甘肃地区胆囊结石及胆囊切除与大肠癌相关性的队列研究

目的 探讨胆囊结石及胆囊切除与大肠癌之间的关系.方法 应用回顾性队列研究方法分析2000-2007年5573例胆囊结石和8187例非胆囊结石患者的资料,分为胆囊结石组(胆囊切除亚组、胆囊不切除亚组)和对照组;比较两组间、两亚组间大肠癌累积发病率以及胆囊结石组内大肠癌发病与性别、年龄、结石病程、大肠癌肿瘤部位、超重、高血压病、糖尿病、血脂、肝功能等因素的相关性.结果(1)大肠癌累积发病率胆囊结石组为0.43％(24/5573),对照组为0.13％(11/8187),两组比较,差异有统计学意义(x2=11.879,P=0.001).(2)大肠癌累积发病率胆囊结石组胆囊切除亚组为0.45％(17/3809),胆囊不切除亚组为0.40％(7/1764),两亚组间差异无统计学意义(x2 =0.069,P=0.793).(3)胆囊结石病程＜15年时大肠癌累积发病率为0.23％(8/3467),≥15年时为0.76％(16/2106),差异有统计学意义(x2=8.550,P=0.003).(4)伴有血清甘油三酯水平升高者,在胆囊结石组大肠癌病例中占20.83％(5/24),非大肠癌病例中占5.86％(325/5549),差异有统计学意义(x2 =9.621,P=0.002).(5)胆囊结石组大肠癌发病风险与性别、年龄、超重、高血压病、糖尿病、肝功能异常等因素无相关性(x2 =1.444,P=0.229;x2 =7.833,P=0.251;x2=1.151,P=0.283;x2=0.797,P=0.372;x2=0.939,P=0.332;x2=2.103,P=0.147).(6)胆囊结石组发生的大肠癌中直肠癌和右半结肠癌,分别占41％(10/24)、38％(9/24),左半结肠癌和多发性癌分别占17％(4/24)和4％(1/24).结论 胆囊结石症可能是大肠癌发生的高危因素之一;病程≥15年或血脂升高的胆囊结石患者,发生大肠癌的危险性增加;与胆囊结石症有相关性的大肠癌以直肠癌和右半结肠癌较多.     

MRSA耐药相关TG-TPase嵌合基因的原核表达与纯化

目的 设计、构建耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)耐药相关TGTPase嵌合基因,进行原核表达、纯化探索,为进一步利用其酶学活性建立抑制剂筛选系统奠定基础.方法 通过引物设计,从盐平板法筛选的MRSA菌株中分别克隆PBP2的TG基因片段和PBP2a的TP片段,分别克隆入T载体,对阳性重组子进行酶切/再连接,构建TG-TPase嵌合基因,经核苷酸测序鉴定正确的嵌合基因再亚克隆到pET22b,构建表达载体,转化Rosetta(DE3)plysS,用LPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行SDS-PAGE、质谱和Westem blotting鉴定.小量发酵重组菌,对嵌合基因表达产物进行初步纯化.结果 从13株临床分离的金葡菌中筛选出2株高耐药性MRSA菌株,用PCR法从中成功地克隆到青霉素结合蛋白PBP2的TG片段和PBP2a的TP片段,构建了TG-TPase嵌合基因及其原核表达载体,并在大肠埃希菌中表达,产量达菌体总蛋白的43%.融合蛋白纯化分析表明,嵌合蛋白以包涵体形式存在,在变性条件下经Ni-NTA亲和柱纯化,纯度达90%以上.结论 成功设计并构建了耐药性金葡菌TG-TPase嵌合基因及其重组表达工程菌,为进一步利用其酶学活性进行抗耐药性金葡菌抑制剂的筛选奠定基础.     

医学院校生物信息学实践教学初探

生物信息学是一门新兴的交叉学科,在生命科学研究的诸多方面发挥着重要的作用,掌握生物信息学的基本理论和方法对医学院学生具有重要的意义.针对医学院校生物信息学教学现状,分析了生物信息学实践课的重要性和教学中存在的问题,对具体的教学实施进行了初步探讨,为生物信息学课程教学提供了参考.     

2型猪链球菌89K致病岛进化途径分析

目的分析2型猪链球菌89K致病岛的结构特征,探索其进化历程。方法通过BLAST比对,获取89K致病岛的同源序列,构建其同源序列数据库;分析89K致病岛的碱基组成特征,寻找重组热点区域,并对89K进行分区;对各ORF进行功能预测,划分功能模块;对89K致病岛与其同源序列进行系统发育分析及共线性分析,推测其可能的进化历程。结果 89K致病岛可分为4个保守区,4个主要的非保守区及一段Tn916转座子,呈现多个异源序列相嵌合的结构特征。功能分析发现保守区基因主要参与致病岛的横向转移及其在宿主菌基因组中的稳定,保守区的基因呈现出进化上的一致性,且在某些菌株中保守区以连续状态存在。结论保守区在祖先状态时是一个连续整体,不同来源的非保守区经过多次水平转移和重组事件插入到保守区之间,形成了89K致病岛的嵌合结构。     

猪链球菌2型溶血素sly基因的表达及其产物的纯化和活性研究

目的 克隆并表达猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly),为筛选SS2疫苗保护性抗原奠定基础.方法 用PCR方法从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出溶血素基因片段,将目的 基因插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-sly.重组载体经限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定后,转化大肠埃希菌(E.coli Rosetta).IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白,鉴定目的 蛋白的免疫学活性以及溶血活性.结果　PCR扩增的sly基因长度约为1500 bp,经测序分析,插入载体的sly基因序列准确并保持了正确的读框.经IPTG诱导的目的 蛋白表达量约占总蛋白的30%,亲和层析纯化后,蛋白纯度达80%以上.Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的人血清发生特异性结合.溶血试验表明重组蛋白溶血素能使猪红细胞发生溶解,溶血价为256.结论 成功构建了表达载体pET30b-sly,该载体可在大肠埃希菌中表达,表达蛋白具有免疫反应原性及溶血活性.     

黏蛋白5AC、黏蛋白6与幽门螺杆菌感染和胃癌的关系

目前越来越多的研究表明,黏蛋白5AC(MUC5AC)、黏蛋白6(MUC6)的表达程度与幽门螺杆菌(Hp)感染和胃癌的发生密切相关,其中MUC5AC、MUC6的基因多态性成为研究热点之一。本文就MUC5AC、MUC6与Hp感染和胃癌的关系作一综述。     

郴州地区儿童血培养病原菌构成及耐药性分析

目的了解郴州地区儿童血培养病原菌分布及耐药情况。方法采集来自本院血培养标本检出的各类细菌,并对标本的送检科室、来源的患儿年龄及各类细菌的药敏实验数据进行分析。结果检出各类病原菌共计413株,其中,革兰阳性球菌216株、革兰阴性杆菌176株、真菌21株。检出细菌排名前5的病原菌分别为葡萄球菌属、肠球菌属、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、链球菌属。检出阳性菌株数量排前5名依次是新生儿重症监护病房(NICU)、新生儿科、呼吸科、儿科重症监护病房(PICU)、神经内科。检出患儿年龄主要集中于3岁以下的儿童及婴幼儿。革兰阳性球菌对青霉素G和红霉素的耐药率较高,其次是喹诺酮类药物,未发现耐万古霉素葡萄球菌和肠球菌。革兰阴性杆菌最敏感的药物是亚胺培南和美洛培南。真菌对5种临床常用抗真菌药物灵敏度均较高。结论本院儿童血培养检出病原菌以葡萄球菌为主,但是不同科室的构成比例并不一致;3岁以下儿童血流感染的可能性大;本院真菌检出率较高,占5.1%,与本院采用血培养真菌瓶有关;血培养分离菌株的耐药性较高,合理使用抗菌药物可以减少耐药菌的产生。     

铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的溶原化条件及稳定性研究

目的:溶原性噬菌体在宿主菌基因组中的整合和切割作用介导基因在宿主菌间的水平转移.文中研究铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的溶原化机制及生物学特性,为阐明噬菌体介导的基因转移和由此而产生的生物多样性提供实验依据. 方法:在不同的条件下利用该噬菌体感染其宿主菌-铜绿假单胞菌PA3,制备溶原菌基因组DNA,用在噬菌体基因组中没有酶切位点的Pst Ⅰ进行酶切,通过脉冲场电泳图谱确定最佳的溶原化条件.并通过噬菌体效价测定噬菌体PaP3对温度、PH值、离子强度及柠檬酸钠浓度等理化因素的敏感性. 结果:噬菌体PaP3的最佳溶原化培养条件为37℃,在NZYM培养基培养铜绿假单胞菌PA310h后,以20:1(宿主菌数目:噬菌体数目)的比例加入噬菌体PaP3感染24h.噬菌体PaP3对温度有一定的耐受性,对pH的适应范围较广,Ca2+与Mg2+可使PaP3的效价增加,而柠檬酸钠可抑制噬菌体生长. 结论:通过溶原菌基因组DNA的酶切确定了噬菌体PaP3的最佳的溶原化条件,并在基因水平上证明PaP3为溶原性噬菌体,在不同的理化因素下具有不同的稳定性.     

猪链球菌2型疫苗候选分子FBP的表达及免疫学活性研究

目的 表达SS2纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FBP),研究其免疫学活性,探讨其保护活性和作为疫苗候选分子的可能性.方法 用PCR技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出fbp基因片段,插入表达载体pET-30b( )中,构建重组表达载体pET30b-fbp.该载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化E.coli.Rosetta,IPIG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白.Western blot证实目的蛋白的分子量和免疫反应原性.重组蛋白免疫小鼠后收集多抗血清,间接ELISA检测其效价.结果 PCR扩增的fbp基因长度约为1700 bp,所构建重组表达载体酶切鉴定无误、测序证实碱基序列100%正确且保持正确读框.IPIG诱导表达,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的10%.亲和层析获得目的蛋白,纯度达80%以上.Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的病人血清发生阳性反应.重组蛋白免疫小鼠后血清效价达1:25600以上.结论 成功构建了表达载体pET30b-fbp,可在工程菌E.coli.Rosetta中表达;表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性.     

改革教学方法和教学手段，提高微生物学教学质量

探讨改革微生物学教学的方法、手段及效果。根据不同的微生物学课程内容,灵活运用“问题式”、“讨论式”、“学导式”等不同的教学方法,寓法于文,文法结合;充分利用多媒体网络为代表的现代教育技术手段,取得了明显的教学效果。