆流产组绒毛表达的EMMPRIN强于正常妊娠组,且增强部位为细胞滋养层柱细胞与合体滋养细胞。（2）EMMPRIN在先兆流产组、正常妊娠组蜕膜组织中均呈阳性表达,且二者表达的EMMPRIN无明显差异。结论发生先兆流产时合体滋养细胞、细胞滋养层柱所表达的EMMPRIN增强可能通过上调绒毛及蜕膜组织中基质金属蛋白酶（MMPs）的水平,降解细胞外基质（ECM）,使绒毛剥离、蜕膜组织剥脱。     

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目的 研究肝移植术后细菌感染的流行病学规律。方法 回顾性分析175例病人180次原位肝移植术后细菌学资料。结果 肝移植术后感染率为62．8％（113／180），平均感染时间为术后第9天；共分离出菌株284株，其中革兰阴性（G^-)杆菌占54．6％（155／284）；最常见的G^-杆菌为铜绿假单胞菌，最常见的革兰阳性（G^-)球菌为粪肠球菌。易感器官依次为呼吸道，腹腔和胆道，感染率分别为37．3％（106／284），31．0％（88／284），21．1％（60／284）。结论 肝移植术后细菌感染率高，并以高度耐药菌为主，肝移植术后细菌感染部位与时间及菌群间有明显相关关系。